李文浩　田春雨　薄海美　王　鴿　劉　澤　李承岸　周　正

華北理工大學(xué)　河北唐山　063000

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滋腎雙益復(fù)方對2型糖尿病大鼠糖代謝的影響及作用機制

李文浩田春雨薄海美王鴿劉澤李承岸周正

華北理工大學(xué)河北唐山063000

[摘要]①目的探討滋腎雙益復(fù)方對2型糖尿病大鼠糖代謝影響及作用機制。②方法將造模成功的2型糖尿病大鼠分為模型組，滋腎雙益復(fù)方低、中、高劑量組[灌胃500、1000、2000 mg/(kg·d)]及二甲雙胍組[灌胃100mg/(kg·d)]。持續(xù)給藥60天后測空腹血糖(FBG)，糖化血紅蛋白(HbAlc)，C-肽，胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)含量及游離脂肪酸(FFA)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)。③結(jié)果與正常組相比較，模型組的FBG、HbAlc顯著升高(P<0.01)；與模型組相比較，滋腎雙益復(fù)方可使2型糖尿病大鼠的FBG、HbAlc顯著降低(P<0.05，P<0.01)，提高C-肽GLP-1含量(P<0.05，P<0.01)，抑制氧化應(yīng)激。④結(jié)論滋腎雙益復(fù)方能調(diào)節(jié)2型糖尿病大鼠的糖代謝，改善胰島素抵抗(IR)，增加GLP-1含量及抑制氧化應(yīng)激可能為其作用機制。

[關(guān)鍵詞]滋腎雙益復(fù)方2型糖尿病糖代謝

2型糖尿病患者(T2DM)大多存在著胰島素抵抗(IR)現(xiàn)象。近些年來,中醫(yī)藥治療2型糖尿病的臨床和實驗研究日益增多，尋求改善胰島素抵抗、調(diào)節(jié)糖代謝的有效方藥已成為中醫(yī)防治2型糖尿病研究的熱點[1]。滋腎雙益復(fù)方由桑葉、桑葚、決明子、丹參、黃芪、葛根、黃連等組成。臨床實踐表明其具有良好的調(diào)節(jié)血糖、改善胰島素抵抗作用。本實驗主要進(jìn)行該復(fù)方對2型糖尿病大鼠糖代謝、糖化血紅蛋白(HbAlc)、C-肽、胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)含量及游離脂肪酸(FFA)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的影響，為該復(fù)方的深層次研究奠定基礎(chǔ)。

1儀器與材料

1.1儀器M200PRO酶標(biāo)儀(瑞士TECAN公司)；血糖儀(三諾生物公司)；NycoCard Reader II糖化血紅蛋白檢測儀(挪威Axis-shield poc AS公司)。

1.2試藥二甲雙胍片(上海施貴寶制藥有限公司，批號1407117)；糖化血紅蛋白檢測試劑盒(Axis-shield poc AS公司，批號：10174006)；C肽測定試劑盒(凱諾春天生物科技公司，批號：20150401A)；GLP-1試劑盒(批號：20150304)、MDA測試盒(批號：20150212)、SOD試劑盒(批號：20150226)南京建成生物工程研究所；血糖試紙(長沙三諾生物公司，批號2429EN)；滋腎雙益復(fù)方(桑葉、桑葚、決明子、丹參、黃芪、葛根、黃連)加6倍量水加熱提取2次，2h/次，濾過，水提物經(jīng)噴霧干燥制得顆粒，動物灌胃給藥時用純凈水制成混懸液。

1.3動物SPF雄性Wistar大鼠(220±10)g，上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司，合格證：SCXK(滬)2012-0002。

1.4方法

1.4.12型糖尿病大鼠模型實驗選用清潔級健康雄性Wistar大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)7天，正常對照組普通飼料喂養(yǎng)；造模組給予高糖、高脂飼料喂養(yǎng)4周后，腹腔注射鏈脲佐菌素30mg/kg，并繼續(xù)給予高糖高脂飼料2周，禁食12h后測定空腹血糖(FBG)，F(xiàn)BG≥11.1mmoL/L視為造模成功[2]。

1.4.2給藥方法二甲雙胍組(Met組)，灌胃100mg/(kg·d);滋腎雙益復(fù)方低劑量組(ZL組)灌胃500mg/(kg·d);滋腎雙益復(fù)方中劑量組(ZM組)灌胃1000mg/(kg·d),滋腎雙益復(fù)方高劑量組(ZH組)灌胃2000mg/(kg·d)。每組10只，連續(xù)給藥60天。

2結(jié)果

2.1滋腎雙益復(fù)方對2型糖尿病大鼠FBG、HbAlc的影響與正常組比較，模型組大鼠FBG、HbAlc含量升高(P<0.01)；滋腎雙益復(fù)方可顯著降低糖尿病大鼠的FBG、HbAlc含量，表明滋腎雙益復(fù)方可有效降低糖尿病大鼠的血糖，見表1。

表1　各組大鼠FBG 、HbAlc 的比較±s)

注：與正常組比,△△P<0.01；與模型組比,**P<0.01。

2.2滋腎雙益復(fù)方對2型糖尿病大鼠C肽、Homa-IR及GLP-1分泌的影響與正常組比較，模型組大鼠GLP-1含量降低(P<0.01)。滋腎雙益復(fù)方各劑量組均能促進(jìn)2型糖尿病大鼠GLP-1的分泌(P<0.05，P<0.01)，見表2。

表2　滋腎雙益復(fù)方對大鼠C-肽、IR指數(shù)及GLP-1的影響

注：與正常組比較，△P<0.05;△△P<0.01;與模型組比較，*P<0.05;**P<0.01。

2.3滋腎雙益復(fù)方對2型糖尿病大鼠SOD 、FFA、 MDA的影響與正常組比較，模型組大鼠SOD的活性明顯下降(P<0.01)， MDA、FFA的含量升高(P<0.01)。滋腎雙益復(fù)方高劑量組的SOD活性顯著升高，滋腎雙益復(fù)方高劑量組MDA和FFA水平顯著降低。見表3。

表3　滋腎雙益復(fù)方對2型糖尿病大鼠SOD 、MDA和FFA的影響

注：與正常組比較，△△P<0.01;與模型組比較，*P<0.05;**P<0.01。

3討論

胰島素抵抗(IR)是機體對胰島素的生物效應(yīng)減低，機體胰島素介導(dǎo)的葡萄糖攝取和代謝能力減低，包括胰島素的敏感性反應(yīng)性下降。T2DM中90%存在IR，導(dǎo)致T2DM胰島素抵抗的主要因素包括FFA的升高、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)以及細(xì)胞內(nèi)在機制異常等。

FFA是細(xì)胞膜脂質(zhì)結(jié)構(gòu)和前列腺素合成的供體，為脂肪代謝的中間產(chǎn)物，是機體主要供給能量的來源。升高的FFA可以使胰島素受體底物的絲氨酸殘基磷酸化作用增強，影響了胰島素介導(dǎo)的葡萄糖轉(zhuǎn)運，導(dǎo)致糖代謝障礙；SOD是體內(nèi)合成的氧自由基清除劑，其活性可反映機體抗氧化的能力。MDA是生物膜中多價不飽和脂肪酸受自由基作用生成的脂質(zhì)過氧化代謝產(chǎn)物，其含量反映機體脂質(zhì)過氧化的速度和程度，代表自由基的活性[4]；GLP-1是一種腸促胰島素激素，具有促進(jìn)胰島素分泌、抑制胰高血糖素釋放及改善胰島β細(xì)胞功能。C肽與胰島素以等分子數(shù)共存并同時釋放于毛細(xì)血管循環(huán)中，C肽不被肝臟破壞，其半衰期較胰島素長，測定血循環(huán)中C肽水平能較好的反映胰島β細(xì)胞合成與釋放胰島素功能。

滋腎雙益復(fù)方為中藥復(fù)方制劑，本實驗結(jié)果表明滋腎雙益方可降低2型糖尿病大鼠的FBC及Hbalc水平，提高C-肽水平，促進(jìn)GLP-1的分泌，并可以使SOD活性升高、 MDA和FFA水平顯著降低，表明滋腎雙益復(fù)方可調(diào)節(jié)2型糖尿病大鼠的糖代謝亂，改善胰島素抵抗，抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)及促進(jìn)GLP-1的分泌可能是其作用機制之一，本實驗的研究為該復(fù)方的深層次研究奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1]陳翰卿,王旭.2型糖尿病胰島素抵抗中醫(yī)藥治療研究概況[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2012,14(6):72-74

[2]田春雨,薄海美,喇孝瑾,等.滋腎清肝代平方對2型糖尿病大鼠糖、脂代謝作用的研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2014,41(8):1745-1747

[3]李霞,周智廣,亓海英,等.用空腹C 肽代替胰島素改良Homa公式評價胰島素抵抗和胰島β細(xì)胞功能[J].中南大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版,2004,29(4):419-423

[4]崔鵬,田春雨,張艷萍,等.雙益方對2型糖尿病大鼠SOD、MDA、FFA影響的實驗研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2013,24(8):1840-1842

(岳靜玲編輯)

Study on mechanism and glucose metabolism of type 2 diabetes rats with zishenshuangyi formula

LIWenhao,TIANChunyu,BOHaimei,et

al(NorthChinaUniversityofScienceandTechnology,Tangshan063000,China)

[ABSTRACT]ObjectiveTo study effects of Zishenshuangyi formula on mechanism and glucose metabolism of type 2 diabetes rats.MethodsSelected T2DM rats and randomly divided into groups: model group,Zishenshuangyi formula low dose group(ig,500mg/(kg·d),middle dose group (ig,1000mg/(kg·d),and high dose treatment group(ig,2000mg/(kg·d),metformin group(ig,100mg/(kg·d).Blood glucose,HbAlc,C-P,GLP-1 and FFA,SOD,MDA were detected after 60 d of continuous medication.ResultsCompared with the normal group,FBG,HbAlc of model group was significantly higher(P<0.01).Compared with model group,Zishenshuangyi formula can significantly reduce the levels of blood glucose,HbAlc,(P<0.05,P<0.01),and also can significantly improve the level of C-P,GLP-1(P<0.05,P<0.01),inhibit oxidative stress.ConclusionZishenshuangyi formula can effectively reduce T2DM Rats blood glucose,improve insulin resistance,increase GLP-1 content and inhibit oxidative stress may be the mechanism.

[KEYWORDS]Zishenshuangyi formula.Type 2 diabetes mellitus. Glucose metabolism

[中圖分類號]R 22

[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A

[文章編號]2095-2694(2016)02-148-03

【通訊作者】田春雨

【作者簡介】李文浩(1995-)，男，本科生。研究方向：中醫(yī)藥防治2型糖尿病。

【基金項目】華北理工大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目(編號：X2015205)；河北省自然科學(xué)基金資助項目(編號：H2015209025)；河北省高等學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)研究項目(編號：QN2015119)；河北省衛(wèi)生和計劃生育委員會科研項目(編號：ZD20140072)。