董牧群，熊利霞，謝遠(yuǎn)紅，張紅星，劉 慧,*，賈 慧，連正興（.北京農(nóng)學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院，微生態(tài)制劑關(guān)鍵技術(shù)開發(fā)北京市工程實(shí)驗(yàn)室，食品質(zhì)量與安全北京實(shí)驗(yàn)室，北京 006；.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，北京 0009）

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藏靈菇源克魯維酵母菌M3調(diào)節(jié)大鼠腸道菌群平衡的研究

董牧群1，熊利霞1，謝遠(yuǎn)紅1，張紅星1，劉 慧1,*，賈 慧1，連正興2
（1.北京農(nóng)學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院，微生態(tài)制劑關(guān)鍵技術(shù)開發(fā)北京市工程實(shí)驗(yàn)室，食品質(zhì)量與安全北京實(shí)驗(yàn)室，北京 102206；2.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，北京 100091）

摘 要：利用從藏靈菇中篩選出的發(fā)酵性能優(yōu)良且產(chǎn)膽鹽水解酶的馬克斯克魯維酵母菌M3菌株，制備凍干菌粉作為受試物進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)，探討其對預(yù)防性高膽固醇血癥大鼠腸道菌群平衡的作用。采用預(yù)防高膽固醇血癥大鼠模型，將40 只無特定病原體（specific pathogen free，SPF）級3 周齡的大鼠分為高脂模型組、低劑量、中劑量和高劑量實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)組分別灌胃低、中、高劑量的受試物，高脂模型組灌胃蒸餾水，連續(xù)7 周。結(jié)果表明，前5 周4 組大鼠糞便中乳酸桿菌（lactobacilli）、沙門氏菌（Salmonella）、產(chǎn)氣莢膜梭菌（Clostridium perfringens）的數(shù)量處于平緩變化狀態(tài)，且3 個(gè)實(shí)驗(yàn)組與高脂模型組相比無顯著性差異；5 周時(shí)，3 個(gè)實(shí)驗(yàn)組大鼠糞便中乳桿菌的數(shù)量極顯著高于高脂模型組（P＜0.01），沙門氏菌的數(shù)量極顯著低于高脂模型組（P＜0.01），產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量顯著低于高脂模型組（P＜0.05）；其中低劑量組的乳桿菌數(shù)量最高而沙門氏菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量最低，說明低劑量實(shí)驗(yàn)組優(yōu)于中、高劑量實(shí)驗(yàn)組。顯示藏靈菇源克魯維酵母菌M3能夠調(diào)節(jié)高膽固醇血癥大鼠腸道有益菌的生長，并抑制有害菌的繁殖，具有良好的調(diào)節(jié)腸道菌群平衡的效果。

關(guān)鍵詞：藏靈菇；馬克斯克魯維酵母菌；動物實(shí)驗(yàn)；腸道菌群平衡

引文格式：

董牧群,熊利霞,謝遠(yuǎn)紅,等.藏靈菇源克魯維酵母菌M3調(diào)節(jié)大鼠腸道菌群平衡的研究[J].食品科學(xué),2016,37(5):197-201.DOI:10.7506/spkx1002-6630-201605035.http://www.spkx.net.cn

DONG Muqun,XIONG Lixia,XIE Yuanhong,et al.Regulatory effect of Kluyveromyces marxianus M3 isolated from Tibetan kefir on the intestinal flora balance in rats[J].Food Science,2016,37(5):197-201.(in Chinese with English abstract)

腸道菌群是一個(gè)復(fù)雜的微生態(tài)系統(tǒng)，在正常生理?xiàng)l件下參與維生素的合成、膽汁酸的降解、營養(yǎng)物質(zhì)的消化及局部和全身的免疫[1]。肥胖、高脂血癥、糖尿病等代謝性疾病及抗生素等藥物的使用，均會引起腸道菌群失衡[2]。當(dāng)肝臟發(fā)生病變時(shí)，會造成脂質(zhì)代謝紊亂，肝細(xì)胞膽汁排泌減少，腸蠕動減慢，微絨毛損傷，消化道功能減弱，腸道清除、排空能力降低[3]，腸道抗體、溶菌酶、黏液分泌減少，腸壁局部抵抗力下降[4]，使得有害菌數(shù)量增長甚至占優(yōu)勢，造成嚴(yán)重的腸道菌群失衡。有研究報(bào)道，肝功能損害越嚴(yán)重腸道菌群失調(diào)越嚴(yán)重[5]。

課題前期采用高通量篩選技術(shù)，從藏靈菇中分離篩選并鑒定出發(fā)酵性能優(yōu)良的馬克斯克魯維酵母菌（Kluyveromyces marxianus）M3，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明K.marxianus M3可在生長代謝過程中產(chǎn)生高活力膽鹽水解酶，且產(chǎn)量較高；又經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)證明其具有較強(qiáng)的耐胃腸道逆環(huán)境特性和良好的降膽固醇功效[6]。

目前，國內(nèi)外對乳酸菌調(diào)節(jié)腸道菌群平衡的研究報(bào)道頗多，而對酵母菌調(diào)節(jié)腸道菌群平衡的研究少見報(bào)道。伍靜等[7]利用抗生素干擾建立小鼠腸道菌群失衡模型，并利用乳酸桿菌制劑進(jìn)行調(diào)節(jié)治療。Angelakis等[8]研究了乳酸菌對小鼠體質(zhì)量、腸道菌群的作用。Bruzzese等[9]利用乳酸菌對患有囊胞性纖維癥的兒童進(jìn)行隨機(jī)臨床實(shí)驗(yàn)，證明其對腸道菌群失衡和腸炎有恢復(fù)作用。童佩[10]探討了布拉酵母調(diào)節(jié)兒童腸道菌群失調(diào)造成的便秘與腹瀉的療效。有關(guān)藏靈菇源馬克斯克魯維酵母菌促進(jìn)有益菌的生長，調(diào)節(jié)腸道菌群平衡的研究尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過對預(yù)防性高膽固醇血癥大鼠灌胃不同劑量馬克斯克魯維酵母菌M3，檢測大鼠糞便中乳酸桿菌（lactobacilli）、沙門氏菌（Salmonella）、產(chǎn)氣莢膜梭菌（Clostridium perfringens）的活菌數(shù)量，研究馬克斯克魯維酵母菌M3調(diào)節(jié)預(yù)防性高膽固醇血癥大鼠腸道菌群平衡的效果，旨在為開發(fā)研制酵母菌功能性食品提供科學(xué)理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1菌株

馬克斯克魯維酵母菌（Kluyveromyces marxianus）M3，從藏靈菇中篩選并鑒定為高產(chǎn)膽鹽水解酶的菌株[11]。

優(yōu)化發(fā)酵條件下對馬克斯克魯維酵母菌M3進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，經(jīng)離心濃縮和真空冷凍干燥后，得到活菌數(shù)量達(dá)108CFU/g的凍干菌粉，與溫?zé)嵴麴s水以1∶5（m/V）的比例制備受試物。

1.1.2動物

40 只3 周齡無特定病原體（specific pathogen free，SPF）級斷乳健康雌性Wistar大鼠，體質(zhì)量130～150 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供，動物許可證編號SCXK（京）2006-0009。

1.1.3動物飼料與灌胃劑量

SPF級高脂飼料（78.8%基礎(chǔ)飼料、1%膽固醇、10%蛋黃粉、10%豬油、0.2%膽鹽）、SPF級基礎(chǔ)飼料（20.8%粗蛋白、4.5%粗脂肪、6.83%粗灰分、10%水分、4.4%粗纖維、1.23%鈣、0.96%磷），均由北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供，許可證編號SCXK（京）2009-0012。

低、中、高劑量實(shí)驗(yàn)組分別以體質(zhì)量按照0.5、1.0、2.0 mL/（100 g? d）進(jìn)行受試物灌胃，高脂模型組灌胃蒸餾水。

1.1.4培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（potato dextrose agar，PDA）培養(yǎng)基（g/L）：馬鈴薯200.0、葡萄糖20.0、瓊脂15.0。

乳酸細(xì)菌瓊脂培養(yǎng)基（MRS）（g/L）：蛋白胨10.0、牛肉粉5.0、酵母粉4.0、葡萄糖20.0、磷酸氫二鉀2.0、乙酸鈉5.0、檸檬酸三銨2.0、硫酸鎂0.2、硫酸錳0.05、瓊脂15.0，吐溫-80 1.0 mL，pH值調(diào)至6.2±0.1。

亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基（BS）（g/L）：蛋白胨10.0、牛肉粉5.0、葡萄糖5.0、磷酸氫二鈉4.0、硫酸亞鐵0.3、亞硫酸鈉6.0、檸檬酸鉍銨2.0、煌綠0.025、瓊脂18.0，pH值調(diào)至7.5±0.1。

亞硫酸鹽-多粘菌素-磺胺嘧啶瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基（sulfite polymixin sulphadiazine agar，SPS）（g/L）：胰酪胨15.0、酵母粉10.0、檸檬酸鐵0.5、瓊脂15.0，pH值調(diào)至7.0±0.1。

Biolog鑒定儀專用[12]標(biāo)準(zhǔn)BUY（biolog universal yeast）培養(yǎng)基和YT微孔接種板。

1.2 儀器與設(shè)備

7080型日立全自動生化分析儀 日本日立公司；752紫外-可見分光光度計(jì) 北京東南儀城實(shí)驗(yàn)室設(shè)備廠；TGL-20M型高速臺式冷凍離心機(jī) 上海盧湘儀離心機(jī)廠；Biolog MicroStation微生物快速鑒定儀 美國Biolog公司；Moticam1300數(shù)碼顯微攝像系統(tǒng) Motic實(shí)業(yè)集團(tuán)；DL-CJ-IND型無菌超凈工作臺 北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司；SKP-02.500型恒溫培養(yǎng)箱 黃石恒豐醫(yī)療器械有限公司。

1.3方法

1.3.1飼養(yǎng)條件

實(shí)驗(yàn)大鼠于北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部動物實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)。大鼠均飼養(yǎng)于SPF級環(huán)境，5 只/籠，自由采食、采水，室內(nèi)通風(fēng)條件良好，正常晝夜變化，相對濕度為40%～70%，室溫18～24 ℃。

1.3.2分組與處理

實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，將大鼠分為高脂模型組、低劑量、中劑量和高劑量實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)大鼠均飼喂高脂飼料，實(shí)驗(yàn)組灌胃受試物，高脂模型組灌胃蒸餾水，連續(xù)7 周。每周稱體質(zhì)量1 次，并依此調(diào)整灌胃量。

1.3.3糞便的采集

在動物實(shí)驗(yàn)第1、3、5、7周的第7天，輕輕擠壓大鼠直腸部，分別收集新鮮糞便約2 g于無菌試管中，并立即將試管放入?yún)捬豕拗小?/p>

1.3.4酵母菌的分離與鑒定

于10 mL PDA液體培養(yǎng)基中加入1 g大鼠糞便（采集于實(shí)驗(yàn)第1周），富集培養(yǎng)18～24 h，稀釋后采用酸化PDA培養(yǎng)基（用0.1 g/mL的酒石酸水溶液調(diào)節(jié)滅菌后的PDA培養(yǎng)基至pH 3.5）進(jìn)行涂布平板法分離，挑取表面光滑的乳白色圓形菌落，進(jìn)行純化培養(yǎng)，獲得待鑒定菌種[12]。

鑒定流程：待鑒定菌種單個(gè)菌落→連續(xù)劃線BUY平板→26 ℃培養(yǎng)24～48 h→用無菌純凈水制備菌懸液→濁度計(jì)調(diào)整濁度為（47±3）% T→接種于YT微孔接種板→26 ℃培養(yǎng)24～48 h→自動微生物鑒定儀讀取鑒定結(jié)果。

1.3.5乳桿菌、沙門氏菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌的平板培養(yǎng)與計(jì)數(shù)

取1 g動物糞便于9 mL無菌生理鹽水中勻漿混勻，稀釋梯度為10－1～10－8，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇適當(dāng)?shù)? 個(gè)稀釋度，分別取0.1 mL稀釋液均勻涂布于相應(yīng)的平板培養(yǎng)基上，每個(gè)稀釋梯度設(shè)3 個(gè)重復(fù)。乳酸桿菌采用MRS培養(yǎng)基在（36±1） ℃厭氧條件下培養(yǎng)48 h后計(jì)數(shù)；沙門氏菌采用BS培養(yǎng)基（36±1） ℃條件下培養(yǎng)24 h后計(jì)數(shù)黑色、有金屬光澤菌落；產(chǎn)氣莢膜梭菌采用SPS培養(yǎng)基在（36±1） ℃厭氧條件下培養(yǎng)48 h后計(jì)數(shù)黑色菌落[13]。

培養(yǎng)后觀察平板上菌落特征，挑取符合3 種腸道菌菌落形態(tài)的菌落，進(jìn)行革蘭氏染色并觀察菌體形態(tài)。確定為所需菌種后計(jì)數(shù)菌落數(shù)量，計(jì)算每克濕糞便中3 種腸道細(xì)菌的活菌數(shù)量。

1.3.6調(diào)節(jié)腸道菌群平衡結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

采用方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，根據(jù)給予受試物前后各組大鼠腸道菌群值的變化進(jìn)行評價(jià)[14]：1）糞便中雙歧桿菌和（或）乳桿菌增加，產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或不增加，擬桿菌、腸桿菌和（或）腸球菌減少或無明顯變化；2）糞便中雙歧桿菌和（或）乳桿菌增加，產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或不增加，擬桿菌、腸桿菌和（或）腸球菌明顯增加，但增加幅度低于雙歧桿菌和（或）乳桿菌增加的幅度。符合以上任一標(biāo)準(zhǔn)，并存在顯著差異，即可判定受試物具有調(diào)節(jié)腸道菌群平衡的作用。

1.3.7菌落總數(shù)測定

參照GB 4789.2—2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測定》[15]方法進(jìn)行測定。

1.4數(shù)據(jù)處理

2　結(jié)果與分析

2.1酵母菌分離與鑒定結(jié)果

圖1　分離酵母菌M3-ds的菌落形態(tài)及革蘭氏染色圖Fig.1 Colony morphology and Gram staining of M3-ds

利用從藏靈菇中篩選的馬克斯克魯維酵母M3菌株制備的凍干菌粉對大鼠進(jìn)行灌胃實(shí)驗(yàn)后，從大鼠糞便中分離的酵母菌只有M3-ds菌株。由圖1可知，酵母菌M3-ds在PDA培養(yǎng)基上的菌落呈乳白色，微隆起，表面光滑，不透明，有光澤的圓形菌落（圖1A），革蘭氏染色圖顯示其菌體形態(tài)（圖1B）與馬克斯克魯維酵母菌M3（圖2）相似（與課題前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同[16]），經(jīng)微生物快速鑒定儀鑒定為馬克斯克魯維酵母菌，由此進(jìn)一步證明了藏靈菇源馬克斯克魯維酵母M3具有良好的耐受胃腸道逆環(huán)境能力[17]。

圖2　馬克斯克魯維酵母菌M3革蘭氏染色圖Fig.2 Gram staining of M3

2.2藏靈菇源馬克斯克魯維酵母菌M3對大鼠體質(zhì)量的影響

表1　藏靈菇源酵母凍干菌粉對大鼠體質(zhì)量的影響（x =10）Table 1 Effect of lyophilized Kluyveromyces marxianus from Tibetan kefir on body mass of rats(x ,= 10)

由表1可知，大鼠的體質(zhì)量隨著喂養(yǎng)時(shí)間的延長，低、中、高劑量實(shí)驗(yàn)組大鼠體質(zhì)量與高脂模型組基本無差異（P＞0.05），表明藏靈菇源馬克斯克魯維酵母菌M3對大鼠體質(zhì)量基本無影響。

2.3藏靈菇源馬克斯克魯維酵母菌M3對大鼠腸道中乳桿菌數(shù)量的影響

±s，n==1100）Table 2 Effect of表2　藏靈菇源馬克斯克魯維酵母菌M3對大鼠腸道中乳桿菌數(shù)量的影響（xf Kluyveromyces marxiannuuss M3 on total lactobacillii count in the intestinal tract of rats(x ± s,,n　=　1100))lg（CFU/g）

在機(jī)體腸道內(nèi)，作為人體和動物腸道內(nèi)定殖且占絕對優(yōu)勢的一類生理活性菌，乳酸桿菌可通過產(chǎn)生乳酸、乙酸、過氧化氫等抗菌物質(zhì)，對維持宿主腸道健康產(chǎn)生有益影響，因此乳酸桿菌數(shù)量的增加對維持腸道菌群平衡具有重要作用，且有利于提高機(jī)體健康水平[18]。由表2可知，實(shí)驗(yàn)初期4 組大鼠糞便中乳酸桿菌的數(shù)量相差無幾。1～3周期間，高脂模型組大鼠糞便中乳酸桿菌的數(shù)量隨著大鼠的成長未發(fā)生顯著變化，增勢緩慢；3個(gè)實(shí)驗(yàn)組乳桿菌的數(shù)量呈平緩上升趨勢，增量較為明顯。從第5周測得數(shù)據(jù)可知，3個(gè)實(shí)驗(yàn)組大鼠糞便中乳酸桿菌的數(shù)量極顯著（P＜0.01）高于高脂模型組，第5周時(shí)低劑量實(shí)驗(yàn)組數(shù)量最高，第7周時(shí)中劑量實(shí)驗(yàn)組數(shù)量最高。這可能是因?yàn)閷?shí)驗(yàn)的前5周，藏靈菇源馬克斯克魯維酵母菌M3菌株開始在腸道中定殖并大量繁殖至占有一定優(yōu)勢，5周后開始發(fā)揮作用，促進(jìn)了乳酸桿菌的繁殖。綜上，藏靈菇源馬克斯克魯維酵母菌M3能夠極顯著提高大鼠腸道乳酸桿菌的數(shù)量，以低、中劑量效果最為明顯。

2.4藏靈菇源馬克斯克魯維酵母菌M3對大鼠腸道中沙門氏菌數(shù)量的影響

表3　藏靈菇源馬克斯克魯維酵母菌M3對大鼠腸道中沙門氏菌數(shù)量的影響（x =10）Table 3 Effect of Kluyveromyces marxianus M3 on Salmonella count in the intestinal tract of rats(x ,= 10)lg（CFU/g）

在機(jī)體腸道微生態(tài)失衡時(shí)，致病菌如沙門氏菌大量增加，產(chǎn)生毒副作用，引起機(jī)體消化機(jī)能紊亂，危害機(jī)體健康[19]。由表3可知，實(shí)驗(yàn)初期4 組大鼠糞便中沙門氏菌的數(shù)量相差不大。前5周時(shí)，高脂模型組大鼠糞便中沙門氏菌的數(shù)量隨飼喂時(shí)間的延長逐漸降低，3 個(gè)實(shí)驗(yàn)組的下降趨勢與高脂模型組相比更加明顯。5～7 周時(shí)，3 個(gè)實(shí)驗(yàn)組大鼠糞便中沙門氏菌的數(shù)量極顯著低于高脂模型組（P＜0.01），且低劑量實(shí)驗(yàn)組數(shù)量最低。這可能是因?yàn)閺牡?周開始藏靈菇源馬克斯克魯維酵母菌M3菌株在腸道中定殖、占優(yōu)勢，對沙門氏菌起到一定的抑制作用，并且隨著時(shí)間的增加，腸道中乳酸桿菌數(shù)量也逐漸增加，也抑制了沙門氏菌的繁殖。綜上，藏靈菇源馬克斯克魯維酵母菌M3能夠極顯著降低大鼠腸道沙門氏菌的數(shù)量，且低劑量效果最為明顯。

2.5藏靈菇源馬克斯克魯維酵母菌M3對大鼠腸道中產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量的影響

表4　藏靈菇源馬克斯克魯維酵母菌M3對大鼠腸道中產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量的影響（x ±s，n==1100）Table 4 Effect ofnus M33　oonn　Clostriddiiuumm perfrinnggeennss count in the intestinal tract of rats(xf Kluyveromyces marxianus ± s,,n　=　1100))lg（CFU/g）

在機(jī)體腸道內(nèi)，產(chǎn)氣莢膜梭菌屬于致病菌，可分泌外毒素，引起胃腸道壞死性病變，若其數(shù)量達(dá)到一定水平，不利機(jī)體健康[20]。由表4可知，實(shí)驗(yàn)初期4 組大鼠糞便中氣莢膜梭菌的數(shù)量差別不明顯。前5 周，高脂模型組大鼠糞便中產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量隨飼喂時(shí)間的延長逐漸降低；第5～7周期間，低劑量實(shí)驗(yàn)組大鼠糞便中產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量顯著低于高脂模型組（P＜0.05）。這應(yīng)該是因?yàn)榈?周后，藏靈菇源馬克斯克魯維酵母菌M3菌株一方面選擇性地增加了有益菌乳酸桿菌的數(shù)量；另一方面，抑制了產(chǎn)氣莢膜梭菌的生長。綜上，藏靈菇源馬克斯克魯維酵母菌M3能夠顯著降低實(shí)驗(yàn)組大鼠產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量，且以低劑量效果尤為明顯。

3　討 論

機(jī)體腸道正常菌群失衡會造成腸道功能紊亂，對機(jī)體正常代謝和抗感染能力有影響，易引發(fā)腸道感染，出現(xiàn)便秘、腹瀉等癥狀。維持腸道菌群平衡，對保持機(jī)體健康水平具有重要意義[21]。

Xie Yuanhong等[22]研究表明，高膽固醇血癥模型建立成功時(shí)，高脂模型組大鼠血清膽固醇和甘油三酯水平較高，肝功能紊亂，肝臟組織病理切片表明肝臟發(fā)生病變；而實(shí)驗(yàn)組大鼠血清膽固醇和甘油三酯基本保持在正常水平，肝臟組織病理切片正常，肝臟未發(fā)生病變。當(dāng)肝臟發(fā)生病變時(shí)，脂質(zhì)代謝紊亂，肝細(xì)胞膽汁排泌減少，腸道清除、排空能力降低，腸道抗體、溶菌酶、黏液分泌減少，腸壁局部抵抗力下降，使得有害菌數(shù)量增長甚至占優(yōu)勢，造成嚴(yán)重的腸道菌群失衡。

通過對大鼠糞便中3 種具有代表性的腸道菌群，即乳酸桿菌（有益菌）、沙門氏菌（致病菌）和產(chǎn)氣莢膜梭菌（致病菌）的活菌數(shù)量的測定，根據(jù)受試物調(diào)節(jié)腸道菌群平衡結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)，可判定藏靈菇源克魯維酵母菌M3對大鼠具有調(diào)節(jié)腸道菌群平衡的作用。這是因?yàn)椴仂`菇源馬克斯克魯維酵母菌M3具有良好的耐受胃腸道逆環(huán)境特性[18]，能夠定殖在腸道中，并大量繁殖占有一定優(yōu)勢，使腸道中有益菌數(shù)量上升，有害菌數(shù)量下降，從而起到調(diào)節(jié)腸道菌群平衡的效果；同時(shí)，藏靈菇源克魯維酵母菌M3產(chǎn)生高活力的膽鹽水解酶，能有效降低血清總膽固醇（total choleiterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）的含量，從而減緩機(jī)體肝臟組織病變，維持腸道正常生理功能，使有害菌數(shù)量不占優(yōu)勢，亦起到調(diào)節(jié)腸道菌群平衡的功效。

參考文獻(xiàn)：

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Regulatory Effect of Kluyveromyces marxianus M3 Isolated from Tibetan Kefir on the Intestinal Flora Balance in Rats

DONG Muqun1,XIONG Lixia1,XIE Yuanhong1,ZHANG Hongxing1,LIU Hui1,*,JIA Hui1,LIAN Zhengxing2
(1.Beijing Engineering Laboratory of Key Technology Development of Microecologics,Beijing Laboratory of Food Quality and Safety,College of Food Science and Engineering,Beijing University of Agriculture,Beijing 102206,China; 2.College of Animal Science and Technology,China Agricultural University,Beijing 100091,China)

Abstract:To evaluate the effects ofKluyveromyces marxianus M3,with good fermentation performance and high ability to produce bile salt hydrolase,isolated from Tibetan kefir on the intestinal flora balance in experimental hypercholesterolemic rats,40 rats(43 weeks old)were divided into 4 groups and fed a high fat diet supplemented with low,medium and high dose of freeze-dried K.marxianus M3 powder for a 7-week experimental period.According to our results,in the first five weeks,the numbers of 3 kinds of bacteria in rat feces gradually changed,and there was no significant difference between the three experimental groups and the high-fat model group; at the fifth week,the preventive hypercholesterolemia model was established successfully,the number of Lactobacillus in the three experimental groups was significantly higher than that in the high-fat model group(P < 0.01),while the number of Salmonella(P < 0.01)and Clostridium perfringens(P < 0.05)was significantly lower than in the high-fat model; among all experimental groups,the number of Lactobacillus in the low dose group was the highest while Salmonella and Clostridium perfringens were the lowest,showing that the effect of low dose was better than the medium and high doses.These results demonstrated that K.marxianus M3 could promote the growth of intestinal beneficial bacteria and inhibit the breeding of harmful bacteria in the hypercholesterolemic rats,having a good effect on the intestinal flora balance.

Key words:Tibetan kefir; Kluyveromyces marxianus; animal experiment; intestinal flora balance

中圖分類號：book=198,ebook=205Q93.337

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-6630（2016）05-0197-05

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201605035 10.7506/spkx1002-6630-201605035.http://www.spkx.net.cn

*通信作者：劉慧（1963—），女，教授，碩士，研究方向?yàn)槭称肺⑸锱c發(fā)酵。E-mail：foodlh@263.net

作者簡介：董牧群（1989—），女，碩士，研究方向?yàn)檗r(nóng)產(chǎn)品貯藏與加工。E-mail：dmqtc@sina.com

基金項(xiàng)目：北京市自然科學(xué)基金項(xiàng)目（5092008）；國家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項(xiàng)（2014ZX08008-005）；北京市屬高等學(xué)校高層次人才引進(jìn)與培養(yǎng)項(xiàng)目（CIT&TCD20140315）

收稿日期：2015-10-31