李江

貴州省職工醫(yī)院檢驗科 貴州貴陽 550025

肺結(jié)核患者痰標(biāo)本結(jié)核桿菌檢驗方法比較

李江

貴州省職工醫(yī)院檢驗科 貴州貴陽 550025

目的：探討肺結(jié)核患者痰標(biāo)本中結(jié)核桿菌檢驗的方法，提高臨床診斷準(zhǔn)確率。方法：對2014年1月-2014年6月我院結(jié)核門診接診的185例初診肺結(jié)核病患者采用膠體金法、涂片檢查法和PCR檢查法進(jìn)行痰液結(jié)核菌檢查。結(jié)果：膠體金法、涂片檢查法和PCR檢查法對于結(jié)核桿菌的診斷陽性率分別為34.9%、22.2%和48.6%，其中PCR檢查法陽性率最高。陽性率兩兩比較（P＜0.05），具有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論：PCR檢查法應(yīng)用于結(jié)核桿菌檢查檢驗，準(zhǔn)確率較高，有利于患者疾病的及時治療。

結(jié)核桿菌；檢驗；PCR檢查法

結(jié)核桿菌是目前傳染病中威脅人類健康的二號殺手，具世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計顯示，每年大概有 900 萬新發(fā)結(jié)核病病例，每年死亡病例高達(dá) 300 萬[1]。我國結(jié)核病疫情比較嚴(yán)重，是全球 22個結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一，年發(fā)病人數(shù)約130萬，占全球發(fā)病人數(shù)的14%。近年來，隨著抗生素的濫用，結(jié)核桿菌耐藥性的日益加重，人口流動性增加和交叉感染等，導(dǎo)致結(jié)核病發(fā)病率呈上升趨勢。目前，結(jié)核病的診斷方法較多，包括：X線、涂片法、病原菌培養(yǎng)法和聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）等，而這些方法優(yōu)缺點各異。我們對2014年1月-2014年6月我院結(jié)核門診收治的肺結(jié)核患者痰結(jié)核菌檢測方法進(jìn)行探討，現(xiàn)報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料：對2014年1月-2014年6月我院結(jié)核門診收治的185例結(jié)核患病者的臨床資料進(jìn)行分析，其中男127例，女58例，年齡18歲-68歲?；颊吲R床表現(xiàn)為盜汗、乏力、咳嗽和低熱等。所有患者均得以確診，診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《肺結(jié)核診斷和治療指南》[2]?；颊吒腥静课恢饕獮榉?、胸膜和淋巴結(jié)等。

1.2 檢測方法：

所有患者均在清晨取深呼吸后咳出的痰液。

1.2.1 膠體金法，采用結(jié)核桿菌檢測試劑盒進(jìn)行檢測，操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。主要步驟為，取約0.5 ml的痰液加入緩沖液后震蕩40s，放入37℃恒溫水浴鍋里孵育1h，加入緩沖液分離蛋白，插入試劑盒中的試紙，進(jìn)行檢測。

1.2.2 涂片檢查法，取痰標(biāo)本直接涂片，抗酸染色，通過顯微鏡檢檢測涂片上的結(jié)核菌。如果100個視野中，發(fā)現(xiàn)3-9條，即可確診為陽性[3]。

1.2.3 PCR檢查法，取1ml痰液于EP管中，13000 rpm離心 10 min，取上清，加生理鹽水洗滌1次，13000 rpm離心 10 min，取上清。于沉淀中加入 30ul TB 提取液，震蕩混勻，依次進(jìn)行 100℃，30 min；37 ℃ 10min的水浴，13000 rpm離心 10 min，取上清，PCR 反應(yīng)條件為95 ℃ 1 min、55 ℃ 30s、72 ℃ 1 min，循環(huán) 40 次。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理：采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 19.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。計數(shù)資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，計量資料比較采用t 檢驗，P＜0.05 表示具有統(tǒng)計學(xué)差異。

2.結(jié)果

檢測結(jié)果對比分析：膠體金法、涂片檢查法和 PCR檢查法對于結(jié)核桿菌的診斷陽性率分別為34.1%、22.2%和43.8%，其中PCR檢測法陽性率最高，涂片檢查法準(zhǔn)確率最低。準(zhǔn)確率兩兩比較（P＜0.05），具有統(tǒng)計學(xué)差異。見表1。

表1 檢測結(jié)果對比分析

3.討論

結(jié)核桿菌是一種抗酸陽性棒狀桿菌，屬于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群，是一類慢生的分枝桿菌群體。肺結(jié)核時一種呼吸系統(tǒng)疾病，目前，其已成為傳染病中威脅人類健康的二號殺手，當(dāng)病情不及時治療時，疾病可向腸道、腎臟和肝臟轉(zhuǎn)移等。中國結(jié)核疫情嚴(yán)重，具有感染人數(shù)多、發(fā)病人數(shù)多、新發(fā)患者多、死亡人數(shù)多、農(nóng)村患者多和耐藥者多等特點?？ń槊缡穷A(yù)防結(jié)核病的常用藥物，其對預(yù)防兒童腦膜炎結(jié)核、栗粒性結(jié)核等嚴(yán)重的結(jié)核病有預(yù)防作用，但對成人肺結(jié)核保護(hù)效率據(jù)文獻(xiàn)報道18%到80%不等，對潛伏感染結(jié)核幾乎無保護(hù)作用[4]。盡管卡介苗得到廣泛應(yīng)用，但面對全球結(jié)核病疫情的蔓延卻無能為力。因此，臨床及時的診斷和治療對于生命健康至關(guān)重要。

結(jié)核病診斷應(yīng)根據(jù)患者感染部位的不同而提取不同的標(biāo)本，一般包括：痰液、尿、胸水、腦脊液、糞、心包液和組織勻漿等[5]。標(biāo)本的收集、保存及檢驗的及時性，都是影響診斷結(jié)果的重要因素。大量臨床研究表明，對于肺結(jié)核患者而言，清晨所獲取的痰液污染率較低，能夠有效說明患者疾病狀況。因此，我們選取清晨深呼吸后咳出的痰液作為檢測標(biāo)本。

目前，結(jié)核病診斷方法較多，包括X線、涂片法、病原菌培養(yǎng)法和聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）等。膠體金法是通過定性檢測結(jié)核菌的分泌性蛋白質(zhì)而對疾病進(jìn)行診斷。其原理為，將抗結(jié)核菌的分泌性蛋白純化后包被在膠體金上，當(dāng)樣品中含有結(jié)核菌分泌性蛋白時，先和包被的膠體金標(biāo)記物結(jié)合，產(chǎn)生反應(yīng)，通過與試紙上的質(zhì)控線進(jìn)行對比，即可判斷。涂片檢查法是最普遍的方法，通過在痰液中檢測結(jié)核桿菌對疾病進(jìn)行判定，具有操作簡便、費用低廉和易掌握等特點而得到臨床的廣泛應(yīng)用，是檢驗結(jié)核病的“金標(biāo)準(zhǔn)”[6]。但是，大量臨床報道顯示，其靈敏度較差，敏感性低，準(zhǔn)確率低，影響因素多，易受到檢驗人員人為差異、患者病情和痰液狀況的影響。PCR檢查法是一種以核酸生物化學(xué)為基礎(chǔ)的分子生物學(xué)診斷技術(shù)，具有靈敏度高、特異性好和快速高效等特點，而得到了臨床的廣泛運用[7]。其通過加入一條與靶基因序列互補的核苷酸探針，當(dāng)標(biāo)本出現(xiàn)擴(kuò)增時，通過檢測熒光的變化，即可對診斷結(jié)果做出判斷。但相對于基層醫(yī)院，PCR檢查法投入儀器成本較高。

為探討結(jié)核患者痰結(jié)核桿菌檢驗的方法，提高臨床診斷準(zhǔn)確率。我們對2014年10月-2016年10月我院結(jié)核門診收治的185例結(jié)核桿菌患者采用膠體金法、涂片檢查法和 PCR檢查法對患者痰液進(jìn)行檢查。結(jié)果顯示，膠體金法、涂片檢查法和 PCR檢測法對于結(jié)核桿菌的檢測陽性率分別為34.1%、22.2%和43.8%，其中PCR檢查法陽性率最高。準(zhǔn)確率兩兩比較（P＜0.05），具有統(tǒng)計學(xué)差異。

綜上所述，PCR檢查法應(yīng)用于結(jié)核桿菌檢查，陽性率較高，可為疾病診斷提供可靠的依據(jù)，有利于肺結(jié)核患者疾病的及時診斷和治療，對于改善肺結(jié)核患者的預(yù)后具有重要的作用。

[1]World Health Organization (WHO).WHO Report 2008-Global tuberculosis control- surveillance, planning,financing [J].World Health Organization; 2008.

[2]中華醫(yī)學(xué)會結(jié)核病學(xué)分會.肺結(jié)核診斷和治療指南[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2001，24（2）：70-74.

[3]楊光武.不同檢驗方法在肺結(jié)核早期診斷中的應(yīng)用[J].航空航天醫(yī)學(xué)雜志，2012，23（3）：309-310.

[4]吳雪瓊.新型結(jié)核病疫苗的研究現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢[J].2012，34（3）：133-135.

[5]朱杰.肺結(jié)核患者痰結(jié)核桿菌的實驗室檢查分析[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2016，16（23）：129-130.

[6]楊巍巍.結(jié)核患者痰結(jié)核桿菌檢驗的方法探討[J].中國醫(yī)藥指南，2013,11（4）：258-259.

[7]辛茶香，胡銀英，熊麗.三種檢測方法對結(jié)核患者標(biāo)本中結(jié)核分枝桿菌檢出率的比較[J].江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008，48（1）：92-93.

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1672-5018（2016）11-246-01

李江，男，貴州省職工醫(yī)院檢驗科，郵編：550025，主要從事醫(yī)學(xué)檢驗，副主任技師。