劉容旭，高辰哲，姜 帆，崔 憲，何 畔，董和謙，韓建春（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030）

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五味子多糖對(duì)兩種腸道腫瘤細(xì)胞抑制作用的影響

劉容旭，高辰哲，姜 帆，崔 憲，何 畔，董和謙，韓建春*
（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030）

摘 要：以五味子為原料水提多糖，經(jīng)超濾、去蛋白后制得不同分子質(zhì)量的五味子多糖（Schisandraceae polysaccharide，SP）組分SP1（分子質(zhì)量100 ku以上）和SP2（分子質(zhì)量10～100 ku），使用Caco-2和HT-29兩種腸道腫瘤細(xì)胞檢測(cè)體外抗腫瘤活性。結(jié)果表明：兩種SP干預(yù)的腫瘤細(xì)胞增殖均受到抑制，實(shí)時(shí)熒光定量實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Caspase-3相對(duì)表達(dá)量均出現(xiàn)了一定程度升高。其中SP1抑制作用較小，需較高劑量（500 μg/mL以上）孵育較長(zhǎng)時(shí)間（72 h）才有顯著抑制效果（P＜0.05），SP2抑制作用明顯，顯著抑制所需孵育時(shí)間和劑量都更少，對(duì)Caspase-3相對(duì)表達(dá)量提升更大。實(shí)驗(yàn)顯示SP具有很好的抑制腸道腫瘤增殖潛力，小分子質(zhì)量組分抗癌活性更強(qiáng)。

關(guān)鍵詞：五味子；多糖；抗腫瘤；實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

引文格式：

劉容旭,高辰哲,姜帆,等.五味子多糖對(duì)兩種腸道腫瘤細(xì)胞抑制作用的影響[J].食品科學(xué),2016,37(5):192-196.

LIU Rongxu,GAO Chenzhe,JIANG Fan,et al.Inhibitory effect of Schisandraceae polysaccharides on growth of intestinal tumor cells[J].Food Science,2016,37(5):192-196.(in Chinese with English abstract)DOI:10.7506/spkx1002-6630-201605034.http://www.spkx.net.cn

五味子屬木蘭科植物，是一種味酸、性甘溫的健康食品，具有調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)、控制血壓、改善視力和提高免疫力的作用[1-2]。近期研究也表明，五味子也有保肝[3]、抗疲勞[4-5]、抗腫瘤[6-7]、鎮(zhèn)痛[8]與抗氧化[9]的功效。對(duì)五味子進(jìn)行藥理作用的研究表明，其抗腫瘤作用的有效成分主要是木質(zhì)素和多糖[10-12]。

對(duì)五味子抗腫瘤活性成分的研究目前主要集中于肝癌細(xì)胞[13]、乳腺癌細(xì)胞[14]、胃癌細(xì)胞[15]、小鼠瘤體細(xì)胞[16]等，對(duì)于腸道腫瘤細(xì)胞的研究較少[17-18]。本實(shí)驗(yàn)采用結(jié)腸腺癌細(xì)胞Caco-2和結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29，分別研究了超濾分級(jí)不同分子質(zhì)量五味子多糖（Schisandraceaepolysaccharide，SP）組分對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用，為SP抗腫瘤特性的進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料、培養(yǎng)基與試劑

干燥五味子 黑龍江省北安市紅星農(nóng)場(chǎng)；Caco-2細(xì)胞、HT-29細(xì)胞 中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫。

RPMI 1640培養(yǎng)基 美國(guó)Hyclone公司；基礎(chǔ)高糖培養(yǎng)基DMEM（dulbecco’s modified eagle’s medium，DMEM） 美國(guó)Gibco公司。

胎牛血清 美國(guó)Hyclone公司；青鏈霉素雙抗（100×） 北京索萊寶科技有限公司；0.25%胰蛋白酶-乙二胺四乙酸（1×） 美國(guó)Gibco公司；四氮甲唑藍(lán)（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，MTT） 美國(guó)Amresco公司；RNAprep pure總RNA提取試劑盒（離心柱型）、FastQuantRTKit（With gDNase）逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、SuperReal PreMix Plus（SYBR Green）熒光定量試劑盒 天根生化科技（北京）有限公司；濃硫酸、苯酚、石油醚、NaOH、乙醇、葡萄糖、二甲基亞砜、氯仿、正丁醇等均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2儀器與設(shè)備

Labscale TTF System小型切向超濾系統(tǒng) 美國(guó)Millipore公司；Biomax Polyethersulfone小型超濾膜包×2 （10、100 ku孔徑）；721分光光度計(jì) 上海光學(xué)儀器廠；202型電熱恒溫干燥箱 天津市泰斯特儀器有限公司；索氏抽提器 天津市天玻儀器有限公司；超微細(xì)粉碎機(jī) 上海泰斯特儀器廠；HH-4型電熱恒溫水浴鍋常州國(guó)華電器有限公司；HJ-5多功能攪拌器 江蘇金壇醫(yī)療儀器廠；LG10-24A高速離心機(jī) 北京醫(yī)用離心機(jī)廠；IKA小舞靈漩渦混合器 萊貝（上海）科學(xué)儀器有限公司；全自動(dòng)酶標(biāo)儀WD-2102A 杭州匯爾儀器設(shè)備有限公司；XSP-6C光學(xué)顯微鏡 日本Olympus公司；CO2培養(yǎng)箱 日本Sanyo公司；7500實(shí)時(shí)熒光定量系統(tǒng)美國(guó)Life Technologies公司。

1.3方法

1.3.1SP的提取與純化

采用本課題組已報(bào)道的方法提取多糖[19]：取潔凈飽滿五味子，粉碎后烘干2 h至恒質(zhì)量，使用索式抽提器脫脂12 h以上，按料液比1∶10（m/V）添加蒸餾水，4 ℃條件下浸泡6 h以上后加入NaOH緩慢調(diào)節(jié)pH值至7.0，60 ℃條件下水浴攪拌提取2 h以上，200 目尼龍紗布過濾后濾渣重復(fù)水提一遍，取兩次提取濾液4 000 r/min離心20 min除雜后取上清液，先使用100 ku孔徑超濾膜在0.207 MPa條件下超濾，收集SP1多糖（分子質(zhì)量＞100 ku）截留液；透過液使用10 ku孔徑超濾膜在0.138 MPa條件下超濾，收集SP2多糖（分子質(zhì)量為10～100 ku）截留液。分別對(duì)SP1、SP2截留液使用Sevag法除蛋白[20]，4 ℃條件下透析除雜后凍干。

1.3.2SP純度的檢測(cè)

使用苯酚硫酸法[21]測(cè)定總糖含量。取一定質(zhì)量多糖凍干粉溶解后稀釋一定倍數(shù)依次加入1 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%的苯酚溶液、5 mL濃硫酸，室溫反應(yīng)30 min，漩渦振蕩器混勻后于490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。分別吸取0.1、0.2、0.3、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液于150 mm×10 mm的試管中，各以蒸餾水補(bǔ)至2 mL，另取2 mL蒸餾水作為空白，在空白組和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液中依次加苯酚、濃硫酸，橫坐標(biāo)為多糖質(zhì)量濃度，縱坐標(biāo)為吸光度值，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：y＝0.009 1x＋0.001 4 （R2＝0.998 2）計(jì)算多糖質(zhì)量濃度x，從而根據(jù)多糖溶液的體積算出溶液中多糖質(zhì)量，溶液中多糖質(zhì)量與溶解所用的凍干粉質(zhì)量之比即為多糖純度。

1.3.3Caco-2和HT-29細(xì)胞的培養(yǎng)

完全培養(yǎng)基的配制：取10 mL胎牛血清，1 mL青鏈霉素雙抗（100×），89 mL血清體積分?jǐn)?shù)為10%的完全培養(yǎng)基（培養(yǎng)Caco-2細(xì)胞使用DMEM高糖培養(yǎng)基配制，培養(yǎng)HT-29細(xì)胞使用RPMI 1640培養(yǎng)基），使用0.22 μm微孔濾膜過濾除菌后冷藏備用。

HT-29細(xì)胞和Caco-2細(xì)胞分別于對(duì)應(yīng)的完全培養(yǎng)基中在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，大約2 d換液一次，每瓶加培養(yǎng)基5 mL。傳代使用0.01 mol/mL磷酸鹽緩沖液清洗后，0.25%胰蛋白酶-乙二胺四乙酸（1×）常溫消化3 min。取長(zhǎng)勢(shì)良好的對(duì)數(shù)增殖期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.3.4MTT法檢測(cè)SP細(xì)胞增殖抑制情況

使用1.3.3節(jié)中敘述的方法，分別消化兩種細(xì)胞制成懸液，血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度約2.5×104個(gè)/mL，取96 孔板每孔加入細(xì)胞懸液200 μL，接種培養(yǎng)24 h后，吸去培養(yǎng)基，加入配制好的含有不同濃度多糖培養(yǎng)液培養(yǎng)24、4 8、72 h，每個(gè)指標(biāo)設(shè)5 個(gè)平行孔，并設(shè)不含SP的培養(yǎng)液組作為空白組。之后采用MTT法測(cè)定光密度（OD490 nm）值，研究SP不同組分、不同劑量對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞的抑制率。

MTT法細(xì)胞毒性檢測(cè)采用Xu Weili等[22]的方法?，F(xiàn)用現(xiàn)配質(zhì)量濃度為5 mg/mL的MTT溶液，加藥過程注意避光。每孔加入20 μL MTT溶液，于CO2培養(yǎng)箱中放置4 h，隨后用針頭吸去全部培養(yǎng)基，每孔加入150 μL二甲基亞砜試劑，避光靜置20 min后用酶標(biāo)儀在490 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)。

1.3.5 實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real-time quantitative polymerase chain reaction，real time-qPCR）檢測(cè)細(xì)胞凋亡基因表達(dá)

使用1.3.3節(jié)中敘述的方法，分別消化兩種對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的細(xì)胞，制備懸液后計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度5×106個(gè)/mL，每孔2 mL接種于6 孔板中，培養(yǎng)24 h后吸去培養(yǎng)基，加入含有不同質(zhì)量濃度多糖的培養(yǎng)液培養(yǎng)24、36、48 h。使用顯微鏡對(duì)多糖不同質(zhì)量濃度、時(shí)間作用下的兩種腫瘤細(xì)胞進(jìn)行觀察，然后用于總RNA的提取實(shí)驗(yàn)。

1.3.5.1細(xì)胞總RNA的提取與cDNA的合成

參考RNAprep pure總RNA提取試劑盒（離心柱型）說明提取細(xì)胞總RNA。使用細(xì)胞裂解液350 μL/孔裂解細(xì)胞，將所有溶液移至過濾柱12 000 r/min離心2 min除雜，然后加入與濾液同體積70%乙醇沉淀后移至吸附柱上，經(jīng)除蛋白、DNA酶水解DNA、再次去蛋白、漂洗兩次后使用RNase-Free ddH2O復(fù)融洗脫總RNA。使用紫外分光光度計(jì)分別檢測(cè)RNA提取液在260 nm和280 nm波長(zhǎng)處的吸光度，計(jì)算OD260 nm與OD280 nm的比值，若比值介于1.8～2.0之間則可用于下步實(shí)驗(yàn)。

參考FastQuantRTKit（With gDNase）逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明逆轉(zhuǎn)錄總RNA。取一定量總RNA提取液按比例加入gDNA buffer 42 ℃條件下孵育3 min去除基因組DNA，配制反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系混合液，42 ℃條件下孵育15 min，然后95 ℃條件下孵育3 min，即可逆轉(zhuǎn)錄制得cDNA用于real time-qPCR。短期4 ℃冷藏保存，長(zhǎng)期－20 ℃冷凍保存。

1.3.5.2 real time-qPCR反應(yīng)

參考SuperReal PreMix Plus（SYBR Green）熒光定量試劑盒說明預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化條件后進(jìn)行檢測(cè)。20 μL混合體系：2×SuperReal PreMix Plus 10 μL，上游引物（10 μmol/L）0.6 μL、下游引物（10 μmol/L）0.6 μL，cDNA模板1 μL，50×ROX Reference Dye 0.4 μL，7.4 μL ddH2O，引物序列如表1所示。使用三步法反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性15 min；95 ℃變性10 s，55 ℃退火20 s，40 個(gè)循環(huán)，最后72 ℃延伸32 s（熒光信號(hào)采集），熔解曲線分析。

表1　引物合成序列Table 1 Primer sequences used for real time-qPCR

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

使用SPSS 13軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，MTT檢驗(yàn)做5 副孔平行，其他實(shí)驗(yàn)均做3 組平行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果用表示，用組間方差分析（analysis of variance，ANOVA）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用最小差異顯著法（least-significant difference，LSD）進(jìn)行顯著性比較（P＜0.05）。

2　結(jié)果與分析

2.1SP的純度鑒定

SP經(jīng)過超濾分離、去蛋白處理后凍干，使用苯酚-硫酸法檢測(cè)其配制的多糖溶液總糖含量，計(jì)算不同級(jí)分SP純度：級(jí)分SP1（分子質(zhì)量＞100 ku）純度可達(dá)92.32%，呈淡紅褐色；級(jí)分SP2（分子質(zhì)量為10～100 ku）純度可達(dá)78.13%，呈淺黃色。兩個(gè)級(jí)分的多糖凍干粉溶解于水的速率遠(yuǎn)優(yōu)于傳統(tǒng)有機(jī)溶劑沉淀法制備的多糖，這可能是由于超濾在純化多糖的同時(shí)，可以起到一定的濃縮功效，直接將濃縮后的多糖冷凍干燥，多糖分子在較分散狀態(tài)下去除了周圍的水分，故組織狀態(tài)較為蓬松，復(fù)溶速率大大提高。盡管超濾可以將色素類物質(zhì)部分洗脫，但所得多糖仍有一定顏色，為了不破壞多糖原有活性，故沒有使用較為劇烈的H2O2等氧化劑除色[23]，而是直接將帶有一定顏色的多糖用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。

2.2SP對(duì)Caco-2細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用

圖1　SP對(duì)Caco-2細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用Fig.1 Inhibitory effect of SP1 and SP2 on the growth of Caco-2 cells

SP作用Caco-2細(xì)胞后，對(duì)細(xì)胞的存活率具有一定影響。由圖1a可知，SP1多糖不同劑量孵育條件下，24 h時(shí)細(xì)胞的存活率并未出現(xiàn)明顯下降，48 h個(gè)別高劑量細(xì)胞存活率有一定降低；72 h時(shí)100 μg/mL以上SP1多糖可以顯著降低Caco-2細(xì)胞的存活率，提示較大分子質(zhì)量的SP1多糖需要較長(zhǎng)時(shí)間孵育才會(huì)對(duì)Caco-2腫瘤細(xì)胞的存活率造成影響，而短時(shí)間（48 h內(nèi)）孵育影響不明顯，整體抗癌活性較低。

由圖1b可知，Caco-2細(xì)胞在SP2多糖孵育24 h時(shí)，500 μg/mL以上劑量細(xì)胞存活率同空白對(duì)照組相比出現(xiàn)顯著下降（P＜0.05），并呈現(xiàn)出一定的劑量依賴性。而相同多糖劑量孵育的Caco-2細(xì)胞存活率，也隨著時(shí)間延長(zhǎng)出現(xiàn)了一定下降，部分組別下降顯著。同SP1多糖組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比，SP2多糖500 μg/mL以上組24 h即可有顯著抑制（P＜0.05），孵育時(shí)間越長(zhǎng)對(duì)細(xì)胞存活率影響更大。因此，更小分子質(zhì)量的SP2多糖組具有更好的抑制Caco-2細(xì)胞活性。

2.3SP對(duì)HT-29細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用

圖2　SP對(duì)HT-29細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用Fig.2 Inhibitory effect of SP1 and SP2 on the growth HT-29 cells

由圖2a可知，培養(yǎng)24、48 h時(shí)SP1多糖孵育的HT-29細(xì)胞存活率與空白組相比差異不顯著（P＞0.05），各相同劑量組24 h和48 h細(xì)胞存活率差異也不顯著（P＞0.05）。與此類似，HT-29細(xì)胞在72 h時(shí)，250 μg/mL以上的較高劑量作用可以對(duì)細(xì)胞存活率有顯著下調(diào)作用（P＜0.05）。在培養(yǎng)72 h時(shí)，SP1對(duì)HT-29細(xì)胞的抑制作用說明SP1在營(yíng)養(yǎng)不足時(shí)，細(xì)胞較為脆弱，相同劑量的SP1多糖組分可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)造成較大的影響。

由圖2b可知，SP2多糖孵育HT-29細(xì)胞，不同劑量作用時(shí)細(xì)胞存活率出現(xiàn)了明顯下降。當(dāng)孵育24 h時(shí)，250 μg/mL以上SP2多糖劑量即可對(duì)HT-29細(xì)胞存活率造成顯著下調(diào)（P＜0.05），相比于Caco-2細(xì)胞，相同劑量SP2多糖對(duì)HT-29細(xì)胞存活率下調(diào)作用更顯著（P＜0.05），最低劑量更低（250 μg/mL），高劑量的抑制率也更大。因此，SP2多糖組分顯示出更良好的抑制HT-29腫瘤細(xì)胞活力的能力。

2.4SP處理對(duì)相關(guān)細(xì)胞凋亡基因的表達(dá)影響

細(xì)胞凋亡是一種機(jī)體在某種狀態(tài)下發(fā)生的程序化死亡過程[24]，Caspase-3是細(xì)胞凋亡時(shí)的最終效應(yīng)蛋白之一[25]。它可以通過誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)部骨架蛋白的分解和剪切，從而使細(xì)胞核形成分散片段，參與形成凋亡小體，最終引起細(xì)胞的凋亡。通過real time-qPCR對(duì)Caspase-3基因表達(dá)情況的檢測(cè)，結(jié)果如圖3所示。

圖3　HT-29細(xì)胞（a）和 Caco-2細(xì)胞（b）中Cassppaassee--33基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量變化Fig.3 Relative mRNA expression levels of caspase-3 in both HT-29 cells(a)and Caco-2 cells(b)incubated with SP1 or SP2

由圖3可知，不同劑量的SP1和SP2組分孵育，均使兩種細(xì)胞的Caspase-3基因mRNA相對(duì)表達(dá)量有一定升高。其中SP1組分孵育Caco-2細(xì)胞可以使其Caspase-3基因mRNA相對(duì)表達(dá)量比空白組略多，而各劑量間差別較小，孵育HT-29細(xì)胞則呈現(xiàn)出一定遞增趨勢(shì)，但相同劑量下整體mRNA表達(dá)量與SP2組相比水平較低。SP2組分各劑量Caspase-3基因mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于空白組，且在兩株細(xì)胞中均呈現(xiàn)出隨劑量的遞增而增大的趨勢(shì)，由此可以推斷，不同劑量的SP2可以有效促進(jìn)Caspase-3基因mRNA的合成，從而參與引起了兩種腫瘤細(xì)胞的凋亡。

3　結(jié) 論

SP經(jīng)過超濾分級(jí)純化，較好地保留了其生物活性，同傳統(tǒng)柱分離法相比，產(chǎn)量較大，經(jīng)過除蛋 白處理后兩種分子質(zhì)量組分純度分別可達(dá)92.32%和78.13%，適合大規(guī)模制備用于下一步研究。

SP1組分對(duì)兩種腸道腫瘤細(xì)胞的抑制作用較SP2組分低，需在較高劑量下孵育72 h以上時(shí)才能對(duì)兩種細(xì)胞存活率產(chǎn)生顯著影響（P＜0.05），而SP2細(xì)胞的抗腫瘤活性較高，分別在500、250 μg/mL以上劑量時(shí)即可對(duì)Caco-2、HT-29兩種腸道腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)產(chǎn)生顯著的抑制作用（P＜0.05），而且呈一定的劑量依賴性，提示小分子質(zhì)量的SP產(chǎn)品具有更高的抗癌生物活性，進(jìn)一步的SP抗癌研究可以集中于10～100 ku分子質(zhì)量的多糖組分。

real time-qPCR結(jié)果顯示，SP2組分的Caspase-3基因mRNA相對(duì)表達(dá)量有顯著上升趨勢(shì)，呈一定劑量依賴性，推測(cè)Caco-2和HT-29細(xì)胞的凋亡可能與Caspase-3參與的胞內(nèi)凋亡途徑有關(guān)，該途徑某些關(guān)鍵酶的激活可能是SP抗癌作用的靶點(diǎn)所在，但其凋亡機(jī)制與具體作用位點(diǎn)還需要在進(jìn)一步的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行探討。

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Inhibitory Effect of Schisandraceae Polysaccharides on Growth of Intestinal Tumor Cells

LIU Rongxu,GAO Chenzhe,JIANG Fan,CUI Xian,HE Pan,DONG Heqian,HAN Jianchun*(College of Food Science,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China)

Abstract:Polysaccharide components SP1 and SP2 with different molecular weights were obtained from Schisandraceae and through ultra-filtration and deproteinization.The intestinal cell lines Caco-2 and HT-29 were used to evaluate the antitumor activity of SP1 and SP2 in vitro.The results showed that the proliferation of both Caco-2 and HT-29 cells was inhibited by SP1 and SP2.Meanwhile,the increase in relative transcription level of caspase-3 was confirmed by realtime quantitative polymerase chain reaction(real time-qPCR).SP1 had no significant effect on the inhibition of tumor cell growth,except incubation for 72 h at a dose of 500 μg/mL(P < 0.05).However,SP2 showed an obvious tumor inhibitory effect even at lower dose and shortened incubation time,resulting in a more significant increase in the relative transcription level of caspase-3.In conclusion,the polysaccharides from Schisandraceae have great potential to inhibit the proliferation of intestinal tumor cells,especially the small molecular weight polysaccharide .

Key words:Schisandraceae; polysaccharides; anti-tumor activity; real-time quantitative polymerase chain reaction

中圖分類號(hào)：TS201.4

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-6630（2016）05-0192-05

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201605034 10.7506/spkx1002-6630-201605034.http://www.spkx.net.cn

*通信作者：韓建春（1973—），男，教授，博士，主要從事農(nóng)產(chǎn)品加工研究。E-mail：hanjianchun@hotmail.com

作者簡(jiǎn)介：劉容旭（1991—），女，碩士研究生，主要從事農(nóng)產(chǎn)品加工研究。E-mail：923296139@qq.com

基金項(xiàng)目：哈爾濱市應(yīng)用技術(shù)研究與開發(fā)項(xiàng)目（2013RFXXJ080）

收稿日期：2015-06-24