張磊，廖成彬，黃榕波，馬娜，唐小婭，王秀鳳

(廣東藥學(xué)院 基礎(chǔ)學(xué)院，廣東 廣州 510006)

?

右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛垂體-靶腺軸功能的動(dòng)態(tài)變化

張磊，廖成彬，黃榕波，馬娜，唐小婭，王秀鳳

(廣東藥學(xué)院 基礎(chǔ)學(xué)院，廣東 廣州 510006)

摘要:目的 探究右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛過程中垂體-靶腺軸功能的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。方法 SD大鼠90只隨機(jī)分為3組：正常組、模型組、右歸丸組；分別測(cè)定3個(gè)組早、中、晚期垂體-甲狀腺軸生物分子[促甲狀腺激素(TSH),三碘甲腺原氨酸(T3),四碘甲腺原氨酸(T4)]、垂體-腎上腺軸生物分子[促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH) 和 皮質(zhì)醇(CORT)]以及垂體-性腺軸生物分子[黃體生成素(LH),促卵泡激素(FSH),睪酮(T) ]的含量，利用成組比較及因子分析方法探究右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛時(shí)垂體-靶腺軸功能的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。結(jié)果 右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛的早中晚3個(gè)時(shí)期除LH和ACTH外，垂體-靶腺軸其余生物分子指標(biāo)值均隨著用藥時(shí)間增加而逐漸增大且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；右歸丸組因子分析結(jié)果表明：早期主調(diào)控因子主要包括靶腺層生物分子，中期增加了1個(gè)垂體層生物分子，晚期增加了2個(gè)垂體層生物分子。結(jié)論 右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛相對(duì)西藥是一個(gè)較為緩慢長期的過程；右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛過程中首先對(duì)靶腺層起作用，進(jìn)而反饋到垂體層。

關(guān)鍵詞:右歸丸； 腎陽虛； 垂體-靶腺軸； 因子分析

腎陽虛伴有機(jī)體廣泛的病理生理變化[1-3]，下丘腦-垂體-靶腺軸多個(gè)激素指標(biāo)出現(xiàn)異常變化[4-5]，機(jī)體功能低下或紊亂。右歸丸出自《景岳全書》是一首溫補(bǔ)腎陽、填精養(yǎng)血的常用方具有溫補(bǔ)腎陽、填精益髓之功效[6]，是治療腎陽虛的經(jīng)典復(fù)方。

在課題組前期對(duì)右歸丸的藥效及腎陽虛大鼠垂體-靶腺軸功能的研究[7-13]基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)右歸丸是整體、多靶點(diǎn)、動(dòng)態(tài)的調(diào)節(jié)機(jī)體，因此本研究選取垂體-靶腺軸(甲狀腺、腎上腺、性腺)8個(gè)激素指標(biāo)，通過建立分時(shí)期的腎陽虛大鼠模型，同時(shí)利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法闡釋右歸丸對(duì)腎陽虛的動(dòng)態(tài)整體的調(diào)節(jié)作用。

1材料與方法

1.1主要試劑

TSH(促甲狀腺激素)、T3(三碘甲腺原氨酸)、T4(四碘甲腺原氨酸)、LH(黃體生成素)、FSH(促卵泡激素)、T(睪酮)、ACTH(促腎上腺皮質(zhì)激素)和CORT(皮質(zhì)醇)放射免疫試劑藥盒由北京北免東雅生物技術(shù)研究所提供。

1.2動(dòng)物及分組

雄性SD大鼠，體質(zhì)量220～250 g，廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(粵)2008-0002。購進(jìn)后，適應(yīng)環(huán)境5 d，隨機(jī)分為正常組、腎陽虛模型組、右歸丸組3組，每組30只，共90只。

1.3動(dòng)物造模及處理[5]

①正常組：0.9%的生理鹽水0.3 mL后肢肌肉注射，每天1次。自由飲水、飲食，連續(xù)29 d；②腎陽虛大鼠模型復(fù)制：醋酸可的松混懸液充分混勻。按2.5 mg/100 g后肢肌肉注射，每天1次。自由飲水、飲食,連續(xù)29 d； ③右歸丸組:分別在腎陽虛大鼠模型復(fù)制后8 d起給予右歸丸灌胃，給藥容積1.0 mL/100 g。每天1次。自由飲水、飲食,連續(xù)29 d；④處理：采取毒理實(shí)驗(yàn)常用的方法即分批宰殺。為了獲得動(dòng)態(tài)可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，對(duì)動(dòng)物采取平行處理，即3組動(dòng)物分別在第15天(10只)、第23天(10只)、第30天(10只)處死；取血清用放免法檢測(cè)TSH、T3、T4； ACTH、CORT、 FSH、LH、T。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

近幾年，隨著科學(xué)技術(shù)的提高，科學(xué)技術(shù)在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用也在逐漸的提高，尤其是在農(nóng)作物的栽培技術(shù)研究中。茄子是茄科茄屬一年生草本植物，其營養(yǎng)價(jià)值高，不僅能幫助維持人體酸堿平衡，多吃還有抗癌的保健功效。茄子在種植的過程中由于栽培技術(shù)的局限，其產(chǎn)量和質(zhì)量都難以滿足人們的需求，故此，通過日光溫室栽培技術(shù)提高茄子的產(chǎn)量和質(zhì)量，滿足人們的日常需求，促進(jìn)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)作物的健康良性發(fā)展。

① 成組比較：對(duì)正常組、模型組及右歸丸組的早、中、晚3個(gè)時(shí)期的垂體-靶腺軸生物分子的指標(biāo)值進(jìn)行成組比較，驗(yàn)證分時(shí)期的腎陽虛造模是否成功以及右歸丸的藥效及動(dòng)態(tài)起效過程；②因子分析：因子分析是多元統(tǒng)計(jì)分析中的一個(gè)重要內(nèi)容，其基本思想就是根據(jù)變量?jī)?nèi)部的相關(guān)性大小對(duì)變量分組，使組內(nèi)變量間高相關(guān)、組間變量間低相關(guān)[14]，得到的每一組組合的變量稱為公共因子，結(jié)合所研究問題的相關(guān)背景知識(shí)可以來分析每個(gè)公共因子的實(shí)際意義。本研究對(duì)右歸丸藥方組早、中、晚3個(gè)時(shí)期垂體-靶腺軸生物分子指標(biāo)值進(jìn)行因子分析，了解各生物分子之間相關(guān)關(guān)系的變化。通過主成分所占比重探討右歸丸在腎陽虛的不同時(shí)期對(duì)哪些生物分子作用大，進(jìn)而闡釋右歸丸的動(dòng)態(tài)作用機(jī)制。

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行成組比較及因子分析。在因子分析過程中利用主成分法進(jìn)行因子提取，利用最大方差旋轉(zhuǎn)法進(jìn)行因子旋轉(zhuǎn)，并將正交旋轉(zhuǎn)后的因子載荷矩陣作為提取公共因子的依據(jù)。

2結(jié)果與分析

2.1正常組、模型組、右歸丸組早、中、晚3個(gè)時(shí)期垂體-靶腺軸激素指標(biāo)值的變化

結(jié)果見表1。模型組垂體-靶腺軸8個(gè)激素指標(biāo)隨造模時(shí)間增加不斷下降，尤其是模型組晚期指標(biāo)值下降明顯，模型組與正常組之間以及除垂體-甲狀腺軸3個(gè)激素早、中期外，模型組不同時(shí)期之間指標(biāo)值差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說明本實(shí)驗(yàn)造模成功，且腎陽虛早、中、晚3個(gè)時(shí)期分割效果好；右歸丸組不同時(shí)期的指標(biāo)值與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(除FSH早、中期外)，提示右歸丸有效。同時(shí)右歸丸組指標(biāo)值隨著用藥時(shí)間的增加逐漸增大(除LH、ACTH外)，并且右歸丸組不同時(shí)期指標(biāo)值之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說明右歸丸起效是一個(gè)相對(duì)緩慢長期的過程。

2.2右歸丸組早、中、晚3個(gè)時(shí)期因子分析結(jié)果及分析

結(jié)果見表2。按照因子載荷值的大小將關(guān)聯(lián)程度分為3個(gè)層次，當(dāng)因子載荷值小于0.4時(shí)，認(rèn)為該生物分子與此公共因子關(guān)聯(lián)程度較弱；當(dāng)因子載荷值大于0.6時(shí)，認(rèn)為該生物分子與所在公共因子關(guān)聯(lián)程度較強(qiáng)；當(dāng)因子載荷值處于0.4～0.6之間時(shí)，認(rèn)為該生物分子與其所在的公共因子有一定關(guān)聯(lián)[15]。根據(jù)此原則并結(jié)合表2，右歸丸早、中、晚3個(gè)時(shí)期垂體-靶腺軸8個(gè)激素指標(biāo)相關(guān)性分組見表3。

由表3可見右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛的早、中、晚3個(gè)時(shí)期，取前3個(gè)公共因子的總方差貢獻(xiàn)率均達(dá)到75%以上，即這3個(gè)公共因子可以在75%的程度上解釋所有生物分子包含的全部信息。同時(shí)由于方差貢獻(xiàn)率最大，因此稱之為右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛的主調(diào)控因子。右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛的早期主調(diào)控因子包括T4、T、CORT，并且方差貢獻(xiàn)率為32.49%，即主調(diào)控因子包括垂體-甲狀腺軸，垂體-腎上腺軸及垂體-性腺軸的靶腺層生物分子，提示右歸丸早期主要對(duì)靶腺層生物分子起作用。中期主調(diào)控因子包括T4、FSH、CORT，并且方差貢獻(xiàn)率占32.78%，即中期主調(diào)控因子較之于早期增加一個(gè)垂體層生物分子；晚期主調(diào)控因子包括LH、T、ACTH、CORT，并且方差貢獻(xiàn)率占40.74%，較之于早期增加2個(gè)垂體層生物分子，且主調(diào)控因子方差貢獻(xiàn)率逐漸增大。

表1　正常組、模型組及右歸丸組早、中、晚3個(gè)時(shí)期垂體-靶腺軸激素的指標(biāo)值

同一指標(biāo)同一時(shí)期，與正常組比較:△P<0.01，與模型組比較：▲P<0.01；同一指標(biāo)同一組別，與早期比較：☆P<0.01，與中期比較：★P<0.01。

表2 右歸丸組早、中、晚3個(gè)時(shí)期垂體-靶腺軸8個(gè)激素指標(biāo)正交旋轉(zhuǎn)后的因子載荷矩陣(取前3列)

Table 2Rotated component matrix of 8 hormones on pituitary-target gland axes in the YP group during the early,middle and late periods (the first 3 arrays)

時(shí)期指標(biāo)f1f2f3早期TSH-0.290-0.8410.218T3-0.0980.8720.077T40.6600.4710.017LH0.152-0.1210.832FSH0.3650.3200.420T-0.780-0.1160.241ACTH-0.4130.0070.722CORT0.740-0.1840.405

續(xù)表2

注：各列中有下劃線的因子載荷值對(duì)應(yīng)的指標(biāo)屬于其所在的公共因子

表3右歸丸組早、中、晚期垂體-靶腺軸8個(gè)激素指標(biāo)相關(guān)性分組

Table 3Correlation grouping of 8 hormones on pituitary-target gland axes in the YP group during the early,middle and late periods

時(shí)期f1方差貢獻(xiàn)率/%f2方差貢獻(xiàn)率/%f3方差貢獻(xiàn)率/%總方差貢獻(xiàn)率/%早期T4TCORT32.49TSHT325.61LHACTHFSH17.7175.81中期T4FSHCORT32.78T3TACTH28.47TSHLH15.5176.77晚期LHTACTHCORT40.74TSHT330.98FSHT413.6685.38

3討論

模型組大鼠早、中、晚3個(gè)時(shí)期垂體-靶腺軸激素指標(biāo)值的變化表明這種分時(shí)期的腎陽虛大鼠模型構(gòu)建成功。同時(shí)右歸丸組大鼠早、中、晚3個(gè)時(shí)期垂體-靶腺軸激素指標(biāo)值的變化顯示右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛是一個(gè)相對(duì)緩慢長期的過程。

從右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛的早、中、晚3個(gè)時(shí)期的主調(diào)控因子可以看出，右歸丸早期主要對(duì)靶腺層生物分子起作用，隨著用藥時(shí)間的增長逐漸反饋到垂體層。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)垂體-腎上腺軸樞紐作用消失是腎陽虛發(fā)生的機(jī)制之一[12-13]。而右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛的早、中期主調(diào)控因子包含垂體-腎上腺軸靶腺層生物分子CORT，晚期主調(diào)控因子包含了垂體-腎上腺軸垂體層和靶腺層的2個(gè)生物分子ACTH和CORT，提示在右歸丸的調(diào)節(jié)下隨著用藥時(shí)間增加垂體-腎上腺軸的功能逐漸恢復(fù)。

本研究通過建立分時(shí)期的腎陽虛大鼠模型，利用右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛，發(fā)現(xiàn)垂體-靶腺軸8個(gè)激素除LH、ACTH 2個(gè)垂體層激素外，其余激素均隨用藥時(shí)間增加而逐漸回升，可見右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛是一個(gè)相對(duì)緩慢長期的過程。同時(shí)因子分析的結(jié)果提示右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛的過程是先對(duì)靶腺層激素起作用，進(jìn)而反饋到垂體層。后續(xù)研究將繼續(xù)深入研究和挖掘右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛時(shí)靶腺層對(duì)垂體層的反饋調(diào)節(jié)作用。

參考文獻(xiàn):

[1] 龍泳伶,李政木．金匱腎氣丸及其拆方對(duì)腎陽虛雌鼠卵巢功能的影響[J]．中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2013,33(7)：967-971．

[2] 金蓉家,楊元宵,邢桂英,等．腎氣丸對(duì)腎陽虛大鼠下丘腦-垂體-甲狀腺軸的調(diào)節(jié)作用初探[J]．浙江中醫(yī)雜志,2013,48(5)：370-371．

[3] 趙敏,周安方,徐安莉,等．右歸膠囊對(duì)腎陽虛大鼠免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究[J]．湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2013,15(1)：18-20．

[4] 王建紅,伍慶華,劉海云,等．腎陽虛大鼠垂體-甲狀腺軸功能動(dòng)態(tài)分析[J]．遼寧中醫(yī)雜志,2006,33(6)：751-752．

[5] 馬娜,王建紅,閔建新,等．腎陽虛大鼠垂體-靶腺軸功能動(dòng)態(tài)變化的研究[J]．時(shí)珍國醫(yī)國藥,2009,20(9)：2123-2125．

[6] 郭楊,馬勇．中醫(yī)藥治療骨質(zhì)疏松癥的常用處方分析[J]．中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010,16(7)：188．

[7] 王秀鳳,張磊,唐小婭,等．基于決策規(guī)則模型及均勻設(shè)計(jì)拆方的右歸丸配伍規(guī)律研究[J]．中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(4)：362-365．

[8] 王秀鳳,伊麗娜,張磊,等．基于粗糙集的腎氣丸、右歸丸、右歸飲3首補(bǔ)腎陽類方配伍規(guī)律研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2013,33(1)：114-118．

[9] 王秀鳳,李靜,張磊,等．基于方差分析的腎氣丸、右歸丸、右歸飲3首補(bǔ)腎陽類方配伍規(guī)律研究[J]．遼寧中醫(yī)雜志,2012,39(5)：774-776．

[10] 王秀鳳,李靜,張磊,等．基于因子分析的腎陽虛證動(dòng)物模型垂體-靶腺軸關(guān)鍵指標(biāo)的評(píng)價(jià)[J]．中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2013,33(6)：825-829．

[11] 王秀鳳,胡翊健,王建紅,等．基于因子分析的正常、腎陽虛狀態(tài)大鼠垂體-靶腺軸激素相關(guān)性研究[J]．時(shí)珍國醫(yī)國藥,2011,22(4)：990-991．

[12] 王秀鳳,張磊,伍慶華,等．基于支持向量回歸機(jī)的腎陽虛大鼠垂體-腎上腺軸與垂體-性腺軸功能動(dòng)態(tài)分析[J]．中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2014,20(11)：1487-1489．

[13] 王秀鳳,張磊,張琰,等．基于支持向量機(jī)的腎陽虛大鼠甲狀腺與腎上腺功能的動(dòng)態(tài)分析[J]．時(shí)珍國醫(yī)國藥,2014,25(8)：2023-2025.

[14] 黃潤龍．?dāng)?shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析技術(shù)——SPSS軟件實(shí)用教程[M]．北京：高等教育出版社,2004：285．

[15] 張磊,鄧樹泳,張琰，等．基于因子分析的定經(jīng)湯調(diào)節(jié)卵巢早衰生物學(xué)機(jī)制研究[J]．中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(20)：310-313．

(責(zé)任編輯：幸建華)

Dynamic changes of the pituitary-target gland axis function in the kidney yang deficiency modulated by Yougui pill

ZHANG Lei,LIAO Chengbin,HUANG Rongbo,MA Na,TANG Xiaoya,WANG Xiufeng

(BasicSchoolofGuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China)

Abstract:Objective To explore the change rule of the pituitary-target gland axis function in the kidney yang deficiency modulated by Yougui pill (YP). Methods 90 SD rats were randomly divided into three groups,including the normal group,the model group and the YP group. The model of kidney yang deficiency was established by intramuscular injection of cortisone. The values of the hormones in pituitary-thyroid axis (TSH,T3 and T4),pituitary-adrenal axis (ACTH and CORT) and pituitary-gonadal axis (LH,FSH and T) in rats were measured in the early,middle and late periods,respectively. The t-test and factor analyses were used to examine the change rule of the pituitary-target gland axis function in the kidney yang deficiency modulated by YP. Results The values of hormones,except LH and ACTH,on pituitary-target gland axes were significantly increased in the YP group during the early,middle and late periods. Master regulatory factors mainly contained the hormones of the target gland layer in the early period,one hormone of the pituitary gland layer was involved in the middle period,and two hormones of the pituitary gland layer were involved in the late period. Conclusion YP treatment shows a slow process in modulation of kidney yang deficiency,which first affect the target gland layer and then feed back to the pituitary gland layer.

Key words:Yougui pill; kidney yang deficiency; pituitary-target gland axis; factor analysis

DOI:10.16809/j.cnki.1006-8783.2015110401

中圖分類號(hào):R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1006-8783(2016)01-0102-05

作者簡(jiǎn)介：張磊(1979—)，男，碩士，實(shí)驗(yàn)師，主要從事生物系統(tǒng)數(shù)據(jù)挖掘研究工作，Email:zhanglei.st@163.com；通信作者：王秀鳳(1980—)，女，碩士生導(dǎo)師，副教授，主要從事生物系統(tǒng)與數(shù)據(jù)挖掘研究，Email:wxfsnow8012@126.com。

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81403153)

收稿日期：2015-11-04

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-01-15 14:26網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160115.1426.002.html