曾巧煌， 黃琳，趙靜宇，陳玉興，曾曉會(huì)，甘海寧，黃丹娥

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 附屬?gòu)V東省第二中醫(yī)院，廣東 廣州 510275； 2.廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院/廣東省中醫(yī)藥研究開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510095)

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復(fù)方芪麻膠囊對(duì)高血壓大鼠血壓及動(dòng)脈順應(yīng)性的影響

曾巧煌1， 黃琳1，趙靜宇1，陳玉興2，曾曉會(huì)2，甘海寧2，黃丹娥2

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 附屬?gòu)V東省第二中醫(yī)院，廣東 廣州 510275； 2.廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院/廣東省中醫(yī)藥研究開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510095)

摘要:目的 評(píng)價(jià)復(fù)方芪麻膠囊對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)血壓、主動(dòng)脈順應(yīng)性及血管活性物質(zhì)的影響。方法 將大鼠按初始血壓隨機(jī)分為正常組、模型組、卡托普利組、牛黃降壓膠囊組、復(fù)方芪麻膠囊高、中、低劑量組，每組10只，灌胃給藥4周后測(cè)定各組大鼠血壓，并取主動(dòng)脈，測(cè)量主動(dòng)脈順應(yīng)性；將老年大鼠按初始血壓隨機(jī)分為正常組、模型組、卡托普利組、牛黃降壓膠囊組、復(fù)方芪麻膠囊高、中、低劑量組，每組10只，口服給藥4周后測(cè)定各組大鼠血壓，并取血清檢測(cè)一氧化氮(NO)、內(nèi)皮縮血管肽1(ET-1))、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)水平。結(jié)果 與模型組大鼠比較，復(fù)方芪麻膠囊高、中、低劑量組大鼠收縮壓、舒張壓均明顯降低(P<0.01或P<0.05)，主動(dòng)脈內(nèi)壓上升斜率、曲線下面積均明顯降低(P<0.01或P<0.05)；與老年SHR大鼠比較，復(fù)方芪麻膠囊高、中、低劑量組大鼠收縮壓、舒張壓均明顯降低(P<0.01)，血清NO含量明顯升高(P<0.01或P<0.05)，ET-1、AngⅡ含量顯著下降(P<0.01或P<0.05)。結(jié)論 復(fù)方芪麻膠囊具有明顯降低血壓、改善主動(dòng)脈順應(yīng)性作用，其降壓機(jī)制可能與降低ET-1、AngⅡ含量、升高NO含量有關(guān)。

關(guān)鍵詞:復(fù)方芪麻膠囊； 血壓； 動(dòng)脈順應(yīng)性； ET-1；AngⅡ； NO

高血壓是全球范圍內(nèi)的常見(jiàn)病、多發(fā)病，易引發(fā)腦卒中、心肌梗死等心腦血管疾病，嚴(yán)重危害人類健康。有研究表明，目前我國(guó)高血壓患病率為29.6%，且呈逐年上升趨勢(shì)[1]，因此高血壓的防治是當(dāng)今公共衛(wèi)生事業(yè)的一個(gè)重要課題。復(fù)方芪麻膠囊是廣東省第二中醫(yī)院院內(nèi)制劑，研究表明，復(fù)方芪麻膠囊對(duì)氣虛痰濁型高血壓患者有明顯的降壓作用[2-4]，但目前其降壓機(jī)制尚不十分清楚。有研究指出，大動(dòng)脈順應(yīng)性低下會(huì)導(dǎo)致中樞側(cè)的收縮壓上升引起心臟肥大，外周側(cè)因內(nèi)皮功能障礙引起血管功能受損[5]；一氧化氮(nitricoxide,NO)、內(nèi)皮素(endothelin,ET)為重要的血管活性物質(zhì)，與高血壓有密切關(guān)系，且兩者之間的平衡失調(diào)是高血壓發(fā)生、發(fā)展的重要因素之一[6]；腎素血管緊張素系統(tǒng)是調(diào)節(jié)心血管生理功能的重要體液系統(tǒng),其關(guān)鍵性產(chǎn)物血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)在高血壓等心血管疾病的病因?qū)W與發(fā)病過(guò)程中有著重要作用[7]。為進(jìn)一步探討復(fù)方芪麻膠囊的降壓機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)采用自發(fā)性高血壓(SHR)大鼠模型，觀察復(fù)方芪麻膠囊對(duì)SHR大鼠的血壓、主動(dòng)脈順應(yīng)性素及老年SHR大鼠NO、ET-1、AngⅡ的影響，為探討復(fù)方芪麻膠囊降壓機(jī)制提供重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料

1.1儀器

JJ3000動(dòng)物電子秤(G&G公司)；BS224S電子天平(1/萬(wàn)，德國(guó)SARTORIUS)；BP-100A全自動(dòng)大小鼠無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量系統(tǒng)(成都泰盟軟件有限公司)； PowerLab 8/30多導(dǎo)生理記錄儀(澳大利亞PowerLab公司)；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市富華儀器有限公司)；3K30離心機(jī)(Sigma公司)；UV-2501PC型紫外分光光度計(jì)(日本SHIMADZU公司)；5424型小型高速離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司)；-80 ℃超低溫冰箱(美國(guó)Thermo公司)；Bio-RAD 680酶標(biāo)儀(美國(guó)伯樂(lè)公司)。

1.2試劑和藥品

水合氯醛(成都市科龍化工試劑廠)；大鼠內(nèi)皮素1、AngⅡ ELISA試劑盒(上海博谷生物科技有限公司)；NO測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所)；卡托普利片(常州制藥廠有限公司)；牛黃降壓膠囊[百善唐威(滄州)藥業(yè)有限公司]；復(fù)方芪麻膠囊(廣東省中醫(yī)研究所制劑研究室制備)。

1.3動(dòng)物

SPF級(jí)SHR大鼠，SPF級(jí)WKY大鼠，雌雄各半，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào): SCXK(京)2012-0001。

2方法

2.1復(fù)方芪麻膠囊對(duì)SHR大鼠血壓及主動(dòng)脈順應(yīng)性的影響

取SPF級(jí)WKY大鼠10只，SHR大鼠60只，雌雄各半，依托咪酯100 mg/kg腹腔注射麻醉，采用BP-100A全自動(dòng)大小鼠無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量系統(tǒng)測(cè)量各大鼠血壓，作為實(shí)驗(yàn)前正常組和高血壓模型組血壓數(shù)值，并將高血壓模型組按血壓數(shù)值隨機(jī)分為6組，分別為模型組、卡托普利片組(0.009 g/kg)、牛黃降壓膠囊組(0.144 g/kg)、復(fù)方芪麻膠囊高、中、低劑量組(7.432、3.716、1.858 g/kg)，各組每天灌胃給藥1次，連續(xù)4周，正常組和模型組給予等體積蒸餾水。

各組大鼠于第4周末次給藥后1 h，依托米酯(Etomidate) 100 mg/kg腹腔注射麻醉，分離右頸總動(dòng)脈，通過(guò)PowerLab 8/30多導(dǎo)生理記錄儀及生理信號(hào)處理系統(tǒng)，測(cè)量收縮壓、舒張壓等[8]。然后處死大鼠，取主動(dòng)弓至髂動(dòng)脈分叉處主動(dòng)脈，長(zhǎng)度為1 cm，按文獻(xiàn)[9]測(cè)定血管順應(yīng)性，具體方法如下：一端開(kāi)口套在比動(dòng)脈管徑略粗的硬塑料管上，并手術(shù)縫合線打結(jié)扎緊，防止漏氣、脫落，另一端保持平直，硬塑料管與PowerLab 8/30多導(dǎo)生理記錄儀的血壓換能器連接，整個(gè)系統(tǒng)用生理鹽水充滿并排除氣泡。壓力換能器和塑料管通過(guò)三通閥門與恒速注射器連通，用1 mL注射器配合恒速注射器以3.67 μL/s為單位推注液體，觀察并記錄壓力從基線上升3 s內(nèi)壓力上升斜率(mmHg/s)、時(shí)間-壓力曲線下面積(mmHg/s)，斜率與曲線下面積升高表示血管順應(yīng)性下降。

2.2復(fù)方芪麻膠囊對(duì)老年SHR大鼠血壓及血管活性物質(zhì)的影響

取經(jīng)飼養(yǎng)19個(gè)月以上老年SPF級(jí)WKY大鼠10只，SHR大鼠60只，雌雄各半，按“2.1”方法分組給藥，并于第4周末測(cè)量各組大鼠收縮壓、舒張壓。血壓測(cè)量后，各組大鼠取血分離血清，測(cè)定血清內(nèi)皮縮血管肽1(ET-1)、NO、AngⅡ含量。

2.3統(tǒng)計(jì)方法

3結(jié)果

3.1復(fù)方芪麻膠囊對(duì)SHR大鼠血壓及主動(dòng)脈順應(yīng)性的影響

3.1.1復(fù)方芪麻膠囊對(duì)SHR大鼠收縮壓、舒張壓的影響表1表明，給藥4周后，與SHR組大鼠比較，卡托普利組、復(fù)方芪麻膠囊高、中、低劑量組大鼠收縮壓、舒張壓均明顯降低(P<0.01或P<0.05)；牛黃降壓膠囊組收縮壓明顯降低(P<0.05)。

表1復(fù)方芪麻膠囊對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響

組別劑量/(g·kg-1)收縮壓/mmHg舒張壓/mmHg正常組-105.720±8.46068.302±6.168模型組-165.124±14.299**116.065±8.861**卡托普利組0.009139.036±12.368##84.965±9.378##牛黃降壓膠囊組0.144151.304±9.632#109.235±9.151芪麻膠囊 高劑量組7.432143.550±9.557##89.033±6.509## 中劑量組3.716149.943±7.145#101.381±6.034## 低劑量組1.858154.802±10.677#91.823±6.727##

與正常組比較:**P<0.01；與模型組比較：#P<0.05，##P<0.01。

3.1.2復(fù)方芪麻膠囊對(duì)SHR大鼠主動(dòng)脈順應(yīng)性的影響表2表明，與模型組大鼠比較，卡托普利組、牛黃降壓膠囊組、復(fù)方芪麻膠囊高、中、低劑量組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)壓上升斜率、曲線下面積均明顯降低(P<0.01或P<0.05)。

表2復(fù)方芪麻膠囊對(duì)SHR大鼠主動(dòng)脈順應(yīng)性的影響

組別劑量/(g·kg-1)內(nèi)壓上升斜率/(mmHg·s-1)曲線下面積/(mmHg·s-1)正常組-28.783±6.284134.669±16.174模型組-55.307±11.048**227.009±9.339**卡托普利組0.00936.203±7.105##172.155±10.527##牛黃降壓膠囊組0.14445.749±9.666#201.258±21.943##芪麻膠囊 高劑量組7.43238.657±7.848##175.874±4.134## 中劑量組3.71641.184±5.951##183.618±7.195## 低劑量組1.85844.940±6.928#182.229±17.832##

與正常組比較：**P<0.01；與模型組比較：#P<0.05，##P<0.01。

3.2復(fù)方芪麻膠囊對(duì)老年SHR大鼠血壓及血管活性物質(zhì)的影響

3.2.1復(fù)方芪麻膠囊對(duì)老年SHR大鼠收縮壓、舒張壓的影響表3表明，給藥4周后，與模型組大鼠比較，卡托普利組、牛黃降壓膠囊組、復(fù)方芪麻膠囊高、中、低劑量組大鼠收縮壓、舒張壓均明顯降低(P<0.01)。

表3復(fù)方芪麻膠囊對(duì)老年自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響

組別劑量/(g·kg-1)給藥后收縮壓/mmHg給藥后舒張壓/mmHg正常組-109.080±11.27879.7811±2.416模型組-169.082±11.931**122.820±10.520**卡托普利組0.009135.324±10.050##87.849±9.569##牛黃降壓膠囊組0.144149.022±13.992##100.428±15.386##芪麻膠囊 高劑量組7.432141.315±9.479##94.657±16.064## 中劑量組3.716143.097±6.944##89.936±3.384## 低劑量組1.858149.795±9.741##93.193±12.556##

與正常組比較:**P<0.01；與模型組比較：##P<0.01。

3.2.2復(fù)方芪麻膠囊對(duì)老年SHR大鼠血清中ET-1、NO 、AngⅡ含量的影響表4表明，與模型組大鼠比較，牛黃降壓膠囊組、復(fù)方芪麻膠囊高、中、低劑量組大鼠血清NO含量明顯升高(P<0.01或P<0.05)，ET-1、AngⅡ含量顯著下降(P<0.01)；卡托普利組大鼠血清ET-1、AngⅡ含量顯著下降(P<0.01或P<0.05)。

Table 4Effect of compound Qima capsule on the plasma levels of ET-1,AngⅡ and NO in aged spontaneously hypertensive rats

組別劑量/(g·kg-1)c(NO)/(μmol·L-1)ρ(ET-1)/(pg·mL-1)ρ(AngⅡ)/(pg·mL-1)正常組-13.103±2.50930.250±10.51022.779±3.809模型組-5.572±1.696**67.667±13.247**51.129±5.791**卡托普利組0.0097.145±2.89557.500±8.716#32.755±5.267##牛黃降壓膠囊組0.14410.814±2.481##51.833±7.495##44.963±7.577#芪麻膠囊 高劑量組7.43211.407±2.315##41.167±9.730##36.491±5.389##中劑量組3.7169.490±2.607##45.583±12.056##36.025±6.532##低劑量組1.8588.428±2.752#51.667±9.512##43.000±9.040#

與正常組比較:**P<0.01；與模型組比較：#P<0.05，##P<0.01。

4討論

有研究證實(shí)，血管平滑肌肥大引起的中膜肥厚等大動(dòng)脈構(gòu)造的變化可造成主動(dòng)脈順應(yīng)性低下，而主動(dòng)脈順應(yīng)性低下是收縮壓升高的主要原因，是心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子[10]，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，復(fù)方芪麻膠囊能顯著降低高血壓大鼠主動(dòng)脈內(nèi)壓上升斜率、曲線下面積，提示復(fù)方芪麻膠囊能有效改變高血壓大鼠主動(dòng)脈的順應(yīng)性，并有較顯著的降壓作用。

NO在心血管活動(dòng)調(diào)控中具有重要作用,主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞合成和釋放，可使血管平滑肌內(nèi)的鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶激活，升高cGMP含量，降低游離鈣的濃度，使血管舒張。而ET-1是迄今知道的作用最強(qiáng)的收縮血管物質(zhì)，是通過(guò)增加血管壁細(xì)胞中的游離鈣濃度致使血管壁平滑肌收縮，周圍血管阻力增加，導(dǎo)致血壓升高；其亦能夠啟動(dòng)磷脂酶C而起到有絲分裂原的作用，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖，導(dǎo)致血管壁增厚，血管阻力增加，最終造成血壓的升高和血管的重塑[11]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示， 模型組血漿ET-1含量明顯高于正常組，說(shuō)明SHR大鼠血管內(nèi)皮中ET代謝異常；復(fù)方芪麻膠囊能夠明顯降低血漿ET的含量，同時(shí)明顯升高血清NO含量， 由此可推測(cè)復(fù)方芪麻膠囊通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞功能的平衡而降低血壓。

腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)是機(jī)體內(nèi)調(diào)節(jié)心血管活動(dòng)和水電解質(zhì)平衡的一個(gè)重要系統(tǒng)，其中AngⅡ是RAAS中的重要環(huán)節(jié)，可直接使小動(dòng)脈平滑肌收縮，外周阻力增加，使交感神經(jīng)沖動(dòng)發(fā)放增加，并能刺激腎上腺皮質(zhì)球狀帶，使醛固酮分泌增加，最終合成多種醛固酮誘導(dǎo)蛋白，進(jìn)而使管腔膜對(duì)Na+的通透性增大，線粒體內(nèi)ATP合成和管周膜上鈉泵的活動(dòng)性增加，從而導(dǎo)致對(duì)Na+的重吸收增強(qiáng)，對(duì)水的重吸收增加從而使腎小管遠(yuǎn)端集合管鈉再吸收增強(qiáng)，導(dǎo)致體內(nèi)水鈉潴留增加血容量，使血壓升高[12]。血管緊張素受體阻滯劑可使AngⅡ與受體結(jié)合減少，導(dǎo)致血漿中的AngⅡ的含量增多。由于本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示血漿中的AngⅡ在藥物干預(yù)下與模型組比較均明顯降低，可以推測(cè)復(fù)方芪麻膠囊有可能不具有血管緊張素受體阻滯的作用。

復(fù)方芪麻膠囊由黃芪、天麻、茯苓、澤瀉、法半夏、化橘紅、川芎等中藥組成，具有健脾益氣、化痰通絡(luò)等功效，臨床用于治療氣虛痰濁型高血壓所致的眩暈、頭痛、頭重、胸悶、痰多、疲倦乏力等證，在降血壓的同時(shí)還發(fā)現(xiàn)其具有保護(hù)心臟[13]、改善患者體內(nèi)炎癥反應(yīng)[14]、治療高血壓病早期腎損害[15]等作用。本文主要探討該復(fù)方對(duì)高血壓治療效果，并初步探討該復(fù)方降壓的作用機(jī)制，對(duì)預(yù)防及治療高血壓有著重大的意義。通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)，本課題組發(fā)現(xiàn)復(fù)方芪麻膠囊可明顯降低SHR大鼠的收縮壓、舒張壓，改善其主動(dòng)脈順應(yīng)性，且對(duì)老年SHR大鼠的收縮壓、舒張壓有明顯降低的作用，其降低作用可能與降低ET-1、AngⅡ含量，升高NO含量有關(guān)。為進(jìn)一步研究復(fù)方芪麻膠囊的降壓機(jī)制，本課題組計(jì)劃在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中取主動(dòng)脈在透射電鏡下觀察，評(píng)價(jià)主動(dòng)脈的微觀結(jié)構(gòu)改善情況，并從蛋白、基因?qū)哟翁綄?fù)方芪麻膠囊降壓的關(guān)鍵靶點(diǎn)及受體。

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(責(zé)任編輯：幸建華)

Effect of compound Qima capsule on blood pressure and aortic compliance in spontaneously hypertensive rats

ZENG Qiaohuang1,HUANG Lin1,ZHAO Jiangyu1,CHEN Yuxing2*,ZENG Xiaohui2,GAN Haining2,HUANG Dan′e2

(1.GuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine,GuangdongSecondTraditionalMedicineHospital,Guangzhou510275,China; 2.GuangdongResearchInstituteofTraditionalChineseMedicineManufacturingTechnology,GuangdongProvincialKeyLaboratoryofResearchandDevelopmentinTraditionalChineseMedicine,Guangzhou510095,China)

Abstract:Objective To explore the effect of compound Qima capsule on blood pressure,aortic compliance and vasoactive substances in spontaneously hypertensive rats. Methods The rats were divided into seven groups,including the sham group,the model group,the captopril group,the niuhuangjiangya capsule group and three different dosages of compound Qima capsule groups. After drug was given intragastrically for 4 weeks,blood pressure and aortic compliance were measured. The aged rats were divided into seven groups,including the sham group,the model group,the captopril group,the niuhuangjiangya capsule group and three different dosages of compound Qima capsule groups. After drug was given intragastrically for 4 weeks,blood pressure and NO,ET-1 and AngⅡ in plasma were measured. Results Compared with the model group,the systolic pressure and diastolic blood pressure of SHR were significantly decreased in the compound Qima capsule groups with the high,middle and low dosages (P<0.05 or P<0.01). Intra-aortic pressure rising slope and the area under the curve were reduced. Compared with the model group in aged rats,the blood pressure and the levels of ET-1 and AngⅡ were significantly decreased in three different dosages of compound Qima capsule groups (P<0.05 or P<0.01),but the NO levels were increased(P<0.05 or P<0.01). Conclusion Compound Qima capsule shows a potential activity on lowering diastolic and systolic blood pressure and improving aortic compliance,which may be related to modulate the levels of ET-1,AngⅡ and NO.

Key words:compound Qima capsule; blood pressure; aortic compliance; ET-1; AngⅡ; NO

DOI:10.16809/j.cnki.1006-8783.2015090901

中圖分類號(hào):R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1006-8783(2016)01-0083-05

作者簡(jiǎn)介：曾巧煌(1991—)，女，碩士，主要從事中藥藥理學(xué)研究，Email:674603862@qq.com；通信作者：陳玉興(1971—)，男，主任中藥師，主要從事中藥配方顆粒及中藥新藥開(kāi)發(fā)，電話: 020-83576735，Email: cyx89333@qq.com。

基金項(xiàng)目：廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013B040200040，2010A030100007)

收稿日期：2015-09-09

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-01-12 10:41網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160112.1041.003.html