趙曉玲，梁曉霞

(山西省中醫(yī)院，山西 太原　030012)

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5-羥色胺受體和轉(zhuǎn)運體在正常和妊娠期糖尿病孕婦胎盤的表達(dá)及意義

趙曉玲，梁曉霞

(山西省中醫(yī)院，山西 太原030012)

[摘要]目的：檢測5-羥色胺受體(5-HT(2A)R)和轉(zhuǎn)運體(SERT)在正常孕婦和妊娠期糖尿病孕婦胎盤中的表達(dá)并探討其在妊娠期糖尿病發(fā)生中的意義。方法：使用免疫印跡法檢測46例妊娠期糖尿病孕婦胎盤和39例同期分娩的正常孕婦胎盤中5-HT(2A)R和SERT蛋白的表達(dá)。結(jié)果：妊娠期糖尿病組的孕前體重指數(shù)高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意(P<0.05)。妊娠期糖尿病組孕婦胎盤組織中的SERT和5-HT(2A)R蛋白表達(dá)量顯著低于對照組(P<0.05)。在妊娠期糖尿病組孕婦中，孕前BMI≥30 kg/m2的孕婦胎盤組織中SERT和5-HT(2A)R蛋白表達(dá)量低于BMI<30 kg/m2的孕婦(P<0.05)。結(jié)論：SERT和5-HT(2A)R蛋白表達(dá)水平的下調(diào)與妊娠期糖尿病的發(fā)生密切相關(guān)。

[關(guān)鍵詞]妊娠期糖尿??；SERT；5-HT(2A)R；免疫印跡

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)是一種常見的妊娠并發(fā)癥，在孕婦中的發(fā)生率為3%～5%,其發(fā)病機理尚不清楚。妊娠期糖尿病對孕婦、胎兒、新生兒有一定的不利影響，可以導(dǎo)致圍產(chǎn)期死亡的風(fēng)險增加，以及巨大兒、先天性畸形和新生兒呼吸窘迫綜合癥等發(fā)生[1]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)可能參與了妊娠期糖尿病的發(fā)生[2]。本研究使用免疫印跡法檢測了46例妊娠期糖尿病孕婦和39例同期分娩的正常孕婦胎盤組織中的轉(zhuǎn)運體(serotonin transporter，SERT)和5-HT2AR(5-hydroxytryptamine (2A) receptor)蛋白表達(dá)量，探討妊娠期糖尿病對胎盤組織中SERT和5-HT2AR蛋白表達(dá)量的影響。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2013年6月～12月在呂梁市人民醫(yī)院分娩并且有完整臨床資料的妊娠期糖尿病患者46例為妊娠期糖尿病組，同時選取同期分娩的正常糖代謝的孕晚期孕婦39例作為對照組。妊娠期糖尿病組和對照組的平均年齡分別為(28.10±3.68)歲和(27±3.97)歲。平均孕前體重指數(shù)分別為(30.67±2.68)kg/m2和(26.78±5.34)kg/m2，平均孕齡分別為(38.10±2.03)周和(38.6±1.89)周。妊娠期糖尿病組和對照組新生兒平均體重分別為(3 527±179)g、(3 493±164)g，平均身高為(49.78±2.08)cm和(49.23±1.23)cm。妊娠糖尿病組和對照組胎盤平均重量分別為(0.58±0.11)kg和(0.69±0.24)kg。兩組間年齡、孕周、新生兒身高、胎盤重量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。兩組孕婦均排除了孕前糖尿病史，妊娠期糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)參考第7版婦產(chǎn)科學(xué)[3]。

1.2主要試劑

多克隆抗體5-HT2AR和SERT購自美國Cruz公司，內(nèi)參GAPDH購自KANGCHEN公司。二抗通用型polymer Kit購自北京中杉金橋公司。

1.3檢測方法

采用免疫印跡法(western blot)對入組孕婦的胎盤進(jìn)行檢測。同為蛋白水平的檢測，免疫印跡法比免疫組織化學(xué)法更容易定量。首先從組織中提取蛋白，稱取150 mg組織絞碎，按1∶5加入WIP組織裂解液(北京博奧森公司)，勻漿至液體渾濁，4℃ 1 500轉(zhuǎn)/min離心10 min，取上清液。以每個電泳道15 μg蛋白量加入十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)，電泳完畢后將凝膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。轉(zhuǎn)膜結(jié)束后用5%胎牛血清封閉硝酸纖維膜，1 h后棄封閉液加入一抗(分別為鼠抗人5-HT2AR多克隆抗體(1∶50)，鼠抗人SERT多克隆抗體(1∶50)，4℃過夜。TBST洗膜3次，加入二抗(通用型polymer Kit,1∶1 000)，置于室溫1 h后，用TBST洗膜3次，再將NC膜置于二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色液中，待NC膜上顯示清晰的條帶之后，用水終止顯色。5-HT2AR蛋白和SERT蛋白分別以55KD和90KD處出現(xiàn)顯色條帶為陽性，并用Bandscan軟件對顯影條帶進(jìn)行灰度分析，將5-HT2AR和SERT與GAPDH灰度值的比值作為其蛋白的相對表達(dá)水平。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

2結(jié)果

2.1兩組孕前體重指數(shù)比較

妊娠期糖尿病組和對照組的平均孕前體重指數(shù)分別為(30.67±2.68)kg/m2和(26.78±5.34)kg/m2，妊娠期糖尿病組的孕前體重指數(shù)高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意(t=9.821，P<0.05)。

2.2兩組5-HT2AR蛋白的表達(dá)

免疫印跡實驗中，與5-HT2AR抗體反應(yīng)后，在相對分子量為55KD處，出現(xiàn)了目的蛋白的表達(dá)，妊娠期糖尿病組中5-HT2AR蛋白的表達(dá)顯著低于對照組(P<0.05)。免疫印跡實驗中，與SERT抗體反應(yīng)后，在相對分子量為90KD處，出現(xiàn)了目的蛋白的表達(dá)，妊娠期糖尿病組中SERT蛋白的表達(dá)顯著低于對照組(P<0.05)，見表1。

表1　兩組5-HT2AR、SERT蛋白表達(dá)量的比較

2.35-HT2AR和SERT的蛋白表達(dá)與妊娠糖尿病孕婦孕前體重指數(shù)的關(guān)系

按照衛(wèi)生部中國成人超重和肥胖癥預(yù)防控制指南推薦的肥胖標(biāo)準(zhǔn)(體重指數(shù)≥30 kg/m2者為肥胖)，把妊娠期糖尿病組分為孕前BMI≥30 kg/m2的孕婦和BMI<30 kg/m2孕婦。兩組的5-HT2AR、SERT的蛋白表達(dá)情況見表2。

表2　5-HT2AR、SERT的蛋白表達(dá)與妊娠糖尿病孕婦

3討論

在GDM的情況下，母體過高的血糖水平引起了胎盤5-HT轉(zhuǎn)運系統(tǒng)(SERT，5-HT2AR)對5-HT的轉(zhuǎn)運下調(diào)[4]。 胎盤滋養(yǎng)層直接暴露于母體環(huán)境中，并且形成了母體和胎兒之間葡萄糖轉(zhuǎn)運的屏障。葡萄糖通過屏障的主要機制是順濃度梯度的易化擴散，其由鈉離子依賴的葡萄糖轉(zhuǎn)運體介導(dǎo)。而5-HT2AR的激活有可能使得葡萄糖轉(zhuǎn)運體的表達(dá)增加[5]。作為一種代償機制，GDM患者的胎兒血糖過高會引起其通過下調(diào)5-HT2AR來減少葡萄糖的攝取。 因此，GDM患者胎盤5-HT2AR表達(dá)下調(diào)可能與胎兒通過屏障吸收葡萄糖的水平下降有關(guān)。但是5-HT是否通過5-HT2AR調(diào)節(jié)胎兒血糖的攝取尚不明確。

GDM患者的血清5-HT水平下降，說明5-HT可能通過5-HT2AR來調(diào)節(jié)GDM患者的血糖濃度[6]。5-HT可以調(diào)節(jié)食欲和能量平衡，與肥胖有關(guān)系，而肥胖是GDM的一個重要的危險因素。因此，5-HT2AR和SERT表達(dá)的變化可能與肥胖有一定的關(guān)系。 最近的研究顯示[7,8]，5-HT對血糖的穩(wěn)定的調(diào)節(jié)與其對體重的影響是相互獨立的。

SERT蛋白表達(dá)的減低可能通過改變母體血清5-HT的水平而影響胎兒的神經(jīng)發(fā)育。并且可能通過改變母體血清5-HT水平而影響胎盤血管的收縮，從而產(chǎn)生對母體的不利影響。如Cool等[9]的研究結(jié)果顯示，SERT位于胎盤的滋養(yǎng)層細(xì)胞上并且對妊娠婦女的血5-HT水平進(jìn)行調(diào)控，以維持流經(jīng)胎盤的血流量的穩(wěn)定，同時也向胚胎提供5-HT。

本研究顯示，與正常孕婦的胎盤相比，妊娠期糖尿病孕婦的胎盤中5-HT2AR、SERT蛋白的表達(dá)顯著降低，提示5-HT2AR、SERT蛋白表達(dá)水平的降低與妊娠期糖尿病的發(fā)病有關(guān)。本研究還顯示，與孕前體重指數(shù)<30 kg/m2的妊娠期糖尿病孕婦的胎盤相比，孕前體重指數(shù)≥30 kg/m2的妊娠期糖尿病孕婦的胎盤中5-HT2AR、SERT蛋白的表達(dá)也明顯降低。推測5-HT2AR、SERT蛋白表達(dá)水平的降低與肥胖有關(guān)，而肥胖是GDM的一個重要的危險因素。妊娠期糖尿病孕婦的孕期平均體重指數(shù)高于對照組也印證了這個說法。

綜上所述，5-HT和SERT系統(tǒng)在妊娠期糖尿病胎盤中功能的改變、SERT和5-HT2AR蛋白表達(dá)水平的下調(diào)可能與GDM的發(fā)病密切相關(guān)，其表達(dá)異常可能參與了GDM的發(fā)生發(fā)展。這對于妊娠期糖尿病發(fā)病的研究和疾病的防治具有重要的意義。

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本文編輯：王霞

Expression and Signification of Serotonin Receptor (5-HT2AR) and Serotonin Transporter(SERT)in Gestational Diabetic Placenta and Normal Controls

ZHAO Xiaoling,LIANG Xiaoxia

(ShanxiTraditionalChineseMedicalHospital,Taiyuan030012,Shanxi,China)

[ABSTRACT]Objective:To investigate the expression and its signification of serotonin receptor (5-HT(2A)R) and serotonin transporter (SERT)in gestational diabetic placenta. Methods:5-HT(2A)R and SERT protein expression levels were evaluated by westernblot in 39 cases of normal controls and 46 pregnant women with GDM in the placenta. Results: The mass index of pregnant women with GDM before pregnancy was higher than the control group. There was statistical significant difference (P<0.05).There was significantly low level of 5-HT(2A)R and SERT protein expression in GDM women's placenta than in the controls (P<0.05). The expression of 5-HT(2A)R and SERT in the placenta of those GDMS whose BMI exceeded 30 kg/m2 was lower than that in those GDMS whose BMI was less than 30 kg/m2 (P<0.05).Conclusions: It is suggested that the lower level of expression of SERT and 5-HT(2A)R proteins plays a role in the aetiology of GDM.

[KEYWORDS]gestational diabetes mellitus (GDM); SERT;5-HT(2A)R; westenblot

[中圖分類號]R714.25

[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A

[文章編號]1671-0126(2016)01-0019-03

[作者簡介]趙曉玲，女，主管護(hù)師，從事臨床檢驗工作