徐玉玲， 譚小君， 徐騰達， 周傳勇， 劉　濤

(成都大學 藥學與生物工程學院， 四川 成都　610106)

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黃連解毒湯最佳提取工藝研究

徐玉玲， 譚小君， 徐騰達， 周傳勇， 劉濤

(成都大學 藥學與生物工程學院， 四川 成都610106)

摘要：為了優(yōu)選黃連解毒湯最佳提取工藝.以鹽酸小檗堿、黃芩苷、梔子苷及固含物含量作為指標成分，利用單因素試驗及正交試驗對提取、精制工藝進行研究，優(yōu)選黃連解毒湯最佳提取工藝參數(shù).黃連、黃柏組，最佳提取工藝為6倍量70%乙醇，提取3次，每次1.5 h；黃芩、梔子組，最佳提取工藝為12倍量水，提取3次，提取時間0.5 h，黃芩、梔子的精制工藝為加95%乙醇使其醇沉濃度為65%.結(jié)果表明，優(yōu)選得到的提取工藝穩(wěn)定可行，可為黃連解毒湯的提取提供實驗依據(jù).

關(guān)鍵詞：黃連解毒湯；提取工藝；正交設計；液相色譜法

0引言

黃連解毒湯由黃連、黃柏、黃芩、梔子等組成，是治療火熱毒盛、充斥三焦的常用方，臨床上除用于細菌性感染性疾病外，還用于防治心腦血管疾病、老年性癡呆等癥[1-2].此湯劑的傳統(tǒng)煎煮方法為合煎，按經(jīng)驗掌握煎煮時間與加水量[3]，但在煎煮過程中黃連、黃柏中的生物堿與黃芩中的黃芩苷發(fā)生反應生成沉淀，從而影響藥效[4-6].故本研究將方中4味藥材分成2組，黃連、黃柏組和黃芩、梔子組，分煎，因黃連、黃柏中的小檗堿水溶性差，為最大程度保留該類成分，采用乙醇提??；黃芩、梔子組采用水提醇沉法，去除醇不溶性雜質(zhì)，保留有效成分.

1儀器與試藥

1.1儀器

實驗所用儀器包括：DZF-6050A型真空干燥箱，北京中興偉業(yè)儀器有限公司；KQ-100E型超聲波消洗器，昆山超聲儀器有限公司；FW100型高速萬能粉碎機，北京科偉永興儀器有限公司；FA2004型分析電子天平，上海良平儀器儀表有限公司；UV230Ⅱ型高效液相色譜儀，大連依利特分析儀器有限公司；HH-S6型電熱恒溫水浴鍋，北京科偉永興儀器有限公司.

1.2試藥

實驗所用試藥包括：鹽酸小檗堿對照品(批號，110713-201212)、黃芩苷對照品(批號，110715-201318)、梔子苷對照品(批號，110749-201115)均購于中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用；黃連、黃柏、黃芩、梔子4味藥均購自于四川省中藥飲片有限責任公司，經(jīng)鑒定均符合2010年版《中國藥典》要求；甲醇為色譜純，水為純凈水，其他試劑均為分析純.

2方法與結(jié)果

2.1鹽酸小檗堿含量測定

2.1.1色譜條件.

實驗的色譜條件為：SinoChrom ODS-BP色譜柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為乙腈—0.1%磷酸溶液(50∶50)(每100 mL加入十二烷基磺酸鈉0.1 g)；流速1.0 mL/min，進樣量10 μL，檢測波長265 nm.

2.1.2對照品溶液的制備.

取鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成含鹽酸小檗堿0.0989 mg/mL的溶液，制得對照品溶液.

每個定位器對應一個運動支鏈，以支鏈3為例，建立有關(guān)基坐標系、定位器參考坐標系、球鉸中心、托架坐標系的空間矢量鏈，托架矢量鏈建立方式如圖4所示，定位器1，2，4對應的空間矢量鏈建立方法類似。

2.1.3供試品溶液的制備.

按處方比例稱取藥材，按一定條件提取，過濾，精密量取續(xù)濾液1 mL，置100 mL的容量瓶中，加70%乙醇定容至刻度，搖勻，制得供試品溶液.

2.2黃芩苷含量測定

2.2.1色譜條件.

實驗的色譜條件為：SinoChrom ODS-BP色譜柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇—水—磷酸(47∶53∶0.2)；流速1.0 mL/min，進樣量10 μL，檢測波長280 nm.

2.2.2對照品溶液的制備.

取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成含黃芩苷0.0505 mg/mL的溶液，制得對照品溶液.

2.2.3供試品溶液的制備.

2.3梔子苷含量測定

2.3.1色譜條件.

實驗色譜條件為：SinoChrom ODS-BP色譜柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為乙腈—水(15∶85)；流速1.0 mL/min，進樣量10 μL，檢測波長238 nm.

2.3.2對照品溶液的制備.

取梔子苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成含梔子苷0.1283 mg/mL的溶液，制得對照品溶液.

2.3.3供試品溶液的制備.

按處方比例稱取藥材，按一定條件提取，過濾，精密量取續(xù)濾液10 mL，置100 mL的容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，制得供試品溶液.

2.4固含物的測定

量取100 mL提取液置蒸發(fā)皿中，水浴揮干溶劑，置105 ℃烘箱中，干燥3 h，取出，置干燥器中冷卻至室溫，稱重，計算.

2.5黃連、黃柏組

2.5.1乙醇濃度考察.

利用單因素實驗對乙醇濃度進行篩選，按處方比例稱取黃連60 g、黃柏40 g，平行4份，分別加入50%、60%、70%、80%的乙醇600 mL，回流提取2次，每次1.5 h，測定鹽酸小檗堿含量及固含物含量，優(yōu)選乙醇濃度.結(jié)果顯示，當乙醇濃度為70%時鹽酸小檗堿的提取轉(zhuǎn)移率、固含物含量均較高，故選擇70%的乙醇作為黃連、黃柏提取的溶劑.

2.5.2提取正交試驗設計.

選取溶媒用量、提取時間以及提取次數(shù)為考察因素，以鹽酸小檗堿含量、固含物含量的綜合評分為指標，按處方比例稱取黃連30 g、黃柏20 g，共9份，按L9(34)正交試驗表進行試驗.因素水平安排見表1，試驗安排及結(jié)果見表2，方差分析見表3.

表1　因素水平表

表2　正交試驗安排及結(jié)果

表3　正交試驗方差分析表

由表2直觀分析可知，各因素對黃連、黃柏提取工藝的順序為C>B>A.表3方差分析表明，因素B的影響具有顯著性意義，因素C的影響具有極顯著性意義，因素A的影響則無顯著性意義.因此，確定最佳提取工藝為A1B3C3，即加6倍量70%乙醇，提取3次，每次1.5 h.

2.5.3驗證實驗.

按處方比例分別稱取藥材50 g(黃連30 g、黃柏20 g)、100 g(黃連60 g、黃柏40 g)、150 g(黃連90 g、黃柏60 g)進行驗證實驗，結(jié)果見表4.結(jié)果表明，優(yōu)選出的提取工藝條件重復性好，工藝穩(wěn)定可行.

表4　黃連、黃柏組驗證實驗

2.6黃芩、梔子組

2.6.1提取正交試驗設計.

影響提取效果的主要因素有加水量、提取時間以及提取次數(shù).以黃芩苷、梔子苷含量及固含物含量的綜合評分為指標，按處方比例稱取黃芩40 g、梔子60 g，共9份，按L9(34)正交試驗表進行實驗.因素水平安排見表5，實驗安排及結(jié)果見表6，方差分析見表7.

表5　因素水平表

表6　正交試驗安排及結(jié)果

表7　正交試驗方差分析表

由表6直觀分析可知，各因素對黃芩、梔子提取工藝的順序為C>A>B.方差分析表明，因素A的影響具有顯著性意義，因素C的影響具有極顯著性意義，因素B的影響則無顯著性意義.因此，確定最佳提取工藝為A3B1C3，即加12倍量水，提取3次，每次0.5 h.

2.6.2驗證實驗.

按優(yōu)選的提取工藝參數(shù)，按處方比例分別稱取藥材100 g(黃芩60 g、梔子40 g)、200 g(黃芩120 g、梔子80 g)、300 g(黃芩180 g、梔子120 g)藥材3批進行驗證實驗，結(jié)果見表8.

表8　黃芩、梔子組驗證實驗

表8結(jié)果顯示，優(yōu)選出的提取工藝條件重復性好，工藝穩(wěn)定可行.

2.7黃芩、梔子精制工藝

2.7.1醇沉濃度考察.

取黃芩160 g、梔子240 g，加12倍量水，提取3次，每次0.5 h，合并提取液，濾過，減壓濃縮至相對密度為1.10，冷卻至室溫，分成3份，加入95%乙醇，使含醇量分別達到65%、75%、85%，靜置24 h，濾過，測定固含物含量.精密吸取提取液1 mL于100 mL的容量瓶中，測定黃芩苷、梔子苷含量，結(jié)果見表9.

表9　黃芩、梔子精制工藝結(jié)果

表9結(jié)果顯示，各濃度乙醇醇沉效果差別不大，從經(jīng)濟節(jié)約的角度考慮，故選擇65%作為黃芩、梔子的醇沉濃度.

2.7.2驗證實驗.

按處方比例稱取梔子藥材150 g，黃芩藥材100 g，加12倍量水，提取3次，每次0.5 h，合并提取液，濾過，減壓濃縮至相對密度為1.10，冷卻至室溫，分成3份，加入95%乙醇，使其醇沉濃度均為65%，靜置24 h，濾過，測定固含物含量.精密吸取提取液1 mL于100 mL的容量瓶中，測定黃芩苷、梔子苷含量，結(jié)果見表10.結(jié)果表明，優(yōu)選出的精制工藝條件重復性好，工藝穩(wěn)定可行.

表10　黃芩、梔子組精制工藝驗證

3討論

黃連解毒湯傳統(tǒng)的服用方法是煎煮成湯，而在煎煮加熱過程中，黃連、黃柏中的小檗堿與黃芩中的黃芩苷發(fā)生沉淀反應，將這些沉淀物濾掉后再服用藥液會嚴重影響黃連解毒湯的臨床療效.本實驗采用分煎方法，將黃連、黃柏編為一組，黃芩、梔子編為另一組，讓小檗堿和黃芩苷在煎煮過程中不再相遇發(fā)生反應，煎煮后再合并服用，從而最大限度地保留湯劑的有效成分，提高藥物臨床療效.但兩組藥液在常溫條件下是否還繼續(xù)發(fā)生沉淀反應，還需進一步考察.

通常，中藥湯劑中有效成分含量與加溶媒量、煎煮時間、煎煮方法及煎煮次數(shù)等密切相關(guān).通過正交試驗結(jié)果表明，黃連、黃柏組加6倍量70%乙醇，提取3次，提取1.5 h；黃芩、梔子組加12倍量水，提3次，提取0.5 h，65%醇沉進行除雜，該方法使湯劑的有效成分保留率較高，且工藝重現(xiàn)性較好，工藝穩(wěn)定，具有很好的參考價值.

參考文獻：

[1]徐靜華,于慶海,渡邊裕司.黃連解毒湯對腦缺血動物的促智作用及機制探討[J].時珍國醫(yī)國藥,2002,13(12):705-707.

[2]陳光亮,張秀榮,王欽茂.黃連解毒湯藥理研究進展[J].安徽中醫(yī)學院學報,2001,20(5):67-69.

[3]蔣斌,張星海,唐糅,等.正交試驗優(yōu)選黃連解毒湯的機器煎煮工藝[J].中國實驗方劑學雜志,2013,19(2316):32-35．

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[5]黃山,高紅寧,郭立瑋.膜分離與樹脂聯(lián)用制備黃連解毒湯中藥固體制劑的研究[J].南京中醫(yī)藥大學學報,2006,22(1):42-43.

[6]方素萍,邱金瑛.黃連解毒湯浸提工藝及劑型研究進展[J].中成藥,2001,23(5):374-376.

Extraction Process of Coptidis Decoction for Detoxification

XUYuling,TANXiaojun,XUTengda,ZHOUChuanyong,LIUTao

(School of Pharmacy and Bioengineering, Chengdu University, Chengdu 610106, China)

Abstract:The paper is going to optimize the extraction process of the coptidis decoction for detoxification.The contents of berberine,baicalin,gardenia and solid content are used as index components.The extraction and purification process are studied by single factor test and orthogonal test.The results show that the best extraction technology for coptis chinensis and golde cypress invovles 6 times of 70% ethanol,extraction for 3 times with 1.5 h each time.The best extraction process for scutellaria baicalensis and cape jasmine involves 12 times of water,extraction for 3 times with 0.5 h each time.The purification process of scutellaria baicalensis and cape jasmine is to add 95% ethanol to obtain 65% alcohol concentration.The conclusion drawn is that the optimized extraction process is stable and feasible,and provides the experimental basis for the extraction of the coptidis decoction for detoxification.

Key words:coptidis decoction for detoxification;extraction process;orthogonal design;liquid chromatography

中圖分類號：R284.2；R282.71

文獻標志碼：A

作者簡介：徐玉玲(1975 — )， 女， 碩士， 高級工程師， 從事中成藥新藥開發(fā)與再評價工作.

收稿日期：2015-12-05.

文章編號：1004-5422(2016)01-0019-04