袁曉雯，喬艷雪，李 蕊，姜 楠，陳 冰，張劍平，胡鏡清△△，馬雅鑾△

(1.中國中醫(yī)科學院中醫(yī)基礎理論研究所，北京 100700;2.首都醫(yī)科大學附屬北京地壇醫(yī)院傳染病研究所，北京 100015;3.北京市新發(fā)突發(fā)傳染病重點實驗室，北京 100015)

祛痰方和祛痰化瘀方調控單核-巨噬細胞分化抗動脈粥樣硬化的作用研究*

袁曉雯1，喬艷雪2，3，李 蕊2，3，姜 楠1，陳 冰1，張劍平2，3，胡鏡清1△△，馬雅鑾1△

(1.中國中醫(yī)科學院中醫(yī)基礎理論研究所，北京 100700;2.首都醫(yī)科大學附屬北京地壇醫(yī)院傳染病研究所，北京 100015;3.北京市新發(fā)突發(fā)傳染病重點實驗室，北京 100015)

目的:觀察和比較祛痰方和祛痰化瘀方調控ApoE－/－小鼠外周血單核細胞亞型分化，祛痰方和祛痰化瘀方含藥血清體外調控巨噬細胞和泡沫細胞亞型分化，探討其抗動脈粥樣硬化的作用。方法:采用12周齡ApoE－/－雄性小鼠，模型組給予高脂飲食，治療組同時給予祛痰方和祛痰化瘀方干預，4周后流式細胞儀檢測外周血單核細胞亞型。采用祛痰方和祛痰化瘀方含藥血清干預原代培養(yǎng)的巨噬細胞和泡沫細胞分化，流式細胞儀檢測巨噬細胞和泡沫細胞表面受體CD206表達(CD206+M2型)比例;實時定量PCR檢測巨噬細胞和泡沫細胞M1型因子Nos2和M2型因子Arg1的表達。結果:12周齡ApoE－/－小鼠高脂喂養(yǎng)4周后，外周血炎癥型單核細胞(Ly6Chi)的比例增高，定居型單核細胞(Ly6Clo)的比例降低;祛痰方具有降低Ly6Chi和增高Ly6Clo比例的趨勢;祛痰化瘀方干預顯著降低Ly6Chi的比例，提高Ly6Clo的比例。祛痰方含藥血清增加巨噬細胞Arg1的表達，但僅輕度提高M2型巨噬細胞比例;祛痰化瘀方含藥血清可提高M2型巨噬細胞比例和Arg1的表達，抑制Nos2的表達，促進單核細胞向M2型巨噬細胞分化。ox-LDL促進M2型泡沫細胞分化;祛痰方含藥血清僅輕度提高M2型泡沫細胞比例;祛痰化瘀方含藥血清進一步提高M2型泡沫細胞比例，但沒有明顯改善Arg1和Nos2的表達。結論:祛痰方調節(jié)單核-巨噬-泡沫細胞分化作用不明顯，而祛痰化瘀方通過調節(jié)單核、巨噬、泡沫細胞的功能性分化，可能是祛痰化瘀方減緩、抑制As發(fā)生發(fā)展的重要作用環(huán)節(jié)之一。

祛痰方和祛痰化瘀方;高脂血癥/動脈粥樣硬化;單核細胞;巨噬細胞;分化

由高脂血癥(hyperlipidemia，HP)向動脈粥樣硬化(atherosclerosis，As)發(fā)展是炎性和免疫損傷過程［1］，單核-巨噬細胞通過促進炎癥反應和脂質沉積在其中發(fā)揮極其重要的作用。血漿中異常增多的低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)經(jīng)氧化應激，產(chǎn)生ox-LDL激活免疫系統(tǒng)。外周血單核細胞在As形成過程中首先被激活，并進入損傷的血管壁組織中分化為巨噬細胞，巨噬細胞吞噬脂質，成為泡沫細胞。單核細胞和巨噬細胞，根據(jù)表面標志、激活方式和免疫功能可分化兩個亞群［2-3］。單核細胞分為炎癥型和定居型兩群;巨噬細胞分為經(jīng)典活化型(classically activated macrophages，M1型)和替代活化型(alternatively activated macrophages，M2型)兩類，在As形成過程中發(fā)揮促炎或抗炎作用［2-3］。

祛痰化瘀方是中國中醫(yī)科學院中醫(yī)基礎理論研究所胡鏡清研究員多年來用以治療高脂血癥/As與心腦疾病等痰瘀互結證的經(jīng)驗方，由基礎方、祛痰和活血化瘀三部分組成。針對高脂血癥/As痰證、瘀證和痰瘀互結證不同證候類型分別采用祛痰方(基礎方+祛痰組分)、化瘀方(基礎方+活血化瘀組分)和祛痰化瘀方治療。在既往研究中，我們采用ApoE－/－小鼠，證實中藥祛痰方、活血化瘀方及祛痰化瘀方具有調節(jié)高脂血癥引發(fā)的免疫反應，但它們的免疫調節(jié)機制不完全一樣，并在給藥干預的4周，其免疫調節(jié)不依賴于或早于它們的降脂作用。祛痰方主要通過抑制血管局部炎癥因子的表達，化瘀方通過抑制血管局部炎癥因子的表達和促進部分抑炎因子的表達，祛痰化瘀方既抑制ApoE－/－小鼠全身炎癥反應，又通過增強血管局部抑炎因子的表達，發(fā)揮免疫調節(jié)作用［4］。本文選擇具有全身和血管局部調節(jié)作用的祛痰化瘀方和僅有抑制血管局部炎癥的祛痰方，在單核-巨噬-泡沫細胞發(fā)育的3個層次，比較和探討祛痰方和祛痰化瘀方對于小鼠單核細胞、巨噬細胞和泡沫細胞功能性分化的影響。

1 材料與方法

1.1 藥物、試劑與儀器

祛痰化瘀方由基礎方(黨參、干姜、麻黃等)、祛痰組分(法半夏、陳皮、茯苓等)、活血化瘀組方(桃仁、紅花、生地等)三部分組成，祛痰方由基礎方+祛痰組分兩部分組成。所有藥材均購自北京同仁堂藥店，并經(jīng)中國中醫(yī)科學院中藥資源中心郝近大研究員鑒定符合藥典標準。按常規(guī)方法煎煮取汁、濃縮?？剐∈?CD11b-PercpCy5.5、Gr1-APC、Ly6CFITC、F4/80-PE和CD206-FITC抗體購于美國BD Pharmingen公司;重組小鼠的細胞因子M-CSF購于美國Peprotect公司;ox-LDL購于北京協(xié)生生物科技有限責任公司;RNA提取試劑盒購于德國Qiagen公司;實時熒光定量PCR探針GAPDH、Nos2和Arg1購自美國Life Technology公司合成;逆轉錄試劑盒和實時熒光定量PCR試劑盒購于美國ABI公司。FACS Callibur流式細胞儀為美國 BD公司產(chǎn)品，7500 Real-time PCR儀為美國ABI公司產(chǎn)品。

1.2 體內實驗

1.2.1 動物、分組、造模及給藥 所有實驗用鼠均購于北京大學實驗動物中心(動物許可證號SCXK(京)2011-0012)，并飼養(yǎng)于SPF條件下。體內實驗采用12周齡、體質量(20±2)g的雄性C57BL/ 6和ApoE－/－小鼠(C57BL/6小鼠5只和ApoE－/－小鼠20只)。實驗分為5組，其中C57BL/6小鼠為野生普食對照組;ApoE－/－小鼠配對比較法隨機分為ApoE－/－普食組、ApoE－/－高脂組、ApoE－/－高脂加中藥祛痰方組和ApoE－/－高脂加中藥祛痰化瘀方組各5只，分別給予普食和高脂飲食4周。高脂飼料含78.85%基礎飼料，0.15%膽固醇，21%脂肪。ApoE－/－高脂加中藥組同時給予祛痰方或祛痰化瘀方(相當于臨床等效劑量的10倍)灌胃，其他組給予等量純凈水灌胃。4周后，七戊烷吸入麻醉下，摘眼球采EDTA抗凝血，用于流式細胞儀檢測外周血單核細胞亞群比例。

1.2.2 外周血單核細胞亞群檢測 外周血加入紅細胞裂解液，裂解紅細胞后應用抗小鼠CD11b-PercpCy5.5、Gr1-APC和Ly6C-FITC直接法標記抗體染色，F(xiàn)ACS Callibur流式細胞儀檢測外周血單核細胞亞群比例。根據(jù) CD14和 Gr1表達，分出CD11b+Gr-單核細胞，根據(jù) Ly6C表達高低分為Ly6Chi、Ly6Cmi和Ly6Clo3個亞群。

1.3 體外實驗

1.3.1 祛痰方和祛痰化瘀方含藥血清的制備

SD雄性大鼠60只，8～12周齡，體質量(300± 50)g，給予祛痰和祛痰化瘀方(相當于臨床等效劑量的6倍)灌胃，每12 h 1次共5次。末次給藥后1 h，無菌取血制備含藥血清［5］。經(jīng)56℃ 30 min滅活，凍存管分裝，－20℃冰箱保存?zhèn)溆?。使用時用DMEM培養(yǎng)液稀釋成所需濃度。

1.3.2 巨噬細胞和泡沫細胞的培養(yǎng)及鑒定C57BL/6野生型雄性小鼠，6～8周齡，體質量(20±2)g，麻醉后處死小鼠。鈍性分離股骨和脛骨，用含2%FBS的PBS沖洗骨髓，制備單細胞懸液。離心收集骨髓細胞，并轉移至含10 ng/ml巨噬細胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor，MCSF)的培養(yǎng)液中，7 d后即為骨髓衍生的巨噬細胞(bone marrow-derived macrophage，BMDM)。收集骨髓衍生的巨噬細胞，加抗小鼠F4/80-PE和CD11b-Percp-cy 5.5直接法標記抗體染色，F(xiàn)ACS Callibur流式細胞儀檢測 F4/80+CD11b+巨噬細胞比例; CD206+的M2型巨噬細胞。

培養(yǎng)7 d的骨髓衍生的巨噬細胞，加入50 mg/ ml ox-LDL繼續(xù)培養(yǎng)1 d得到泡沫細胞。收集泡沫細胞進行油紅O染色，油鏡下觀察并鑒定泡沫細胞。

圖1 流式細胞儀鑒定小鼠外周血單核細胞及其亞群

1.3.3 祛痰方和祛痰化瘀方含藥血清對巨噬細胞分化的影響 骨髓細胞采用M-CSF誘導分化，分別加入大鼠對照血清、5%祛痰方含藥血清和3%祛痰化瘀方含藥血清，共培養(yǎng)7 d。收集細胞:(1)加抗小鼠 F4/80-PE、CD11b-Percp-cy5.5、CD206-FITC直接法標記抗體染色，F(xiàn)ACS Callibur流式細胞儀檢測細胞表型及其比例;(2)裂解細胞用于實時定量PCR法(探針法)檢測。

1.3.4 祛痰方和祛痰化瘀方含藥血清對巨噬細胞進一步分化的影響 分化成熟巨噬細胞中分別加入大鼠對照血清、5%祛痰方含藥血清和3%祛痰化瘀方含藥血清，培養(yǎng)1 d，收集細胞處理同1.3.3。

1.3.5 祛痰方和祛痰化瘀方含藥血清對泡沫細胞分化的影響 分化成熟巨噬細胞中分別加入50 ug/ml ox-LDL大鼠對照血清、5%祛痰方含藥血清和3%祛痰化瘀方含藥血清，培養(yǎng)1 d，收集細胞處理同1.3.3。

1.3.6 實時定量PCR(探針法)檢測Nos2和Arg1基因表達 采用RNeasy Plus Micro Kit提取細胞RNA，RNA溶于20 μL RNAase-free H2O中，測定RNA純度和濃度。反轉錄反應采用High Capacity RNA-to-cDNA試劑盒，總體系為20 μL，其中RNA溶液10 μL，反應條件:25℃、10 min，37℃120 min，85℃5 min;4℃冷卻，RT-PCR采用Gene Expression Master Mix試劑盒及TaqMan?GAPDH、Nos2、Arg1探針和ABI 7500型基因擴增儀，總體系20 μL，其中10 μL Master Mix，8 μL ddH2O，1 μL探針，1 μL cDNA模板，擴增條件:50℃ 2 min，95℃預變性10 min s，95℃ 15 s，60℃退火延伸60 s，共60個循環(huán)。以內源性 GAPDH作參照，使用 ABI SDS 7500 software軟件進行結果分析。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，各數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(±s)表示、單因素方差分析，組間比較采用SNK檢驗，P＜0.05，P＜0.001為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組動物外周血單核細胞亞群比例比較

飼養(yǎng)4周后與野生型小鼠比較，無論普食還是高脂喂養(yǎng)，ApoE－/－小鼠外周血Ly6Chi比例顯著升高(P值分別為0.0015、7.08E-5);與ApoE－/－小鼠普食組比較，高脂喂養(yǎng)的ApoE－/－小鼠外周血Ly6Clo比例顯著降低(P值為0.0018);高脂喂養(yǎng)的ApoE－/－小鼠外周血Ly6Chi比例顯著降低(P值為0.00012)，提示高血脂刺激增加Ly6Chi、Ly6Clo比例。

圖2 骨髓來源的巨噬細胞和泡沫細胞鑒定注:A.蘇木素單染觀察到10 ng/ml巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)作用7 d后的巨噬細胞(1000 ×);B.流式細胞儀鑒定培養(yǎng)7 d后的巨噬細胞純度;C.流式細胞儀鑒定CD206+的M2型巨噬細胞;D.油紅O染色觀察吞噬50mg/ml ox-LDL 24 h形成的泡沫細胞(1000×)

表1顯示，祛痰方和祛痰化瘀方干預高脂喂養(yǎng)的ApoE－/－小鼠4周后，祛痰方具有改善高血脂刺激引發(fā)Ly6Chi和Ly6Clo比例的趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義(P值分別為0.477、0.116);祛痰化瘀方顯著降低外周血Ly6Chi，提高Ly6Clo比例(P值分別為0.035、0.001)。

表1 各組動物單核細胞亞群比例(%)

2.2 祛痰方和祛痰化瘀方含藥血清對單核細胞向巨噬細胞分化的影響化作用較強，祛痰方和祛痰化瘀方含藥血清誘導分化作用不能充分體現(xiàn)。不采用M-CSF誘導分化的M2型BMDM的比例與采用M-CSF誘導分化比較明顯降低;與對照血清比較，祛痰化瘀方含藥血清顯著增加CD206+M2型BMDM的比例(P=0.046)，提示在單核細胞向巨噬細胞分化過程中，祛痰化瘀方含藥血清促進M2巨噬細胞標志表達。實時定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)，含藥血清上調巨噬細胞M2亞型基因Arg1的表達水平(P=0.00011)，抑制巨噬細胞M1亞型基因Nos2的表達水平(P=0.020)。祛痰方含藥血清增加CD206+M2型BMDM的比例，但差異無統(tǒng)計學意義(P=0.209);上調巨噬細胞M2亞型基因Arg1的表達水平(P=0.013)，但未改變巨噬細胞 M1亞型基因 Nos2的表達水平(P= 0.973)(表2)。結果提示，祛痰方和祛痰化瘀方含藥血清具有促進M2型BMDM分化的作用，但其作用較弱。

表2顯示，采用M-CSF誘導分化后，與對照血清比較，祛痰化瘀方含藥血清和祛痰方含藥血清增加M2型BMDM細胞比例，但差異無統(tǒng)計學意義(P值分別為0.094、0.104)。我們推測M-CSF誘導分

表2 含藥血清影響單核細胞向M2型BMDM分化

2.3 祛痰方和祛痰化瘀方含藥血清影響成熟巨噬細胞進一步分化

表3顯示，為研究祛痰方和祛痰化瘀方含藥血清對巨噬細胞進一步分化的影響，我們將分化成熟的BMDM分別加入大鼠對照血清、5%祛痰方含藥血清和3%祛痰化瘀方含藥血清中培養(yǎng)1 d。結果發(fā)現(xiàn)，與對照血清比較，祛痰化瘀方含藥血清顯著增加CD206+M2型BMDM的比例(P=0.019)，提示祛痰化瘀方含藥血清促進成熟的巨噬細胞M2標志表達。實時定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)，含藥血清上調巨噬細胞M2亞型基因Arg1的表達水平(P=0.024)，但未改變巨噬細胞M1亞型基因Nos2的表達水平(P =0.943)。祛痰方含藥血清增加 CD206+M2型BMDM的比例，但差異無統(tǒng)計學意義(P=0.085);實時定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)，祛痰方含藥血清上調巨噬細胞M2亞型基因Arg1的表達水平(P=0.022)，但未改變巨噬細胞M1亞型基因Nos2的表達水平(P =0.198)。

2.4 祛痰方和祛痰化瘀方含藥血清對巨噬細胞向泡沫細胞分化的影響

表3顯示，為探討含藥血清對泡沫細胞分化的影響，我們在分化成熟的BMDM加入50ug/ml ox-LDL培養(yǎng)24 h，誘導BMDM吞噬ox-LDL形成泡沫細胞。ox-LDL誘導的CD206+泡沫細胞比例顯著增多(P=0.00011)，泡沫細胞內Arg1表達顯著增多(P=2.70E-7)，提示ox-LDL誘導的泡沫細胞M2型細胞特征進一步增強。在ox-LDL誘導形成泡沫細胞過程中，祛痰化瘀方含藥血清干預可以進一步顯著增加CD206+泡沫細胞比例(P=0.018)，但同時降低 Arg1和 Nos-2的表達(P值分別為 0.497、0.133)，提示祛痰化瘀方進一步促進BMDM向M2型泡沫細胞分化。祛痰方含藥血清干預，也增加CD206+泡沫細胞比例，差異無統(tǒng)計學意義(P= 0.075)，但同時降低Arg1和Nos-2的表達(P值分別為0.079、0.170)，提示祛痰方進一步促進BMDM向M2型泡沫細胞分化。

表3 含藥血清影響成熟BMDM繼續(xù)分化及其向M2型泡沫細胞分化

3 討論

單核-巨噬細胞既是免疫細胞同時又是As斑塊的主要組成細胞，在As發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。外周血單核細胞在血管的募集程度可以反映As進展［6］。正常生理狀態(tài)下，單核-巨噬細胞亞群的分化過程為炎癥型單核細胞→定居型單核細胞→組織巨噬細胞。在As的發(fā)生發(fā)展過程中，單核-巨噬細胞不僅數(shù)目增多，而且分化途徑也發(fā)生改變［7-8］。正常動脈組織中巨噬細胞極為少見，而As斑塊存在大量巨噬細胞［9］，并直接來源于炎癥型單核細胞［10-11］。前期研究中我們采用高脂喂養(yǎng)4周的ApoE－/－小鼠，不僅外周血單核細胞比例增多，而且Ly6Chi比例顯著增多［4-5，12］，結果證實高血脂對單核細胞及其分化和功能產(chǎn)生影響。

在As發(fā)生發(fā)展過程中，巨噬細胞依據(jù)As進展病變狀況極化成M1或M2型，如不穩(wěn)定斑塊組織中主要以M1型巨噬細胞為主［13］，而穩(wěn)定斑塊組織中M2型巨噬細胞比例增多［14］。巨噬細胞吞噬 ox-LDL成為泡沫細胞，M2型巨噬細胞較M1型更容易吞噬ox-LDL［15］。我們發(fā)現(xiàn)，ox-LDL刺激24 h促使巨噬細胞向M2型分化。但是體內觀察到肥胖或As斑塊形成過程中，斑塊內巨噬細胞以 M1型為主［8，13，16］?？赡芤驗橥淌蒾x-LDL促進M2型巨噬細胞分泌炎性因子MCP-1［17］，長期的ox-LDL和炎癥刺激，誘導泡沫細胞的免疫平衡由M2逐漸向M1傾斜［5］，并且巨噬細胞吞噬ox-LDL后，ox-LDL的脂毒性可促進M2型巨噬細胞凋亡［15］，從而導致斑塊內巨噬細胞分化逐漸轉向M1型［18-19］。

祛痰方和祛痰化瘀方是中國中醫(yī)科學院中醫(yī)基礎理論研究所胡鏡清研究員多年來用以治療高脂血癥/As與心腦疾病等痰證和痰瘀互結證的經(jīng)驗方，具有良好臨床療效。動物實驗發(fā)現(xiàn)，祛痰方可以抑制血管局部炎癥，而祛痰化瘀方具有全身和血管局部調節(jié)作用［4］。我們進一步研究發(fā)現(xiàn)，祛痰化瘀方干預可以在多個階段影響單核-巨噬細胞的免疫極性。首先，祛痰化瘀方在體內可以顯著提高定居型單核細胞比例和顯著降低炎癥型單核細胞比例，可能進一步降低As斑塊內巨噬細胞的來源;其次，在單核細胞向巨噬細胞、巨噬細胞向泡沫細胞分化兩個階段，祛痰化瘀方含藥血清可以促進巨噬細胞向M2型分化，這有可能利于As斑塊的穩(wěn)定。祛痰方對單核-巨噬細胞的免疫極性影響較祛痰化瘀方弱。

單核細胞增殖、分化成巨噬細胞以及巨噬細胞As斑塊內存活的維持都需要M-CSF［12］。我們發(fā)現(xiàn)在M-CSF作用下，祛痰化瘀方含藥血清增加M2型BMDM細胞比例的趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義。而在缺乏M-CSF作用時，M2型BMDM細胞比例總體顯著下降，祛痰化瘀方含藥血清才顯示增加M2型BMDM細胞比例的作用。祛痰化瘀方含藥血清體外促進M2型BMDM細胞分化作用較弱。

我們發(fā)現(xiàn)祛痰化瘀方的作用靶點非常廣泛，貫穿單核-巨噬細胞發(fā)育過程的始終，但影響巨噬細胞分化作用減弱。而祛痰方含藥血清促進單核-巨噬細胞發(fā)育作用弱于祛痰化瘀方。這與我們前期體內研究中發(fā)現(xiàn)，祛痰方僅抑制血管局部炎癥，而祛痰化瘀方對于ApoE－/－小鼠全身性炎癥反應和血管局部反應均有抑制作用，即祛痰方抑制炎癥效果弱于祛痰化瘀方報道一致。

綜上所述，我們發(fā)現(xiàn)祛痰化瘀方體內、體外均可調節(jié)單核-巨噬細胞的功能分化，在減緩、抑制高脂血癥引發(fā)As發(fā)生發(fā)展的過程中發(fā)揮一定的治療作用。

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Effects of Eliminating Phlegm Prescription and Eliminating Phlegm and Removing Blood Stasis Prescription on Regulating the Monocyte Macrophage Differentiation And Anti Atherosclerosis

YUAN Xiao-wen1，QIAO Yan-xue2，3，LI Rui2，3，JIANG Nan1，CHEN Bing1，Zhang Jian-ping2，3，HU Jing-qing1△△，MA Ya-luan1△
(1.The Institute of Basic Theory，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China; 2.Institute of Infectious Disease，Beijing Ditan Hospital，Capital Medical University，Beijing 100015，China; 3.Beijing Key Laboratory of Emerging Infectious Diseases，Beijing 100015，China)

Objective:To observe and compare the effects of Qutan-Fang and Qutan-Huayu-Fang on regulating the differentiation of monocytes in an apolipoproteinE knockout(ApoE－/－)mouse model，and Qutan-Fang-containing serum and Qutan-Huayu-Fang-containing serum on differentiation of macrophages and foam cells in vitro.Methods:In the present study，12 weeks old male homozygous ApoE－/－mice were fed with a normal chow diet，a high cholesterol Western diet (WD)and WD supplemented with Qutan-Fang and Qutan-Huayu-Fang.After 4 weeks，the subtypes of monocytes in peripheral blood were detected by FACS.Bone marrow cells were differentiated to bone marrow-derived macrophages (BMDM)with Qutan-Fang-containing serum or Qutan-Huayu-Fang-containing serum for 7 days;BMDM were stimulated by ox-LDL to form foam cells with or without Qutan-Fang-containing serum and Qutan-Huayu-Fang-containing serum，the M2 subtype surface receptor CD206 of macrophages and foam cells were detected by FACS，the genes Nos2 and Arg1 were assayed by Real-time PCR.Results:Hypercholesterolaemia increased the ratio of inflammatory subset of monocytes(Ly6hi) and decreased the ratio of resident subset of monocytes(Ly6Clo)in peripheral blood in 12 weeks apoE-/-mice with Western diet for another 4 weeks.Qutan-Huayu-Fang decreased the ratio of Ly6Chiand increased the ratio of Ly6Clo.In vitro，Qutan-Huayu-Fang-containing serum increased the differentiation of M2 macrophages from bone marrow cells.Qutan-Huayu-Fang-containing serum induced mRNA expression of Arg1 and inhibited mRNA expression of Nos2 of these cells.Qutan-Fang-containing serum induced mRNA expression of Arg1，but it had no significant effect on the differentiation of M2 subtype of BMDM.Ox-LDL induced M2 subtype of foam cells from BMDM，and Qutan-Huayu-Fang-containing serum increased differentiation of M2 subtype of foam cells from BMDM.Qutan-Fang-containing serum had no significant effect onthe differentiation of M2 subtype of foam cells.Conclusion:Hypercholesterolaemia and atherosclerosis are associated with abnormal differentiation of monocytes，macrophages and foam cells.Qutan-Huayu-Fang can inhibit atherosclerosis by regulating the differentiation of monocytes，macrophages and foam cells.Qutan-Fang has significant effect on regulating the differentiation of monocytes，macrophages and foam cells.

Qutan-Fang and Qutan-Huayu-Fang;Hypercholesterolaemia/atherosclerosis;Monocyte;Macrophage; Differentiation

R285.5

B

1006-3250(2016)12-1607-05

2016-05-11

國家重點基礎研究計劃項目(2014CB542903)-中醫(yī)證候臨床辨證的基礎研究;中國中醫(yī)科學院自主選題研究項目(YZ-1407)-祛痰、化瘀及祛痰化瘀對ApoE-/-動脈粥樣硬化小鼠的作用機制的對比研究

△△指導老師

袁曉雯(1991-)，女，在讀碩士，從事中西醫(yī)結合基礎研究。

△通訊作者:馬雅鑾(1968-)，女，研究員，醫(yī)學博士，碩士研究生導師，從事中醫(yī)藥抗炎與免疫研究，Tel:010-64089027，E-mail: yaluanma@163.com。