劉　海　趙劍秋　彭曉靜　劉　洋　王　太　席文娟　張建新　張　輝

(唐山市開灤總醫(yī)院麻醉科，河北　唐山　063000)

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內(nèi)毒素親和吸附劑對失血性休克大鼠NO、SOD及MDA水平的影響

劉海趙劍秋彭曉靜劉洋王太席文娟張建新張輝

(唐山市開灤總醫(yī)院麻醉科，河北唐山063000)

〔摘要〕目的探討內(nèi)毒素親和吸附劑(SPV)對失血性休克大鼠模型一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)水平的影響。方法選取成年的SD大鼠60只，隨機分為正常對照組10只，模型組和藥物組各25只。模型組和藥物組建立失血性休克大鼠模型，藥物組造模前采用SPV進行灌胃。復蘇后1、4、8、16 h，對所有大鼠的血清NO、SOD、MDA、內(nèi)毒素及腫瘤壞死因子(TNF)-α水平進行檢測。結(jié)果復蘇后1、4、8、16 h，與模型組比較，藥物組大鼠血清NO水平較低，血清SOD水平較高，血清MDA、內(nèi)毒素、TNF-α水平較低(均P<0.05)；結(jié)論SPV能夠明顯降低失血性休克大鼠血清NO、MDA、內(nèi)毒素及TNF-α水平，提高SOD活性，對失血性休克引起的氧化應激損傷有保護作用。

〔關鍵詞〕內(nèi)毒素親和吸附劑；失血性休克；一氧化氮；超氧化物歧化酶；丙二醛

研究認為〔1〕，支持治療、應用廣譜抗生素等措施對失血性休克預后的改善作用并不明顯，從根本上清除內(nèi)毒素以及炎癥介質(zhì)才是治療的關鍵。已有體外研究顯示，應用內(nèi)毒素親和吸附劑(SPV)吸附的方法除去血液中內(nèi)毒素高速有效〔2〕。目前關于SPV治療失血性休克的實驗研究較少。本研究擬探討SPV對失血性休克大鼠的影響。

1資料與方法

1.1對象選取SPF級成年SD大鼠(由華北理工大學動物實驗室提供)60只，雌雄各30只，周齡(6.5±2.7)w，體重(293±20)g。將所有大鼠分籠進行適應性飼養(yǎng)5 d，自由活動與進食，以標準飼料喂養(yǎng)，將室溫控制在20℃~25℃，濕度控制在55%左右，晝夜周期為12 h。

1.2造模及實驗方法所有大鼠適應飼養(yǎng)后，隨機分為正常對照組10只、模型組25只、藥物組25只。模型組和藥物組采用腹腔注射10%的水合氯醛溶液進行麻醉，麻醉成功后取仰臥位，暴露頸單內(nèi)動、靜脈，放置導管，接入BL-420F生物機能實驗系統(tǒng)(成都泰盟軟件有限公司)，檢測大鼠的平均動脈壓(MAP)，同時經(jīng)導管注入500 IU/kg的肝素鈉；60 min后，暴露右側(cè)股動脈進行插管放血；將大鼠的MAP在15 min內(nèi)降至40 mmHg后停止放血，維持血壓；1 h后經(jīng)股靜脈緩慢回輸含有乳酸林格液的失血，20 min內(nèi)輸完，復蘇后縫合血管和傷口，造成大鼠創(chuàng)傷-失血性休克模型〔3〕。正常對照組大鼠與模型組大鼠進行相同的手術操作，但是不放血、不回輸血液。藥物組大鼠在造模之前30 min，給予SPV溶液消化道內(nèi)灌注，SPV溶液由1 mg多黏菌素B、10 mg維生素B6、0.3 g思密達溶于生理鹽水中制成。

1.3血清指標采集分別于復蘇后1、4、8、16 h采集所有大鼠的靜脈血，然后分離血清，采用硝酸還原酶法檢測血清中一氧化氮(NO)水平；采用黃嘌呤氧化酶法(羥胺法)測定血清中超氧化物歧化物(SOD)活性；通過硫代巴比妥酸比色法測定血清中丙二醛(MDA)水平；采用分光光度法測定血清中內(nèi)毒素水平；采用酶聯(lián)免疫分析儀，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定血清中腫瘤壞死因子(TNF)-α的含量。

1.4統(tǒng)計學方法采用SPSS17.0軟件進行單因素方差分析和Turkey檢驗。

2結(jié)果

2.1復蘇后三組大鼠血清中NO、MDA水平比較模型組和藥物組大鼠的血清NO、MDA水平均明顯高于正常對照組；模型組在1~16 h NO、MDA水平持續(xù)小幅度升高，藥物組1~4 h小幅升高，8 h之后回落；復蘇后1、4、8、16 h，藥物組明顯低于模型組(P<0.05)。見表1，表2。

2.2復蘇后三組大鼠血清中SOD水平比較模型組和藥物組大鼠的血清SOD水平均明顯低于正常對照組，模型組在1~16 h持續(xù)小幅度降低，藥物組1~4 h小幅降低，8 h之后回升；復蘇后1、4、8、16 h，藥物組明顯高于模型組(P<0.05)。見表3。

2.3復蘇后三組大鼠血清中內(nèi)毒素、TNF-α水平比較模型組和藥物組大鼠的血清內(nèi)毒素、TNF-α水平均明顯高于正常對照組，模型組在1~16 h維持在較高水平，藥物組1~4 h輕度下降，8~16 h迅速下降；復蘇后1、4、8、16 h，藥物組明顯低于模型組(P<0.05)。見表4，表5。

表1　三組大鼠血清中NO水平比較

與正常對照組比較:1)P<0.05，與模型組比較:2)P<0.05；下表同

表2　三組大鼠血清中MDA水平比較

表3　三組大鼠血清中SOD水平比較

表4　三組大鼠血清中內(nèi)毒素水平比較±s，pg/ml)

表5　三組大鼠血清中TNF-α水平比較

3討論

曾經(jīng)認為失血性休克發(fā)生的主要原因是血液灌注不足，組織缺血缺氧，主要治療手段集中在補充血容量、支持治療等方面，但是療效并不理想。近來研究資料顯示〔4〕，合并全身炎癥反應綜合征是導致患者復蘇后預后仍然較差的主要原因之一。全身炎癥反應的發(fā)生與腸道的屏障功能減弱、腸道細菌增殖釋放大量內(nèi)毒素有關，失血發(fā)生后，為了保護心、腦等重要器官，保持其血液供應，會使得胃腸道血液供應減少，最先出現(xiàn)嚴重的缺血缺氧狀況，復蘇后腸道黏膜容易出現(xiàn)缺血再灌注損傷。一方面，黏膜通透性增加，機械屏障功能遭到破壞，細菌移位增殖，釋放的內(nèi)毒素刺激大量炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，出現(xiàn)嚴重的組織損傷，加重休克〔5〕；另一方面，缺血再灌注刺激自由基的產(chǎn)生，促進氧化應激反應的發(fā)生，加重腸黏膜損傷〔6〕。因此，及時清除腸道內(nèi)毒素，減輕炎癥反應及氧化應激反應是治療的重點。SPV的概念是近年來新出現(xiàn)的觀點，利用配基對內(nèi)毒素較高的選擇吸附作用能夠有效清除腸腔、血液中的內(nèi)毒素〔7〕，且能防止大量應用抗生素帶來的副作用。本研究中的吸附劑由多黏菌素B、維生素B6以及思密達組成，多黏菌素B和維生素B6為親和配基，多黏菌素B是具有活性的多肽類抗菌素，能夠有效地殺滅革蘭陰性菌；維生素B6具有解毒、維護細胞代謝的作用〔8〕；思密達顆粒微小、具有多層結(jié)構，能夠很好地附著于腸黏膜表面，起到保護作用；三者制成的制劑既能吸附內(nèi)毒素、殺滅細菌，又能保護腸黏膜，減少損傷。

本研究結(jié)果表明NO與失血性休克的發(fā)生過程有關系。研究顯示〔9〕，在休克等病理情況下，NO合酶(iNOS)被激活，能夠促進NO的合成，過量的NO能夠抑制相關抗氧化酶的活性，造成細胞氧化凋亡。本研究結(jié)果表明在失血性休克復蘇后，如不采取措施，NO還在不斷產(chǎn)生，損害細胞；而且表明SPV能夠有效抑制NO合成分泌，減少細胞損傷，復蘇8 h后回落可能與藥物到達腸道發(fā)揮作用需要一定的時間有關。

SOD和MDA都是氧化應激反應相關的指標。有研究表明〔10〕，氧自由基參與了失血性休克的發(fā)生發(fā)展，這與本研究結(jié)果一致。SPV能夠有效減少氧化反應相關因子，提高機體的抗氧化能力，減少自由基對機體產(chǎn)生的傷害。內(nèi)毒素能夠刺激中性粒細胞、巨噬細胞、補體及凝血系統(tǒng)，使機體釋放TNF-α等炎癥相關因子，加重炎癥反應，還能作用于小血管，造成微循環(huán)障礙，加重休克的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)〔11〕，失血性休克大鼠血液內(nèi)毒素、TNF-α水平升高，可能與腸道黏膜損傷，腸絨毛減少，屏障功能破壞，有害菌大量增殖、移位，分泌過量內(nèi)毒素有關，這與本研究結(jié)果相一致。SPV能夠減少內(nèi)毒素，減輕炎癥反應，這與內(nèi)毒素親和吸附劑抗菌、保護腸道黏膜以及高效吸附內(nèi)毒素，防止其釋放入血造成炎癥反應與損傷的作用有關。

4參考文獻

1陳學云,顏榮林,王來根,等.失血性休克對大鼠腸道細菌易位和血漿內(nèi)毒素水平的影響及其意義〔J〕.中華急診醫(yī)學雜志,2002;11(2):92-4.

2張波,何建川.血液灌流用內(nèi)毒素吸附劑的研究進展〔J〕.醫(yī)學研究雜志,2011;40(5):153-4.

3張愛華,陶紅,徐燕,等.創(chuàng)傷非控制失血性休克大鼠限制性液體復蘇的實驗研究〔J〕.中華護理雜志,2008;43(8):763-5.

4程曉斌,姚元章,張連陽,等.創(chuàng)傷性失血性休克病人的預后探討〔C〕.第四屆全國創(chuàng)傷外科學術研討會論文匯編,2006:271-3.

5曹國龍,程愛國,張小平,等.失血性休克中腸屏障的損傷〔J〕.華北煤炭醫(yī)學院學報,2006;8(2):168-70.

6肖詩銘,滿曉波,邱秀華,等.高滲氯化鈉羥乙基淀粉40注射液對失血性休克大鼠腸缺血-再灌注損傷中氧自由基的影響〔J〕.中國醫(yī)藥導刊,2005;7(6):451-3.

7方暉,魏佼,俞耀庭,等.親和吸附劑對細菌內(nèi)毒素吸附性能的研究〔J〕.高等學?；瘜W學報,2004;25(6):1056-9.

8李苑,王翔,熊興良,等.固定多黏菌素B的新型吸附劑對血液中細菌內(nèi)毒素吸附性能的實驗研究〔J〕.生物醫(yī)學工程學雜志,2006;23(4):832-5.

9胡明政,凌樹才,馬紅萍,等.失血性休克大鼠血漿β-內(nèi)啡肽和一氧化氮含量變化及其聯(lián)系〔J〕.中國急救醫(yī)學,2001;21(2):66-8.

10鐘娃,李莉,蔣龍元,等.TNF-α、IL-6、MDA、SOD在失血性休克動物模型中的表達〔J〕.實用醫(yī)學雜志,2007;23(4):473-4.

11王新春,劉北彥,許平,等.失血性休克加內(nèi)毒素血癥大鼠腦內(nèi)腫瘤壞死因子α的變化〔J〕.哈爾濱醫(yī)科大學學報,2003;37(4):299-301.

〔2015-08-22修回〕

(編輯袁左鳴)

〔中圖分類號〕R614

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)07-1563-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.07.012

基金項目：河北省2014年度醫(yī)學科學研究重點課題計劃(No.ZD20140064)

第一作者：劉海(1984-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事臨床麻醉學與危重癥研究。