王中興,劉浩,吳麗娟,高水灣,李麗華,鄒建話*
(深圳市寶安區(qū)婦幼保健院,1. 檢驗科;2. 生殖健康科,深圳 518133)
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男性不育癥患者中常見病原體感染對精液參數(shù)的影響
王中興1,劉浩2,吳麗娟1,高水灣1,李麗華1,鄒建話1*
(深圳市寶安區(qū)婦幼保健院,1. 檢驗科;2. 生殖健康科,深圳518133)
【摘要】目的分析存在沙眼衣原體(CT)、解脲脲原體(UU)和細(xì)菌感染的男性不育癥患者的精液參數(shù),探討相關(guān)病原體感染與男性不育的關(guān)系,為臨床診治提供一定依據(jù)。方法收集2013年7月至2015年6月于我院生殖健康科門診就診,存在相關(guān)病原體感染的男性不育癥患者456例為病例組,包括CT感染者146例,UU感染者165例,細(xì)菌感染者94例,混合感染者51例;選擇同期來我院體檢、有正常生育史的男性176例為對照組。全部研究對象均通過手淫法采集精液,行精液常規(guī)檢測和CT核酸檢測、UU及細(xì)菌培養(yǎng)。結(jié)果合并CT、UU或細(xì)菌感染的男性不育癥患者,其精液體積、精子濃度與正常生育男性精液比較,無顯著性差異(P均>0.05);前向運動精子百分率、非前向運動精子百分率、精子總活力、正常形態(tài)精子百分率則顯著低于正常生育男性(P均<0.05)。結(jié)論CT、UU或細(xì)菌感染,會導(dǎo)致精子活力下降、畸形率上升,繼而引起男性不育。 警惕IVF-ET后增大的卵巢及其囊腫的蒂扭轉(zhuǎn),珍貴的妊娠更需要及時識別并發(fā)癥,早期處理增加保留卵巢的機會,同時并不顯著增加流產(chǎn)率。
【關(guān)鍵詞】男性不育;沙眼衣原體;解脲脲原體;細(xì)菌感染;精液參數(shù) IVF-ET;卵巢扭轉(zhuǎn);漿液性囊腺瘤;黃體囊腫
近年來男性不育癥的發(fā)病率呈增長趨勢,其中一個主要原因就是男性精液質(zhì)量下降[1],精液質(zhì)量下降主要體現(xiàn)在精子活動力降低、精子畸形率增加等。精液實驗室檢查是目前男性不育癥患者最基本的檢查手段[2]。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為精液質(zhì)量的下降與全球性環(huán)境狀況惡化、生活方式改變、男性生殖系統(tǒng)疾病等因素密切相關(guān)[3]。沙眼衣原體(CT)、解脲脲原體(UU)和細(xì)菌感染是常見的男性泌尿生殖系統(tǒng)感染病原體。從精液中檢測相關(guān)的感染性病原體,已普遍用于臨床診斷。我院對男性不育癥患者常規(guī)進行精液常規(guī)參數(shù)分析和相關(guān)病原體檢測。本研究回顧性分析我院生殖健康科2013年7月至2015年6月就診的男性不育癥患者的臨床資料,選取存在CT、UU、細(xì)菌感染和混合感染的患者,分析其精液實驗室檢測結(jié)果,并與無上述病原體感染、有正常生育史的男性精液進行比較,分析泌尿生殖系統(tǒng)常見病原體感染對精液參數(shù)的影響,為男性不育癥的臨床診斷和治療提供參考依據(jù)。
一、資料與方法
1. 研究對象:收集2013年7月至2015年6月于我院生殖健康科門診就診的男性不育癥患者精液標(biāo)本852份,納入病例組456份,患者年齡20~46歲,平均33歲,不育年限1~5年,平均2.5年。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)男性不育癥患者,即夫妻婚后同居1年以上,未采取任何避孕措施,女方未孕者;(2)女方生殖系統(tǒng)常規(guī)檢查正常,僅由男方原因?qū)е屡讲辉校?3)生殖系統(tǒng)病原體檢測提示存在CT、UU或細(xì)菌感染者。排除標(biāo)準(zhǔn):近期外傷史、性功能障礙、遺傳性疾病家族史、睪丸及生精功能異常者。
選擇同期來我院體檢、有正常生育史的男性為志愿者,征求對方意見并簽署知情同意書后留取精液標(biāo)本,行常規(guī)參數(shù)分析和常見病原體檢測,病原體檢測陰性的標(biāo)本納入對照組,最終納入176份精液標(biāo)本。該組男性年齡22~42歲,平均36歲。
2. 精液標(biāo)本采集:所有研究對象均禁欲2~7 d,禁欲期間忌煙、酒和刺激性飲料,保持良好睡眠。取精前排尿,消毒雙手及外生殖器后,采用手淫法收集全部精液于專用取精杯中。標(biāo)本采集后,立即置于37℃水浴溫箱,待精液液化后及時進行精子濃度、活動率、活動力、畸形率以及其它項目檢測,同時留取標(biāo)本進行CT-DNA檢測、UU及細(xì)菌培養(yǎng)。
3. 實驗室檢測:(1)精液常規(guī)參數(shù)分析:按照世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的精液參數(shù)檢測方法[4],進行精液體積、酸堿度(pH值)測定,采用計算機輔助精液分析儀(CASA,上海偉力)分析精子濃度(×106ml)、前向運動精子百分率、非前向運動精子百分率、精子總活力、精子總活率、曲線運動速度、直線運動速度等指標(biāo)。(2)精子形態(tài)學(xué)分析:采用深圳市博銳德生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的精液染色試劑盒(Diff-Quik快速染色法)進行精子涂片染色,鏡下觀察計數(shù)精子200個左右,按照WHO人類精液檢查與處理實驗室手冊(第5版)標(biāo)準(zhǔn)[4]鏡下評判并計算正常形態(tài)精子百分率。(3)CT-DNA檢測:CT-DNA采用熒光定量PCR方法進行檢測,所用試劑由中山大學(xué)達(dá)安基因診斷中心生產(chǎn)。取1 ml液化后的精液,嚴(yán)格按照說明書步驟提取核酸后進行CT-DNA檢測,檢測儀器為ABI7500熒光定量PCR儀(ABI,美國)。因試劑盒說明書中未列出引物序列,故本文未能提供。PCR程序如下:93℃預(yù)變性2 min,93℃ 45 s→55℃ 60 s,10個循環(huán),93℃ 30 s→55℃ 45 s,再行熒光檢測,做30個循環(huán)。結(jié)果判斷:Ct(循環(huán)閾值)=30為陰性,Ct<27為陽性,30>Ct≥27為灰度區(qū),需重復(fù)試驗,若Ct<30則為陽性。利用試劑盒中提供的陰、陽性質(zhì)控作為質(zhì)量控制物。(4)UU培養(yǎng):按照UU培養(yǎng)試劑盒(購自珠海益民生物工程制品廠)操作說明書進行操作,無菌吸取200 μl精液于支原體液體培養(yǎng)基中,37℃恒溫培養(yǎng),每隔24 h觀察培養(yǎng)液顏色變化,直至接種后72 h進行結(jié)果判定。陽性判斷依據(jù)試劑盒說明書,使用顏色對照卡進行觀察,培養(yǎng)液顏色由黃變紅表明有UU生長,視為陽性;不變色則表明無UU生長,視為陰性。(5)細(xì)菌培養(yǎng):無菌操作吸取已液化的精液100 μl接種至羊血瓊脂平板、巧克力平板和麥康凱平板中,培養(yǎng)基均由廣州迪景微生物科技有限公司提供,四區(qū)劃線分離,置35℃的CO2恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24~48 h。觀察菌落形態(tài)后涂片進行革蘭染色,同時依據(jù)各菌屬特征進行分離培養(yǎng)。細(xì)菌鑒定采用美國BD Phoenix全自動細(xì)菌鑒定儀和法國梅里埃API手工鑒定試條,嚴(yán)格按照說明書進行。
4. 統(tǒng)計學(xué)分析:應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件包對
數(shù)據(jù)進行分析處理,組間比較采用秩和檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
二、結(jié)果
1. 一般資料:852例男性不育癥患者中,存在相關(guān)病原體感染的456例,感染率為53.52%。存在病原體單純感染的405例,其中CT感染146例(感染率17.14%),UU感染165例(感染率19.37%),細(xì)菌感染94例(感染率11.03%);存在CT、UU或細(xì)菌中的兩種或3種病原體感染的視為混合感染,混合感染51例(感染率5.99%)。細(xì)菌感染致病菌中以大腸桿菌居多(38/94,40.43%),金黃色葡萄球菌次之(18/94,19.15)(表1、2)。
2. 病例組與對照組精液常規(guī)參數(shù)比較:各感染組男性不育癥患者精液體積、精子濃度分別與對照組進行比較,無顯著性差異(P均>0.05),而前向運動精子百分率、非前向運動精子百分率、精子總活力、正常形態(tài)精子百分率則顯著低于對照組(P均<0.05)(表3)。
表1 852例男性不育患者精液中常見病原體的感染率
表2 94例男性不育癥患者精液分離的細(xì)菌種類
注:*指β鏈球菌、腐生葡萄球菌、腸球菌等
表3 病例組與對照組精液常規(guī)參數(shù)比較 (x-±s)
注:與對照組比較,*P<0.05
三、討論
近年來,隨著男性不育癥發(fā)病率的逐漸增高,男性不育癥在生殖領(lǐng)域引起廣泛關(guān)注。導(dǎo)致男性不育癥的因素繁多復(fù)雜,最常見的包括生殖系統(tǒng)感染、免疫功能異常、精索靜脈曲張、內(nèi)分泌功能障礙、生殖器官發(fā)育異常、性功能障礙、輸精管阻塞、遺傳性疾病以及環(huán)境理化因素等[5]。男性生殖道感染已經(jīng)成為男性不育,特別是繼發(fā)性不育最重要的原因之一,預(yù)防和控制生殖道感染已經(jīng)成為男性不育領(lǐng)域的關(guān)注重點。引起男性生殖道感染的主要病原微生物有衣原體、支原體、細(xì)菌、真菌、病毒、滴蟲等。
CT是一類介于病毒和立克次體之間的原核細(xì)胞型微生物,是引起無菌性前列腺炎、特發(fā)性睪丸炎、非淋菌性尿道炎等生殖道感染的主要病原體,容易引起男性不育。CT感染后,對睪丸和附睪產(chǎn)生破壞作用,從而影響精子的發(fā)生與成熟。另外,CT還可吸附于精子表面,穿透進入精子內(nèi)部,形成網(wǎng)狀體,并大量繁殖,造成精子膜和頂體的破壞。且發(fā)生CT感染后,容易引起慢性前列腺炎,降低精漿中酸性磷酸酶的活性,導(dǎo)致精子的活性和正常精子形態(tài)百分率明顯降低[6]。已有研究報道,不育癥與生殖系統(tǒng)衣原體感染密切相關(guān)[7]。本研究結(jié)果顯示男性不育癥患者感染CT后,前向運動精子百分率、非前向運動精子百分率、精子總活力都會有不同程度地下降,精子畸形率上升。
UU是介于細(xì)菌和病毒之間能獨立生活的、無細(xì)胞壁的原核細(xì)胞微生物。UU感染對精液質(zhì)量的影響已有大量文獻(xiàn)研究,但一直未達(dá)成共識,其中認(rèn)為對精子活動產(chǎn)生抑制和導(dǎo)致精子形態(tài)改變的觀點居多[8-9,10-12]。有研究發(fā)現(xiàn),UU影響精子質(zhì)量的機制包括以下幾個方面:吸附于精子表面,并與精子表面的特異性結(jié)合位點結(jié)合從而使精子發(fā)生卷曲畸形,導(dǎo)致精子活力下降;誘導(dǎo)機體產(chǎn)生抗精子抗體,使精子凝集,干擾精子運動,從而影響精子活力;產(chǎn)生代謝產(chǎn)物NH3和H2O2,干擾精子的正常代謝,造成精子損傷,存活率也隨之降低[13]。本研究結(jié)果顯示UU感染男性不育患者精液常規(guī)參數(shù)中精子活動率明顯改變、正常形態(tài)精子百分率降低。
雖然生殖道本身會寄存一些非致病菌,但細(xì)菌感染在生殖道病原體感染中也十分常見。生殖道細(xì)菌感染中,大腸桿菌(E.coli)感染是較為常見的一種,它能吸附在人類精子的頭部和尾部,產(chǎn)生交叉抗原,引起精子凝集,影響精子運動,并能殺死精子。E.coli也會引起睪丸炎、附睪炎、輸精管炎、前列腺炎等生殖泌尿系統(tǒng)的炎癥,從而導(dǎo)致男性不育[14]。本研究結(jié)果顯示細(xì)菌感染的男性不育癥患者,精子活力和正常形態(tài)精子百分率較對照組顯著降低。這與李文郎等[15]文獻(xiàn)報道的一致。
本研究中男性不育癥患者常見病原體感染率53.52%,與之前文獻(xiàn)[5]報道的數(shù)據(jù)相當(dāng);其中,CT感染率17.14%,與之前顏丹等[16]、楊麗等[17]報道的數(shù)據(jù)相近。本研究中UU感染率為19.37%,細(xì)菌感染率為11.03%,與國內(nèi)一些學(xué)者的報道[8,18-19]有一定出入,這可能與取材標(biāo)本差異大、地區(qū)區(qū)域等有關(guān)。本研究因執(zhí)行力度不夠,未能完全按照生殖道感染相關(guān)研究使用的“兩杯”或“四杯”試驗的取材法(按摩前后分別取材)進行,因此研究結(jié)果可能存在一定的偏倚,這在臨床工作中值得進一步探討。
綜上所述,CT、UU或細(xì)菌感染都會導(dǎo)致精子細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變,抑制精子運動,破壞精子。而男性精子濃度和活力是影響生育能力的主要因素,只有一定數(shù)量、正常形態(tài)的前向運動精子抵達(dá)輸卵管壺腹部,才能確保受精并形成受精卵,實現(xiàn)成功妊娠[20]。本研究結(jié)果提示,男性不育癥患者中合并CT、UU或細(xì)菌感染的患者,其精液體積、精子濃度與正常生育男性精液比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異,而精子活動率、精子總活力和正常形態(tài)精子百分率都顯著下降,這與上述病原體感染機制相符。提示在臨床工作中,臨床醫(yī)生應(yīng)充分重視病原體感染導(dǎo)致精子質(zhì)量下降所引起的男性不育,同時也倡議男性人群要注意日常生活衛(wèi)生,加強自我保護。
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[編輯:肖曉輝]
·臨床病例討論·
IVF-ET卵巢扭轉(zhuǎn)的診治陷阱
病例1
王*,以“停經(jīng)11+5月,右下腹痛1天”為主訴,10月3日晚8pm急診就診?;颊呦礗VF-ET妊娠,7月27日取卵,7月30日移植鮮胚2枚,9月11日外院超聲提示宮內(nèi)單活胎。急診當(dāng)日出現(xiàn)右下腹墜脹痛,持續(xù)性,伴有嘔吐,超聲提示宮內(nèi)單活胎,右附件區(qū)8.3 cm×9.5 cm×5.3 cm的混合回聲,內(nèi)見多個無回聲,較大者5.9 cm×4.5 cm,透聲好,盆腔游離液性暗區(qū)1.4 cm,血常規(guī)示W(wǎng)BC 15.97×109/L,N86.6%,Hb 123 g/L?;颊咭蝾檻]宮內(nèi)妊娠拒絕手術(shù),10月4日早晨復(fù)查血常規(guī)WBC 20.18×109/L,81.7%,Hb 115 g/L,腹痛曾有一度減輕但又加重。再次交代風(fēng)險,同意手術(shù)。腹腔鏡下見子宮增大如孕12w大小,左側(cè)附件因子宮遮擋未見,右卵巢完全紫黑色,順時針扭轉(zhuǎn)720°,可見囊腫直徑約10 cm×8 cm×8 cm,多房,表面光滑,質(zhì)地糟脆,右輸卵管及傘端未見明顯異常。行腹腔鏡下右側(cè)附件切除術(shù)。術(shù)后病理:漿液性囊腺瘤及黃體囊腫。術(shù)后恢復(fù)順利,產(chǎn)科門診定期產(chǎn)檢。
病例2
李*,以“宮內(nèi)孕47天,右下腹疼痛1天”為主訴急診就診?;颊呦礗VF-ET妊娠,9月11日促排卵,9月26日移植鮮胚2枚;10月25日出現(xiàn)右下腹疼痛,呈持續(xù)性,伴惡心、嘔吐,無異常陰道出血、無肛門墜脹感等不適。B超提示:宮腔內(nèi)見兩個妊娠囊,均可見胎心搏動,雙附件區(qū)見混合回聲,左側(cè)7.3 cm×4.0 cm,右側(cè)9.0 cm×5.2 cm,內(nèi)見多個無回聲,左側(cè)較大者3.1 cm×2.6 cm,右側(cè)較大者4.4 cm×2.8 cm,CDFI:低回聲成分可見稍豐富血流。??撇轶w:右附件可捫及直徑約8 cm腫物,壓痛(+);10月26日復(fù)查B超顯示盆腔內(nèi)游離積液,深約2.8 cm,并行急診腹腔鏡探查+右卵巢復(fù)位(蒂扭轉(zhuǎn)360度)+囊腫穿刺術(shù)。術(shù)中見左卵巢增大直徑約為6 cm,呈促排卵后表現(xiàn)。右卵巢增大,直徑約為8 cm,亦呈促排后表現(xiàn),可見多個大小不等的囊腫,最大者約4 cm。穿刺后囊內(nèi)出血,予雙極電凝和單房黃體囊腫剔除術(shù)。術(shù)后予黃體酮肌注支持治療,隨診妊娠情況穩(wěn)定,如期出院,產(chǎn)科門診隨診。
病例警示
一、警惕IVF-ET超促排卵導(dǎo)致卵巢增大,繼而發(fā)生的卵巢囊腫蒂扭轉(zhuǎn),珍貴的妊娠更需要對并發(fā)癥及時處理!
卵巢過度刺激綜合征(OHSS)是發(fā)生于控制性卵巢刺激治療后的一種醫(yī)源性并發(fā)癥,常見于輔助生殖技術(shù)中的控制性超促排卵(COH)過程中。其兩大病理特征是:(1)雙側(cè)卵巢明顯增大,有明顯的基質(zhì)水腫,散布著多個出血性卵泡和卵泡膜-黃素囊腫、區(qū)域性皮質(zhì)壞死和新生血管。(2)毛細(xì)血管通透性增高,體液從血管內(nèi)轉(zhuǎn)移到第三間隙導(dǎo)致腹水、胸水和外陰水腫;同時伴有血容量下降,血液濃縮,腎血流減少而少尿、電解質(zhì)紊亂,嚴(yán)重者肝腎功能受損,血栓形成,低血容量休克,甚至死亡。總體發(fā)病率約20%左右,其中需要住院治療的中、重度OHSS僅占0.1%~2%[1]。
由于過度刺激的卵巢可以增大到10 cm以上,且伴有多發(fā)、大小不等的出血性和黃素化囊腫,所以存在扭轉(zhuǎn)的可能。OHSS患者出現(xiàn)一側(cè)突發(fā)的、劇烈的、持續(xù)時間長不能緩解的下腹痛,可伴有惡心、嘔吐,白細(xì)胞升高,應(yīng)高度懷疑卵巢扭轉(zhuǎn),為避免卵巢扭轉(zhuǎn)壞死,或繼發(fā)感染等并發(fā)癥,需要及時行手術(shù)治療。術(shù)中首選卵巢復(fù)位,如果扭轉(zhuǎn)松解后卵巢顏色好轉(zhuǎn),提示卵巢功能預(yù)后尚可,可以嘗試保留。如果卵巢扭轉(zhuǎn)時間長已導(dǎo)致卵巢缺血壞死,行一側(cè)附件切除后,需要警惕黃體功能受損而加強術(shù)后孕激素支持。
卵巢扭轉(zhuǎn)(ovarian torsion)約占婦科急診手術(shù)的2%~3%,其中12%~25%見于妊娠期婦女,且常合并OHSS。就OHSS患者而言,卵巢扭轉(zhuǎn)的發(fā)生率約16%。大多數(shù)發(fā)生于早中孕期,10%見于晚孕期。似乎較多見于右側(cè)。約73%扭轉(zhuǎn)的卵巢有恢復(fù)和保留功能的可能,即便扭轉(zhuǎn)時間較長,多普勒顯示血流信號消失,也可以嘗試復(fù)位觀察。術(shù)后流產(chǎn)率8.3%~16.6%[2]。
二、可以保留的扭轉(zhuǎn)卵巢上的多發(fā)黃體囊腫到底如何處理為好?
過度刺激的卵巢脆性明顯增加,血管豐富,需要有經(jīng)驗的婦科醫(yī)生進行手術(shù)操作。松解復(fù)位的卵巢,為避免再次發(fā)生扭轉(zhuǎn),有人提出可行卵巢固有韌帶縮短術(shù),但由于增大的子宮和卵巢,顯露和操作都比較困難,不應(yīng)該做為操作常規(guī)。即使行卵巢固有韌帶縮短術(shù),增大的卵巢仍存在“頭重腳輕”的問題。筆者曾嘗試穿刺增大的囊腫,但即使是細(xì)針穿刺,也極易發(fā)生囊內(nèi)出血,觸動血運豐富的黃體組織,則增加電凝止血和黃體損傷的風(fēng)險。妊娠的OHSS患者后期復(fù)發(fā)卵巢扭轉(zhuǎn)的幾率約19.5%,非妊娠患者的復(fù)發(fā)率約為9.1%[2]。
[1]郁琦,朱夏琴. 卵巢過度刺激綜合征的預(yù)防和治療[M]. 生殖內(nèi)分泌學(xué)熱點聚焦. 人民衛(wèi)生出版社.2014.
[2]Spitzer D,Wirleitner B,Steiner H,et al. Adnexal Torsion in Pregnancy after Assisted Reproduction-Case Study and Review of the Literature[J]. Geburtshilfe Frauenheilkd,2012,72:716-720.
(病例整理:北京協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科鄧姍)
【作者簡介】王中興,男,湖北人,本科,主管檢驗師,從事臨床醫(yī)學(xué)檢驗和男科實驗室工作.(*通訊作者)
【收稿日期】2015-09-24;【修回日期】2015-12-07
DOI:10.3969/j.issn.1004-3845.2016.04.014 10.3969/j.issn.1004-3845.2016.04.015