宋永剛 于彩芬張玉鳳杜 靜孫 明姜 冰宋 倫*

(1 遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院，遼寧 大連 116023; 2 遼寧省海洋環(huán)境監(jiān)測(cè)總站，遼寧 大連 116023)

脈紅螺中痕量汞分析方法的研究

宋永剛1,2于彩芬1,2張玉鳳1,2杜 靜1,2孫 明1,2姜 冰1,2宋 倫1,2*

(1 遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院，遼寧 大連 116023; 2 遼寧省海洋環(huán)境監(jiān)測(cè)總站，遼寧 大連 116023)

為建立DMA-80直接測(cè)汞儀測(cè)定脈紅螺中痕量汞的最優(yōu)分析方法，通過正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了儀器分析程序，通過設(shè)置進(jìn)樣量梯度，確定了脈紅螺樣品的最佳進(jìn)樣量。結(jié)果表明：DMA-80最優(yōu)分析程序?yàn)椋焊稍餃囟?00 ℃，干燥時(shí)間150 s，分解溫度650 ℃，分解時(shí)間150 s，齊化時(shí)間12 s，氧氣流量200 mL/min，最佳進(jìn)樣量為0.1～0.2 g(精確至0.000 1 g)，在0～20.0 ng和20.0～1 400.0 ng范圍內(nèi)均呈良好的二次擬合，相關(guān)系數(shù)為1.000，檢出限為0.02 ng。采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)貽貝組織(NIST SRM 2976)驗(yàn)證了方法的準(zhǔn)確度和精密度，分析結(jié)果表明：加標(biāo)回收率為95.1%～102%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.6%～2.2%，精密度和準(zhǔn)確度優(yōu)于海洋行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)“HY/T147.3—2013”方法中的規(guī)定。方法簡(jiǎn)便快速，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高，可用于脈紅螺中痕量汞的實(shí)際檢測(cè)工作。

汞；直接測(cè)汞儀；優(yōu)化；正交實(shí)驗(yàn)；脈紅螺

0 前言

汞是一種高毒性人體非必需元素，極易通過攝食進(jìn)入人體[1]，輕度中毒可以導(dǎo)致貧血、頭痛、聽覺和視覺受損等，慢性中毒可以導(dǎo)致各種神經(jīng)性疾病甚至死亡，給人類的健康帶來很大風(fēng)險(xiǎn)[2-3]。生物標(biāo)志物是一種用來進(jìn)行環(huán)境污染物毒性效應(yīng)早期預(yù)警的重要工具[4]，脈紅螺(RapanaVenosa)由于體內(nèi)的污染物濃度與環(huán)境中的平均濃度表現(xiàn)出一致的相關(guān)性，長(zhǎng)期以來被認(rèn)為是理想的生物標(biāo)志物，是重金屬指示生物的優(yōu)勢(shì)物種，同時(shí)，脈紅螺也是汞污染的一種潛在指示生物[5]。因此，準(zhǔn)確測(cè)定脈紅螺體內(nèi)的痕量汞對(duì)海洋環(huán)境監(jiān)測(cè)至關(guān)重要。

生物體內(nèi)痕量汞的測(cè)定方法主要有AFS、ICP-MS、AAS、CVAAS、直接測(cè)汞儀等[6-12]。直接測(cè)汞儀法以其操作簡(jiǎn)單快速、樣品無需前處理等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用，而且被制定成海洋行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)“HY/T147.3—2013”[13]，但是HY/T147.3—2013分析條件的針對(duì)性差，目前沒有針對(duì)特定物種的分析測(cè)定方法，為此，本工作通過正交實(shí)驗(yàn)建立了一套適用于測(cè)定脈紅螺中痕量汞的方法。該方法操作簡(jiǎn)便、快速，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高，可用于批量脈紅螺樣品中痕量汞的快速應(yīng)急檢測(cè)，該方法的建立為進(jìn)一步建立海洋底棲生物中痕量汞的檢測(cè)方法提供了參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

DMA-80直接測(cè)汞儀(意大利Milestone公司)；瑞士METTLER AE240電子天平(精確至0.000 1 g)；CHIRST ALPHA2-4冷凍干燥機(jī)(德國(guó)Christ公司)；MM440球磨儀(德國(guó)Restch公司)。

汞標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 mg/mL，國(guó)家海洋局第二海洋研究所)；國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)貽貝組織(NIST SRM 2976，汞含量(61±3.6) μg/kg)；優(yōu)級(jí)純鹽酸(美國(guó)Sigma公司)；氧氣(純度99.99%)。

1.2 樣品處理

2014年在遼東灣海域采集脈紅螺樣品。除去殼外附著物，將軟組織分離成內(nèi)臟和肌肉，冷凍干燥至恒重，用球磨儀磨粉，待測(cè)。

1.3 方法原理

DMA-80直接測(cè)汞儀無需化學(xué)方法進(jìn)行前處理，樣品放入石英舟(已空燒)中稱量后直接測(cè)定。樣品在熱分解管中被充分干燥后經(jīng)熱分解釋放其中的汞，產(chǎn)生的氣體被氧氣導(dǎo)入催化爐，完成氧化作用并脫去鹵素、硫氧化物和氮氧化物后進(jìn)入混汞器，發(fā)生汞齊化反應(yīng)被固定。混汞器加熱釋放出汞蒸汽，并由氧氣載入吸收池，在波長(zhǎng)253.7 nm處測(cè)定[13]。

2 結(jié)果與討論

2.1 正交實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化

不同測(cè)試條件下，汞的檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)度(峰值)不同，干燥溫度、干燥時(shí)間、分解溫度、分解時(shí)間、齊化時(shí)間和氧氣流量等因素都會(huì)影響DMA-80直接測(cè)汞儀汞的檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)度。而干燥溫度、干燥時(shí)間、分解溫度和分解時(shí)間對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響較大[14]。因此，本文選取此4項(xiàng)因素，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[13-18]，每個(gè)因素均取3個(gè)水平(見表1)，按L9(34)正交表進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，對(duì)DMA-80直接測(cè)汞儀測(cè)量脈紅螺中痕量汞的分析程序進(jìn)行優(yōu)化，測(cè)定結(jié)果見表2。由K1、K2和K3(Kj為第j列因素同一水平所對(duì)應(yīng)的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)之和)的大小順序可知干燥溫度為200 ℃，干燥時(shí)間為150 s，分解溫度為650 ℃，分解時(shí)間為150 s時(shí)汞的檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)度最大，峰值最高，為最優(yōu)分析程序，從極差Rj(Rj為第j列因素的極差)的大小分析發(fā)現(xiàn)，干燥溫度對(duì)脈紅螺中痕量汞的測(cè)定影響最大，其次是分解時(shí)間，而干燥時(shí)間和分解溫度的影響相對(duì)較小。齊化時(shí)間設(shè)定12 s，氧氣流量選擇200 mL/min，與“HY/T147.3—2013”[13]一致。因此，得到DMA-80直接測(cè)汞儀最優(yōu)的分析程序是：干燥溫度為200 ℃，干燥時(shí)間為150 s，分解溫度為650 ℃，分解時(shí)間為150 s，齊化時(shí)間為12 s，氧氣流量為200 mL/min。

2.2 進(jìn)樣量的選擇

由于脈紅螺是生物樣品，有機(jī)質(zhì)含量較高，進(jìn)樣量過大會(huì)縮短儀器使用壽命，進(jìn)樣量過小會(huì)影響測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此，依據(jù)“HY/T147.3—2013”[13]建議的最大進(jìn)樣量1.0 g，分別稱取1.0、0.8、0.5、0.3、0.2、0.1、0.05、0.01 g(精確至0.000 1 g)的脈紅螺肌肉干燥樣品進(jìn)行梯度實(shí)驗(yàn)，每個(gè)樣品之后連續(xù)測(cè)定三個(gè)空白(已空燒的石英舟，吸光度<0.003 0)來檢測(cè)汞在儀器上的殘留污染，測(cè)定結(jié)果見表3。結(jié)果表明：進(jìn)樣量為1.0、0.8、0.5、0.3 g時(shí)，容易污染催化管，使儀器產(chǎn)生記憶效應(yīng)，干擾后續(xù)樣品的測(cè)定，進(jìn)樣量為0.05、0.01 g時(shí)，響應(yīng)值較低，使測(cè)定結(jié)果偏低，所以確定脈紅螺干燥樣品的最佳進(jìn)樣量范圍為0.1～0.2 g。

表1 實(shí)驗(yàn)因素水平表

表2 正交實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

表3 最優(yōu)進(jìn)樣量分析結(jié)果

2.3 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

準(zhǔn)確移取1.0 mL汞標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 mg/mL)于100 mL容量瓶中，用鹽酸(5%)溶液定容至100 mL制備成汞的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(10 μg/mL)。準(zhǔn)確移取10.0 mL汞的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液于100 mL容量瓶中，用鹽酸(5%)溶液定容至100 mL制備成汞的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液(1.0 μg/mL)。分別吸取一定量汞標(biāo)準(zhǔn)(1.0 μg/mL)使用溶液，配制成0、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0 ng低含量(c)系列和0、30.0、40.0、50.0、100.0、200.0、500.0、1 400.0 ng高含量(c)系列，在最優(yōu)分析程序下分別測(cè)定兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列，低含量系列標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1，高含量系列標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2，在0～20.0 ng和20.0～1 400.0 ng范圍內(nèi)均呈良好的二次擬合，R2=1.000。由11次空白測(cè)試結(jié)果得：S=0.000 24，3S=0.000 72，檢出限(DL)=0.02 ng。

圖1 低含量系列標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 1 Calibration curve of low-concent series of Hg.

圖2 高含量系列標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 2 Calibration curve of high-concent series of Hg.

2.4 方法的準(zhǔn)確度和精密度

采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)貽貝組織(NIST SRM 2976)重復(fù)測(cè)定7次來判定方法的準(zhǔn)確度和精密度，按照優(yōu)化后的分析程序進(jìn)行測(cè)試，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)值和測(cè)定值見表4。分析結(jié)果表明：加標(biāo)回收率為95.1%～102%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.6%～2.2%，精密度和準(zhǔn)確度優(yōu)于“HY/T147.3—2013”[13]，表明方法的準(zhǔn)確度高，精密度好。

表4 方法的準(zhǔn)確度和精密度

2.5 質(zhì)量控制圖

圖3 質(zhì)量控制圖Figure 3 Quality control charts.

2.6 實(shí)際樣品分析

為了驗(yàn)證所建方法的實(shí)用性，隨機(jī)選取遼東灣海域7個(gè)脈紅螺樣品(樣品A、B、C、D、E、F、G)的肌肉和內(nèi)臟組織，采用所建方法，將每個(gè)樣品的肌肉和內(nèi)臟分別重復(fù)測(cè)定11次，7個(gè)樣品的分析結(jié)果見表5。結(jié)果表明，Hg在脈紅螺體內(nèi)分布存在組織差異性，在內(nèi)臟中積累程度高于肌肉。

表5 樣品分析結(jié)果

3 結(jié)語

通過正交實(shí)驗(yàn)確定了DMA-80直接測(cè)汞儀測(cè)量脈紅螺中痕量汞的最優(yōu)分析程序：干燥溫度、干燥時(shí)間、分解溫度、分解時(shí)間、齊化時(shí)間、氧氣流量分別為200 ℃、150 s、650 ℃、150 s、12 s、200 mL/min；通過設(shè)置進(jìn)樣量梯度實(shí)驗(yàn)，確定了進(jìn)樣量最佳范圍為0.1～0.2 g；RSD在1.6%～2.2%，精密度和準(zhǔn)確度優(yōu)于海洋行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)“HY/T147.3—2013”；通過測(cè)定實(shí)際樣品發(fā)現(xiàn)測(cè)試效果極佳。該方法有效改善了方法精密度和準(zhǔn)確度，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)速度快，易于批量檢測(cè)，建立了脈紅螺中痕量汞的最優(yōu)分析方法。

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Method Improvement on the Determination of Hg inRapanaVenosa

SONG Yonggang1,2, YU Caifen1,2, ZHANG Yufeng1,2, DU Jing1,2SUN Ming1,2, JIANG Bing1,2, SONG Lun1,2*,

(1.LiaoningOceanandFisheryScienceResearchInstitute,Dalian,Liaoning116023,China; 2.LiaoningOceanEnvironmentMonitoringStation,Dalian,Liaoning116023,China)

In order to obtain the optimal instrument conditions for the determination of total mercury inRapanaVenosasamples by a DMA-80 direct mercury analyzer, the experimental conditions, such as the drying temperature, the drying time, the decomposition temperature and the decomposition time, were optimized through orthogonal test, and the appropriate sample dosage was also investigated. The results showed that the optimal experimental conditions were obtained as follows: the drying temperature was 200 ℃, the drying time was 150 s, the decomposition temperature was 650 ℃, the decomposition time was 150 s, the amalgam heating time was 12 s，the oxygenow was 200 mL/min, and the sample mass was 0.1～0.2 g. There were both good quadratic nonlinear relationships when the contents of samples were both in the ranges of 0～20.0 ng and 20.0～1 400.0 ng, and the correlation coefficient wasR=1.000.The detection limit was 0.02 ng. The method was validated by the analysis of the certified reference materials of Mussel Tissue (NIST SRM 2976, USA), and the results indicated that the recovery was in the range of 95.1%～102% with 1.6%～2.2% RSD. Accuracy and precision of the method was better than those obtained by marine industry standard (HY/T147.3—2013), which indicated that the proposed method has the advantages of good accuracy, simple operation and high sensitivity for the determination of total mercury inRapanaVenosasamples.

mercury；a direct mercury analyzer；optimization；orthogonal test；RapanaVenosa

10.3969/j.issn.2095-1035.2016.01.001

2015-11-09

2015-12-01

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31400406)；海洋公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(201505019)；遼寧省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2014020182)資助

宋永剛，男，助理研究員，主要從事海洋環(huán)境研究。E-mail：hyzjs_lnshky@163.com

*通信作者：宋倫，男，副研究員，主要從事海洋生態(tài)環(huán)境研究。E-mail：songlun827421@sohu.com

O657.3；TH744

A

2095-1035(2016)01-0001-05