楊帥

哈藥集團(tuán)制藥總廠 150000

7-ACA細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法探析

楊帥

哈藥集團(tuán)制藥總廠 150000

要建立藥用的中間體7-ACA細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。本文是按照2010年的中國(guó)藥典中的附錄進(jìn)行的本次試驗(yàn)分析，根據(jù)分析判定相應(yīng)的結(jié)果。研究結(jié)果表明了供試品溶液的濃度，如果濃度是1.25mg/ml的時(shí)候，就說(shuō)明對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查是沒(méi)有任何的干擾的，使用藥用中間體7-ACA的檢查方法是可行的。

7-ACA；細(xì)菌內(nèi)毒素；檢查方法

藥用中間體7-ACA是一種頭孢類的抗生素前身，這種頭孢類的抗生素是合成的，沒(méi)有將細(xì)菌內(nèi)的毒素進(jìn)行有效的去除。內(nèi)毒素就是一種威脅著人體生命安全的一種致病的因子，只要很少的內(nèi)毒素就會(huì)引起生物或者是病理作用，因此現(xiàn)在7-ACA細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查并且進(jìn)行有效的控制，已經(jīng)成為了研究的重點(diǎn)。本文的研究中，考慮到7-ACA的PH比較低，僅僅在3.0～5.0之間，但是細(xì)菌內(nèi)毒素比較適合的PH值是在6.0～8.0之間，因此就需要進(jìn)行供試品的調(diào)節(jié)，需要調(diào)節(jié)到6.0～8.0之間，之后才能夠開(kāi)始進(jìn)行檢測(cè)。

一、材料

藥用中間體 7-ACA，這一藥品的批號(hào)分別是 691312017、691312018和691312019。

鱟試劑1，這一試劑是TAL1，批號(hào)是1302130，是由湛江博康海洋生物有限責(zé)任公司制造的。

鱟試劑2，TAL2，湛江安度斯生物有限公司。

細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE，中國(guó)食品藥品生物檢定院，批號(hào)為150601-201176，規(guī)格為100EU/支）。

細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用水和碳酸鈉。

二、方法和結(jié)果

（一）鱟試劑的靈敏度復(fù)核

在本次試驗(yàn)中使用的是2010年版本的中國(guó)藥典中的第二部的附錄進(jìn)行的7-ACA細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法的研究，在試驗(yàn)的過(guò)程中，要求靈敏度要在 0.5～2.0λ之間，具體的試驗(yàn)結(jié)果如表 1所示：

表1：鱟試劑靈敏度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

（二）供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素限制的確定

在本次產(chǎn)品中使用的是藥用中間體，從成品的注射劑上來(lái)說(shuō)，使用的是通用量，通用量是在1h內(nèi)輸入的藥量不能夠超過(guò)1.2g，在計(jì)算的過(guò)程中使用的是通用的量，也就是說(shuō) M=1.2g/（60kg·h）=20mg/（kg·h）。使用的計(jì)算公式也是有著具體的要求的，具體的計(jì)算公式是L=K/M，在本次試驗(yàn)中，具體的計(jì)算公式是：L=K/M=5EU/（kg·h）/20mg/（kg·h）=0.25EU/mg。

（三）供試品有效的稀釋濃度

在本次試驗(yàn)中，使用的是鱟試劑，這一試劑的靈敏度是0.125EU/ml，最大的有效的稀釋倍數(shù)是（MVD）=1，這時(shí)的C就是λ/L=（0.125EU/mL）/（0.25EU/mg）=0.5mg/mL。

（四）供試品干擾預(yù)實(shí)驗(yàn)

稱取藥用中間體7-ACA（批號(hào)為1312017）約100mg，用1%的無(wú)熱原碳酸鈉溶液溶解，制成40mg/mL的溶液，再加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水按表2濃度稀釋成供試品管（NPC）和含有2λ濃度細(xì)菌內(nèi)毒素的供試品陽(yáng)性對(duì)照管（PPC）。

取2個(gè)不同廠家的鱟試劑，分別置上述NPC和PPC中進(jìn)行反應(yīng)，每個(gè)濃度分別平行做 2支，另分別做陰性對(duì)照管（NC）和陽(yáng)性對(duì)照管（PC）各2支，于37±1℃保溫（60±2）min。則7-ACA干擾預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2：7-ACA干擾預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表2可見(jiàn)，藥用中間體在濃度＞1.25mg/mL時(shí)對(duì)2個(gè)廠家鱟試劑會(huì)產(chǎn)生干擾作用；濃度≤1.25mg/mL時(shí)對(duì)2個(gè)廠家鱟試劑均無(wú)干擾作用。

（五）供試品干擾試驗(yàn)

根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)，將濃度為1.25mg/mL的供試品溶液進(jìn)行干擾實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3：7-ACA濃度為1.25mg/mL時(shí)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表3可見(jiàn)，3批供試品濃度為1.25mg/mL時(shí)，Et均在0.5～2Es范圍內(nèi)，可認(rèn)為在此濃度下供試品對(duì)鱟試劑無(wú)干擾作用。

（六）樣品檢測(cè)

取3批7-ACA樣品稀釋至0.5mg/mL（即最低有效濃度），以靈敏度0.125EU/mL的TAL進(jìn)行檢測(cè)，菌符合規(guī)定。

三、討論

7-ACA細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查的方法是非常重要的，因?yàn)橹挥袑⒓?xì)菌內(nèi)毒素的檢查方法了解透徹，才能夠根據(jù)具體的方法，對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素進(jìn)行有效的控制，否則這種毒素就會(huì)危及到人體的安全，對(duì)人們的生命產(chǎn)生嚴(yán)重的威脅。要想將7-ACA細(xì)菌內(nèi)毒素的研制方法科學(xué)的研究出來(lái)，就要對(duì)7-ACA有著了解。7-ACA就是7-氨基頭孢烷酸，這是一種比較常見(jiàn)的頭孢母核，在7-ACA里有兩個(gè)活性的基團(tuán)，在活性基團(tuán)上需要連接不同的側(cè)鏈，在這樣的情況下，就構(gòu)成了頭孢類的抗生素，這種頭孢類的抗生素在性質(zhì)上也有著一定的差異，例如頭孢呋辛、頭孢三嗪等。

頭孢菌素類的抗身素在使用的過(guò)程中是極為重要的，在發(fā)展速度上也比較驚人，已經(jīng)被很多的醫(yī)學(xué)研究者所重視，現(xiàn)在臨床上經(jīng)常使用的，頭孢菌素有很多中，大約達(dá)到了50種以上，在臨床中京杭使用的也達(dá)到了 30種以上，因此我們一定要重視7-ACA的研究，尤其是7-ACA細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查的方法。在本次試驗(yàn)中使用的7-ACA就是由頭孢菌素C裂解形成的，首先頭孢菌通過(guò)發(fā)酵獲得頭孢菌素C。在裂解的過(guò)程中，使用的是酶法和化學(xué)法來(lái)獲得粗品的研究，使用化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行頭孢菌素C鋅鹽的生產(chǎn)，在比較極端的環(huán)境下需要進(jìn)行降溫處理，使用的化學(xué)藥品也是有毒有害的化學(xué)藥品，經(jīng)過(guò)這樣的環(huán)節(jié)處理之后，人體使用之后就會(huì)帶來(lái)很大的危害，需要得到我們的重視。使用酶法進(jìn)行裂解是不會(huì)涉及到重金屬的，在裂解的過(guò)程中，獲得的粗品質(zhì)量也比較好，污染小，裂解設(shè)備占地面積也比較小，因此在使用的過(guò)程中，一定要引起我們的注意。否則產(chǎn)生較大的環(huán)境污染，這樣與國(guó)家對(duì)藥品行業(yè)的要求是違背的。

7-ACA，中文名稱7-氨基頭孢烷，化學(xué)名稱為3-乙酰氧甲基-5-硫-7-氨基-8-氧-1-氮雜二環(huán)辛-2-烯-2羧酸。是玉米漿通過(guò)頭孢菌發(fā)酵得到的頭孢菌素C，頭孢菌素C在酰胺鍵處水解得到7-AcA，它是生產(chǎn)頭V，頭孢哌酮等半合抗類產(chǎn)品的重要中間體。7-ACA是頭孢菌素關(guān)鍵性中間體，已成為當(dāng)今國(guó)際抗生素市場(chǎng)的主角，按銷售額計(jì)，以頭孢菌素和青霉素為主的β-內(nèi)酰胺類抗生素發(fā)展最快，約占世界抗生素市場(chǎng)的 70%。7-ACA是通過(guò)頭孢菌素C裂解而成。豆油是在生產(chǎn)7-ACA過(guò)程中的一步，通過(guò)吸收豆油中的營(yíng)養(yǎng)有益成分，可以養(yǎng)大細(xì)菌，再通過(guò)酶法生產(chǎn)出7-ACA中間體。

國(guó)內(nèi)廠家采用化學(xué)法生產(chǎn)的主要原因是：國(guó)內(nèi)不具有酶的生產(chǎn)能力，只能依靠進(jìn)口酶，它的價(jià)格較高，使得酶法生產(chǎn)7-ACA成本與化學(xué)法相當(dāng)，而在色澤外觀上略遜于化學(xué)法，因此國(guó)內(nèi)采用酶法技術(shù)的很少。從目前的國(guó)內(nèi)主要生產(chǎn)廠家來(lái)看，化學(xué)法對(duì)環(huán)境污染嚴(yán)重以及職工勞動(dòng)保護(hù)問(wèn)題沒(méi)有有效的治理措施，其經(jīng)濟(jì)效益在很大程度上是以犧牲環(huán)境和健康為代價(jià)獲取的。

試驗(yàn)結(jié)果表明，藥用中間體7-ACA用1%的碳酸鈉調(diào)節(jié)pH后，稀釋到適宜的濃度進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)對(duì)鱟試劑無(wú)干擾作用，可檢測(cè)限值為 0.1EU/mg及以上，可以保證細(xì)菌內(nèi)毒素被有效檢出。

[1]姚舜，羅暉.一步酶法生產(chǎn) 7-氨基頭孢烷酸的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代化工，2013,（2）：11-14.

[2]金艷，王益民.西咪替丁原料藥細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法的探討[J].中國(guó)藥業(yè)，2012,（2）：46-47.

[3]蔡彤，張國(guó)來(lái).84種注射用藥品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的方法學(xué)研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2010,（2）：150-155.

[4]趙玉新，盧巧芬.一步酶法制備藥物中間體7-氨基頭孢烷酸[J].中國(guó)抗生素雜志，2010,（6）：435-438.

R927.2

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1672-5018（2016）10-035-02