朱巖

哈藥集團三精兒童大藥廠 150000

試論HPLC法測定阿苯片中苯巴比妥含量

朱巖

哈藥集團三精兒童大藥廠 150000

目的：建立一種使用高效液相色譜法進行阿苯片中苯巴比妥的含量的測定方法。方法：使用液相色譜柱；流動相為醋酸鹽緩沖液-甲醇，醋酸鹽緩沖液中的PH值是4.5，甲醇的比重是60:40，檢測的波長是254mm，在流速上也是1.0ml/min。結(jié)果：苯巴比妥在濃度范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)出良好的關(guān)系，r=0.9984，苯巴比妥的濃度范圍是0.08—0.48mg/ml，精確度是0.32%，平均的回收率是98.63%。結(jié)論：這種方法在檢測的過程中，方便、快捷，在結(jié)果上也比較準(zhǔn)確。

HPLC法，高效液相色譜法；苯巴比妥，含量測定

阿苯片中的苯巴比妥含量測定是非常重要的，這種測定方法主要使用的是滴定法，在本次研究的過程中，使用的含量測定方法是高效液相色譜法，在測定的過程中，一定要了解測定的細(xì)節(jié)，具體的了解高效液相色譜法，這樣在阿苯片中苯巴比妥含量測定的過程中，才能夠保證含量測定的準(zhǔn)確性和便捷性，對測試結(jié)果也有著嚴(yán)格的要求，現(xiàn)在這種測定方式已經(jīng)取得了滿意的效果。除此之外，還要在一起的測定上進行具體的分析，這樣對相關(guān)的試驗有著重要的作用。

一、儀器與試藥

1）阿苯片，必須要是市售的。2）苯巴比妥的對照品，是中國藥品生物制品檢定所。3）苯巴比妥的批號是171222-200303。4）選用的甲醇是色譜醇，其他的試劑是分析純。

二、實驗的方法與結(jié)果

（一）色譜條件

流動相：需要使用醋酸鹽緩沖液—甲醇，這種緩沖液的 PH值是4.5，其中甲醇使用的是60:40的含量。柱溫是20℃，流速是1.0ml/min，檢測的波長是254nm，進樣量是20μl，理論板數(shù)需要按照苯巴比妥峰計不能夠低于2500。

（二）線性關(guān)系考察

要稱取一定數(shù)量的苯巴比妥的對照品，苯巴比妥的對照品含量是20mg，需要放在25ml的容量瓶中，使用流動相進行溶解，還要稀釋到一定的刻度進行搖勻處理，直到達到相應(yīng)的刻度值。之后在配置成為標(biāo)準(zhǔn)儲備液，標(biāo)準(zhǔn)儲備液要按照0.8mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)進行配置，在配置之后，還要精密的量取相應(yīng)的溶液：1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml和6.0ml，將這些溶液分別放置在10ml的容量瓶中，使用流動相進行稀釋，達到相應(yīng)的刻度配置成為一定濃度的對照品溶液，如果是按照上述色譜條件進行處理，精密進樣 20μl，縱坐標(biāo)是峰面積，橫坐標(biāo)是濃度，在計算的時候使用的回歸方程是:

結(jié)果表明苯巴比妥在 0.08～0.48mg／ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

（三）精密度實驗

精密吸取對照品溶液(濃度為0.2mg／m1)，重復(fù)進樣5次，每次2Ou1，測定苯巴比妥的峰面積，RSD為0.32%，說明該方法的精密度良好。

（四）穩(wěn)定性實驗

取同一批次供試品溶液，按本文色譜條件于0、2、4、6、8、10、16、24h進樣2Ou1，測定苯巴比妥的峰面積，RSD為0．65 %：表明供試品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定。

（五）重復(fù)性試驗

精密稱取同一批號的阿苯片樣品6份，照含量測定方法測定含量，結(jié)果測得平均含量為98．6%，RSD為0．95%。

（六）加樣回收試驗

精密稱取已知含量的樣品9份，每份約重0．2g，置于lOml量瓶中，分 O別加入苯巴比妥對照品 lOg、12mg、14mg，加 m流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，分別取20u1注入液相色譜儀，計算苯巴比妥低、中、高三種濃度回收率(n=3)分別為98．87%(RSD=0.34%)，99．25%(RSD=0.56%)，98．63%(RSD=0.66 %)：平均回收率(n：9)為98．92%；說明此方法得到的測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

三、樣品的測定

（一）供試品溶液的制備

取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉(約相當(dāng)于苯巴比妥2O～g)置100M量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過。

（二）對照品溶液的制備

精密稱取對照品20mg置l0ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

（三）測定法

分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各201，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，以外標(biāo)法計算樣品中苯巴比妥的含量。

（四）化學(xué)滴定法與高效液相色譜法對3批樣品含量測定的比較

用化學(xué)滴定法對3批阿苯片中苯巴比妥的含量進行測定，并與高效液相色譜法的含量測定進行比較，結(jié)果顯示3批樣品含量測定的RSD值用化學(xué)滴定小于1．2%，用HPLC法時小于0.8%，具體數(shù)據(jù)見表1表1樣品測定結(jié)果。

表1：樣品測定結(jié)果

四、討論

苯巴比妥主要是用于焦慮不安、高血壓、煩躁嗜睡、固性失眠癥、抗驚厥、治療新生嬰兒高膽紅素血癥，還有著抗癲癇的作用。這種藥物的理化性性質(zhì)如下：味道微苦、無臭，是白色的有光澤的結(jié)晶粉末。一般可以在乙醚或者是乙醇中被溶解，在水中是微溶，熔點是174.5—178℃。這種藥物是長效巴比妥類，對于樞性抑制作用而言，與劑量有關(guān)。從藥物的性質(zhì)上來看，有著抗驚厥、催眠和鎮(zhèn)靜的作用，在抗癲癇上，如果是局部發(fā)作或者是大發(fā)作有用，其他的病癥是沒有任何的療效的，如果是精神運動性的癲癇是不會起到作用的。苯巴比妥還可以從來解熱鎮(zhèn)痛，一般使用的方法是注射或者是口服。

苯巴比妥進入人腦組織會極慢，但是對于人腦組織中的濃度卻是最高的?？诜臅r間是0.5—1h，如果是靜脈注射，需要15min才能夠有良好的療效在，2—18h藥物的濃度才能夠達到相應(yīng)的效果。由于規(guī)格不同，在使用的過程中，會產(chǎn)生很大的差異，具體的使用方法需要按照醫(yī)生的囑咐服用。這種藥物也存在著一些不良反應(yīng)：1）用藥之后，可能會出現(xiàn)困倦、頭暈等現(xiàn)象，如果使用的時間過長，會產(chǎn)生依賴性，如果多次使用，一定要注意蓄積性中毒現(xiàn)象的發(fā)生。2）有些患者還可能會出現(xiàn)剝脫性皮炎、皮疹和藥熱等現(xiàn)象。

（1)與對乙酰氨基酹合用可引起肝臟毒性。(2)與對乙酰氨基酚、雙香豆素、氫化可的松、地塞米松、睪酮、雌激素、孕激素、口服避孕藥、氯丙嗪、氯霉素、多西環(huán)素、灰黃霉素、地高辛、洋地黃毒苷、苯妥英鈉及環(huán)孢素合用時，苯巴比妥使它們代謝加速，療效降低。(3)合用時使環(huán)磷酰胺在體內(nèi)活化的藥物作用增加。(4)合用時使乙琥胺、卡馬西平的血藥濃度降低，t1/2縮短。(5)合用時使丙戊酸鈉縮短，肝毒性增加，而苯巴比妥血藥濃度增高。(6)合用時增強鈣離子拮抗劑的降壓作用。

阿苯片呼吸抑制及卟啉病患者禁用。喘息、鼻息肉綜合征、對阿司匹林及對其他解熱鎮(zhèn)痛藥過敏者禁用。血友病、血小板減少癥、活動性出血性疾病患者禁用。嚴(yán)重肝腎功能不全患者禁用。較常見的有惡心、嘔吐、上腹部不適或疼痛等不良反應(yīng)。較少見的有支氣管痙攣性過敏反應(yīng)。皮膚過敏反應(yīng)，表現(xiàn)為皮疹、蕁麻疹、皮膚瘙癢等。某些兒童應(yīng)用本藥可能引起反常的興奮。

本法采用高效液相法測定阿苯片中苯巴比妥含量，方法簡便，快速，結(jié)果更準(zhǔn)確，可以推廣使用。

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1672-5018（2016）10-268-02