丁云錄　張蓮珠　趙昱瑋李曉兵　陳聲武　(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林　長(zhǎng)春　3002)

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卷柏總黃酮對(duì)D－半乳糖衰老模型小鼠的影響

丁云錄張蓮珠趙昱瑋1李曉兵陳聲武(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林長(zhǎng)春130021)

〔摘要〕目的研究卷柏總黃酮對(duì)D－半乳糖( D－gal)致衰老模型小鼠的影響。方法昆明小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(給予600 mg/kg復(fù)方吡拉西坦蛋白水解物片混懸液)、卷柏總黃酮高中低3個(gè)劑量組(分別灌服800、400和200 mg/kg的卷柏總黃酮混懸液)，除正常對(duì)照組外，其余5個(gè)試驗(yàn)組小鼠每日均頸背部皮下注射5% D－gal 0．25 ml/10 g，連續(xù)注射6 w建立衰老動(dòng)物模型，正常對(duì)照組小鼠頸背部皮下注射等量生理鹽水。于試驗(yàn)第3周開始給予供試品，各組小鼠均按20 ml/kg體積灌胃給藥，正常對(duì)照組，模型組灌服蒸餾水，連續(xù)給藥4 w。采用酶法測(cè)定腦組織勻漿的蛋白質(zhì)含量、超氧化物歧化酶( SOD)活性及丙二醛( MDA)含量。結(jié)果卷柏總黃酮高、中劑量組均能明顯增加衰老小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)( P＜0．01或P＜0．05)。卷柏總黃酮能夠顯著提高D－gal誘導(dǎo)的亞急性衰老小鼠機(jī)體組織SOD活性，降低MDA含量。結(jié)論卷柏總黃酮可顯著改善D－gal衰老模型小鼠的衰老指征，能明顯抵抗由D－gal所致衰老小鼠免疫器官的萎縮，使D－gal衰老模型小鼠大腦SOD活性增加、MDA含量下降，具有抗氧化、抗衰老作用。

〔關(guān)鍵詞〕卷柏總黃酮; D－半乳糖;抗衰老

1吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院

第一作者:丁云錄( 1979－)，男，助理研究員，主要從事中藥、天然藥物的藥理活性研究。

卷柏為卷柏科植物卷柏Selaginella tamariscina( Beauv．) Spring的干燥全草，又名不死草、長(zhǎng)生草、回陽(yáng)草等，其味辛、性平，歸肝、心經(jīng)，有破血散瘀、活血通經(jīng)的獨(dú)特功效，主要含黃酮、酚性成分、氨基酸、海藻糖等成分〔1〕，廣泛應(yīng)用于腹痛、便血、尿血等癥。現(xiàn)代藥理及臨床研究表明卷柏具有抗炎、抗病毒、止血、鎮(zhèn)痛、降血壓、抗衰老和增強(qiáng)人體免疫功能等作用。本研究探討卷柏主要活性成分卷柏總黃酮對(duì)D－半乳糖( D－gal)衰老模型小鼠的影響。

1材料與方法

1. 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明小鼠，雌雄各半，體重18～22 g。動(dòng)物合格證號(hào): SCXK－(吉) 2008－0005，購(gòu)于吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1. 2藥品及試劑卷柏總黃酮，淺黃褐色粉末，吉林天藥藥物研發(fā)有限公司植物化學(xué)研究室提供;復(fù)方吡拉西坦蛋白水解物片，長(zhǎng)春長(zhǎng)慶藥業(yè)集團(tuán)有限公司產(chǎn)品; D－半乳糖，北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司產(chǎn)品;考馬斯亮藍(lán)試劑盒、超氧化物歧化酶( SOD)試劑盒、丙二醛( MDA)試劑盒均為南京建成生物研究所產(chǎn)品。

1. 3主要儀器酶標(biāo)儀( Spectrafluor PLUS，奧地利TECAN公司)，可調(diào)高速勻漿器( FSH－2，江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)，低速自動(dòng)平衡離心機(jī)( LDZ－2，北京醫(yī)用離心機(jī)廠)。

1. 4方法

1. 4. 1 D－gal衰老小鼠模型的建立〔2～4〕試驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)入后，適應(yīng)環(huán)境3 d，隨機(jī)分為6組:正常對(duì)照組，模型組，陽(yáng)性對(duì)照組(藥復(fù)方吡拉西坦蛋白水解物片組)，卷柏總黃酮高中低3個(gè)劑量組，每組10只小鼠。除正常對(duì)照組外，其余5個(gè)試驗(yàn)組小鼠每日按照0．25 ml/10 g劑量頸背部皮下注射5% D－gal，連續(xù)注射6 w建立衰老動(dòng)物模型，正常對(duì)照組注射等量生理鹽水。于試驗(yàn)第3周開始給予供試品，各組小鼠均按20 ml/kg體積灌胃給藥，正常對(duì)照組，模型組灌服蒸餾水，陽(yáng)性對(duì)照組灌服600 mg/kg劑量的復(fù)方吡拉西坦蛋白水解物混懸液，卷柏總黃酮高中低三個(gè)劑量組分別灌服800、400和200 mg/kg的卷柏總黃酮混懸液，連續(xù)給藥4 w。

1. 4. 2檢測(cè)指標(biāo)末次給藥1 h后，稱體重，將小鼠脫臼處死，快速摘取腦、胸腺和脾臟，稱重、記錄數(shù)據(jù)，計(jì)算胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。脾臟指數(shù)=脾臟重量( mg) /體重( g) ;胸腺指數(shù)=胸腺重量( mg) /體重( g)。腦組織生化指標(biāo)的測(cè)定:按質(zhì)量體積比加入生理鹽水制成10%腦組織勻漿，離心后取上清液，按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行腦組織蛋白質(zhì)、SOD和MDA含量測(cè)定。

1. 5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS11．5軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2. 1各組小鼠體重的比較給予D－gal 6 w，各組小鼠體重均有增加，模型組小鼠略低于空白對(duì)照組，但組間比較無(wú)顯著差異( P＞0．05)，見(jiàn)表1。

2. 2各組小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)比較與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠的免疫器官萎縮，胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均降低( P＜0．001)，表明皮下注射D－gal導(dǎo)致小鼠免疫器官萎縮是引起小鼠衰老的原因之一。卷柏總黃酮高、中劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組均能增加衰老小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)( P＜0．01或P＜0．05)。見(jiàn)表1。

2. 3各組小鼠組織蛋白質(zhì)含各比較模型組小鼠的腦組織蛋白質(zhì)含量與正常對(duì)照組比較，有所降低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異( P＞0．05)，各給藥組與模型組比較，也無(wú)明顯差異( P＞0．05)，表明卷柏總黃酮對(duì)小鼠腦組織蛋白質(zhì)含量無(wú)明顯的影響( P均＞0．05)，見(jiàn)表2。

2. 4各組小鼠腦組織MDA、SOD比較卷柏總黃酮能夠顯著提高D－gal誘導(dǎo)的亞急性衰老小鼠機(jī)體組織SOD活性，降低MDA含量( P＜0．05)，見(jiàn)表2。

表1各組小鼠體重、脾臟系數(shù)和胸腺系數(shù)的影響( n=10±s)

與模型組比較: 1) P＜0．05，2) P＜0．01，3) P＜0．001

組別　　體重( g)脾臟系數(shù)( mg/10 g)胸腺系數(shù)( mg/10 g)正常對(duì)照組　34．5±2．42　 44．54±6．093)　22．07±2．743)模型組　32．5±2．27　 32．60±6．22　 15．51±2．24陽(yáng)性對(duì)照組　33．2±2．39　 38．35±5．071)　19．96±3．902)卷柏總黃酮高劑量組　33．8±2．70　 39．49±4．981)　18．18±2．481)卷柏總黃酮中劑量組　34．4±2．27　 40．48±4．472)　18．58±2．831)卷柏總黃酮低劑量組　34．0±2．05　 37．44±5．93　 17．44±2．15

表2各組小鼠腦組織蛋白質(zhì)含量、MDA含量和SOD活性的影響( n=10±s)

表2各組小鼠腦組織蛋白質(zhì)含量、MDA含量和SOD活性的影響( n=10±s)

與模型組比較: 1) P＜0．05，2) P＜0．01

組別　　蛋白質(zhì)含量( g/L) SOD活性( U/mgprot) MDA含量( nmol/mgprot)正常對(duì)照組　2．96±0．49　 128．84±39．031)　1．97±0．691)模型組　2．59±0．51　 87．73±22．71　 3．14±1．19陽(yáng)性對(duì)照組　2．81±0．30　 114．88±24．661)　2．06±1．041)卷柏總黃酮高劑量組　2．82±0．25　 125．49±32．502)　2．09±0．891)卷柏總黃酮中劑量組　2．88±0．24　 113．82±19．701)　2．16±0．661)卷柏總黃酮低劑量組　2．81±0．35　 111．97±23．551)　2．43±1．07

3討論

動(dòng)物長(zhǎng)期注射D－gal會(huì)引起全身代謝紊亂，產(chǎn)生各器官衰退，這一過(guò)程與機(jī)體的自然衰老過(guò)程相似，是衰老研究中常用的一種衰老試驗(yàn)動(dòng)物模型。自由基理論在衰老學(xué)說(shuō)中占有重要地位，半乳糖衰模型也得到了自由基衰老學(xué)說(shuō)的支持和驗(yàn)證。機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)隨年齡而增加，同時(shí)伴有抗氧化系統(tǒng)功能下降，導(dǎo)致體內(nèi)自由基濃度升高，超過(guò)機(jī)體的防御能力，造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能損傷。D－gal可引起模型體內(nèi)SOD活性下降、MDA增加、學(xué)習(xí)記憶障礙。氧自由基攻擊生物大分子使SOD等合成減少，減弱了抗氧化酶清除氧自由基的能力。本試驗(yàn)表明卷柏總黃酮可顯著改善D－gal衰老模型小鼠的衰老指征，能明顯抵抗由D－gal所致衰老小鼠免疫器官的萎縮，使D－gal衰老模型小鼠大腦SOD活性增加、MDA含量下降，具有抗氧化、抗衰老作用，因此，卷柏總黃酮有望開發(fā)成防衰老、抗老年癡呆的植物源性藥物。

4參考文獻(xiàn)

1鄭曉珂，史社坡，畢躍峰，等．卷柏中黃酮類成分研究〔J〕．中草藥，2004; 35( 7) : 742．

2謝煥松，周鳴鳴．卷丹水提物對(duì)D－半乳糖衰老模型小鼠的影響〔J〕．中國(guó)老年學(xué)雜志，2008; 28( 7) : 1376－7．

3白雪，楊杰，劉昌福，等．延胡索總生物堿對(duì)D－半乳糖所致衰老模型小鼠相關(guān)指標(biāo)的影響〔J〕．貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，2008; 32( 5) : 399－41．

4陸英，張潔．仙鶴草水提液對(duì)D－半乳糖衰老模型小鼠的影響〔J〕．齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011; 32( 10) : 1542－3．

〔2014－06－11修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢(mèng)園)

通訊作者:張蓮珠( 1971－)，女，副主任藥師，博士，碩士生導(dǎo)師，主要從事中藥成分活性及中醫(yī)證候的免疫與分子生物學(xué)特征研究。

基金項(xiàng)目:吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目( No．20090922)

〔中圖分類號(hào)〕R285. 5

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202( 2016) 02-0293-02;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2016. 02. 017