鮮巧陽， 王 勇， 黃智翔， 李湘東（武漢大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心/ABSL-III實(shí)驗(yàn)室， 武漢430071）

非人靈長類動(dòng)物感染性實(shí)驗(yàn)中的福利問題

鮮巧陽， 王 勇， 黃智翔， 李湘東
（武漢大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心/ABSL-III實(shí)驗(yàn)室， 武漢430071）

良好的動(dòng)物福利有利于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的“身心健康”，使之處于更接近其生物學(xué)特性的“自然狀態(tài)”［1］。利用擁有良好動(dòng)物福利的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行的科學(xué)實(shí)驗(yàn)， 獲得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更加可靠， 重復(fù)性更好。非人靈長類動(dòng)物（猴）是傳染病研究中不可替代或最好的模型動(dòng)物， 其智力發(fā)達(dá)， 聰明好動(dòng)， 不易馴化， 這一特點(diǎn)使工作人員在實(shí)驗(yàn)中容易被其抓、咬傷， 增加了工作人員在感染性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的生物安全風(fēng)險(xiǎn)。關(guān)注感染性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中非人靈長類動(dòng)物（猴）的福利問題， 保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物享有良好的動(dòng)物福利， 使之身心處于更舒適的狀態(tài)，建立工作人員和動(dòng)物之間的和諧關(guān)系，有助于減少動(dòng)物的攻擊性， 更好地保障實(shí)驗(yàn)中工作人員的安全。本文將結(jié)合生物安全實(shí)驗(yàn)室的工作情況，從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目審核、動(dòng)物采購和運(yùn)輸、動(dòng)物飼養(yǎng)、動(dòng)物使用等方面探討非人靈長類動(dòng)物（猴）在感染性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的福利問題。

1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的審核

在開始實(shí)驗(yàn)前，項(xiàng)目負(fù)責(zé)人應(yīng)制定詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，實(shí)驗(yàn)方案不僅要描述與科學(xué)相關(guān)的內(nèi)容，也需要描述與動(dòng)物福利相關(guān)的內(nèi)容［2］。內(nèi)容至少包括：實(shí)驗(yàn)的目的與意義； 使用非人靈長類動(dòng)物的依據(jù)、動(dòng)物品種、規(guī)格、數(shù)量、來源和飼養(yǎng)要求；實(shí)驗(yàn)人員情況（是否經(jīng)過實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和生物安全培訓(xùn)）；實(shí)驗(yàn)方法； 病原微生物的種類和防護(hù)要求； 說明感染性實(shí)驗(yàn)會(huì)造成何種痛苦以及如何解除或減輕痛苦； 安死術(shù)標(biāo)準(zhǔn)以及方法； 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)替代方法檢索等。只有經(jīng)過實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和使用委員會(huì)（IACUC）的審批，才能開始動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

2 動(dòng)物采購和運(yùn)輸

動(dòng)物供應(yīng)商必須有《野生動(dòng)物馴養(yǎng)繁殖許可證》和《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證》， 并出具《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證》。排除實(shí)驗(yàn)相關(guān)及影響動(dòng)物免疫狀態(tài)的微生物。運(yùn)輸?shù)木嚯x和時(shí)間越長， 應(yīng)激因素越多， 不潔飲食、外傷、溫度過高或過低、病原感染等， 都會(huì)增加動(dòng)物患病幾率， 影響動(dòng)物的免疫狀態(tài)［3］。因此應(yīng)盡可能選擇快速而安全的方式運(yùn)輸， 如航空。

3 動(dòng)物飼養(yǎng)

3.1 動(dòng)物的檢疫觀察期和適應(yīng)期

非人靈長類動(dòng)物（猴）的檢疫觀察期一般為30 d。動(dòng)物到達(dá)設(shè)施后， 核查動(dòng)物的質(zhì)量合格證， 背景檔案資料，進(jìn)行全身檢查等。每日觀察動(dòng)物，如有可疑情況立即向獸醫(yī)報(bào)告。到達(dá)1周后，采集血液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，如發(fā)現(xiàn)異常動(dòng)物，應(yīng)立即隔離，并重復(fù)檢測(cè)一次或進(jìn)行第三方檢測(cè)。如確認(rèn)是結(jié)核菌感染等烈性傳染病，應(yīng)對(duì)動(dòng)物施行安死術(shù)，動(dòng)物尸體經(jīng)無害化處理； 如確認(rèn)是非烈性傳染病或其他異常狀況，可以與動(dòng)物供應(yīng)商協(xié)商解決。

動(dòng)物進(jìn)入感染性設(shè)施后，應(yīng)經(jīng)過4周左右的適應(yīng)期，感染性設(shè)施內(nèi)多為單籠，適應(yīng)期可讓動(dòng)物適應(yīng)新的籠具、環(huán)境。有利于降低動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)，維持動(dòng)物對(duì)感染因子的正常反應(yīng)。

3.2 飼養(yǎng)設(shè)施和方法

動(dòng)物飼養(yǎng)間的環(huán)境參數(shù)如猴籠的空間應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施和生物安全實(shí)驗(yàn)室的要求［4，5］以及動(dòng)物福利的要求［6，7］?；\具應(yīng)該滿足維護(hù)方便、故障率低、消毒方便、無銳角毛刺、便于觀察等要求，以保證動(dòng)物處在一個(gè)衛(wèi)生舒適安全的環(huán)境。感染性動(dòng)物設(shè)施，壓差較大，換氣次數(shù)較高，容易在門縫和過濾器等處形成嘯叫噪音， 應(yīng)盡可能避免。應(yīng)保證每日對(duì)猴籠進(jìn)行清洗，排泄物應(yīng)在24 h內(nèi)清除，不同房間的清潔工具不能混用。

猴的主要食物為全價(jià)顆粒飼料和新鮮果蔬。飼料的保存要注意防霉、防潮、防蟲害污染， 并在保質(zhì)期內(nèi)。新鮮水果可在冷藏箱內(nèi)保存。飲用水應(yīng)滿足城市生活用水的標(biāo)準(zhǔn)， 飲水瓶每日清洗消毒。要排除營養(yǎng)缺乏和消化道感染對(duì)正常實(shí)驗(yàn)的影響。

3.3 豐富環(huán)境措施

非人靈長類動(dòng)物屬于群居動(dòng)物（social animal），通常用成對(duì)或群居飼養(yǎng)。為避免動(dòng)物交叉感染，感染性實(shí)驗(yàn)室往往采用單籠飼養(yǎng)，因此，采取充足的環(huán)境豐富措施就顯得尤為重要。

3.3.1 社交性環(huán)境豐富措施（social enrichment） 不宜頻繁更換非人靈長類動(dòng)物的工作人員，動(dòng)物與人之間建立熟悉而和諧的關(guān)系，可避免動(dòng)物因陌生感發(fā)生飲食異常和情緒緊張。工作人員應(yīng)懷有一顆愛護(hù)動(dòng)物之心，并行愛護(hù)動(dòng)物之舉，與動(dòng)物之間保持一定的互動(dòng)，工作中動(dòng)作要輕柔，不能粗暴虐待動(dòng)物，人類與動(dòng)物的積極互動(dòng)可以補(bǔ)償單籠飼養(yǎng)的動(dòng)物因缺乏同伴造成的孤寂。

3.3.2 非社交性環(huán)境豐富措施（non social enrichment）非人靈長類動(dòng)物籠具應(yīng)是柵欄式或采用透明擋板，以便籠具中的動(dòng)物能通過視、聽、嗅等感官信息的非接觸方式獲知同伴的信息，補(bǔ)償其缺乏同伴的孤寂?；\具中應(yīng)放置猴鏡，謎機(jī)等玩具。也可適當(dāng)提供更大的空間或者更多的玩具［7］。并且這些玩具需要定期清洗消毒。

在有條件的動(dòng)物飼養(yǎng)間安裝音響設(shè)備和電視，定期播放相關(guān)影像資料和動(dòng)物喜歡的音樂，也是通過視、聽等感官信息增加動(dòng)物非接觸聯(lián)系的手段之一，補(bǔ)償動(dòng)物缺乏同伴的孤寂。

4 動(dòng)物使用

4.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作中的福利

在感染性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中， 良好的操作會(huì)減少動(dòng)物與人員的對(duì)抗，減少工作人員的心理壓力， 從而減低生物安全事故發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。工作人員盡量要求固定，在實(shí)驗(yàn)開始之前，可以通過喂食等方式與動(dòng)物建立良好的關(guān)系，有助于減少動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)。有條件的實(shí)驗(yàn)室在實(shí)驗(yàn)開始之前，可以通過正向訓(xùn)練（例如食物獎(jiǎng)勵(lì)）讓動(dòng)物習(xí)慣性接受實(shí)驗(yàn)操作，比如肌肉注射、靜脈采血、進(jìn)出猴籠到指定位置等。當(dāng)然，這些工作需要花費(fèi)較長的時(shí)間，但對(duì)動(dòng)物、人員和實(shí)驗(yàn)都有好處。例如，訓(xùn)練猴配合肌肉注射麻醉劑的操作，可以避免使用固定板強(qiáng)制固定，減少動(dòng)物對(duì)工作人員的對(duì)抗，降低工作人員和動(dòng)物因?qū)乖斐墒軅膸茁省?/p>

在進(jìn)行采血、腦脊液采集、骨髓采集、活體組織穿刺、外科手術(shù)等操作時(shí)，應(yīng)采取合適的鎮(zhèn)靜和鎮(zhèn)痛措施降低動(dòng)物的痛苦。在實(shí)驗(yàn)操作之前可以使用麻醉劑，常用的麻醉劑有氯胺酮、舒泰等。對(duì)呼吸系統(tǒng)感染的動(dòng)物進(jìn)行麻醉時(shí)，注射阿托品可以減少呼吸道分泌物的產(chǎn)生和維持正常的心率，特別是已經(jīng)有呼吸道疾病癥狀的動(dòng)物，可以減輕動(dòng)物的痛苦。

在感染性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中， 所使用的注射器、采血針、手術(shù)刀、剪刀、活檢器材等都必須經(jīng)過滅菌處理，避免對(duì)動(dòng)物造成不必要的感染。不同動(dòng)物的器械也不能混用， 以免動(dòng)物之間交叉感染。所有使用過的器械必須經(jīng)過消毒滅菌后再進(jìn)行清洗。

在感染性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，良好、規(guī)范的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作，不僅可以減輕動(dòng)物的痛苦，保證動(dòng)物福利，對(duì)于保障人員安全和保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性也是非常有益。

4.2 動(dòng)物疾病的監(jiān)控

感染性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中通常會(huì)使用某種病原微生物感染動(dòng)物導(dǎo)致動(dòng)物發(fā)病，因此，在實(shí)驗(yàn)過程中，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行疾病監(jiān)控是十分必要的。對(duì)于慢性感染性實(shí)驗(yàn)，如結(jié)核病、艾滋病實(shí)驗(yàn)，除每日的臨床觀察外，通常至少每個(gè)月必須對(duì)動(dòng)物身體狀況監(jiān)測(cè)一次，包括測(cè)量動(dòng)物的體質(zhì)量、體溫、檢測(cè)其血液常規(guī)、血液生化指標(biāo)等。根據(jù)不同的病原微生物，還可以進(jìn)行影像學(xué)、病毒學(xué)、免疫學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)。對(duì)于急性感染實(shí)驗(yàn)，如流感實(shí)驗(yàn)，健康監(jiān)測(cè)的頻率應(yīng)更高，每兩周甚至每周都需要對(duì)動(dòng)物進(jìn)行監(jiān)測(cè)，及時(shí)了解動(dòng)物的健康狀況。一旦動(dòng)物發(fā)生臨床疾病癥狀，監(jiān)測(cè)的頻率應(yīng)增加，特別是在疾病的晚期，除了實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)方法，飼養(yǎng)人員和獸醫(yī)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)動(dòng)物的日常觀察，及時(shí)記錄動(dòng)物的各種癥狀，以便采取及時(shí)的臨床處置。在不同的感染性實(shí)驗(yàn)中，動(dòng)物往往會(huì)表現(xiàn)不同的臨床癥狀，例如在結(jié)核病感染實(shí)驗(yàn)中，非人靈長類動(dòng)物（猴）會(huì)有咳嗽、厭食、消瘦、呼吸困難、嗜睡等癥狀；而艾滋病感染實(shí)驗(yàn)中，動(dòng)物可能會(huì)有腹瀉、腫瘤、運(yùn)動(dòng)失調(diào)等癥狀。在動(dòng)物出現(xiàn)疾病癥狀時(shí)，獸醫(yī)應(yīng)與項(xiàng)目負(fù)責(zé)人密切協(xié)商和配合，能及時(shí)采取臨床措施，緩解動(dòng)物的痛苦，保證動(dòng)物福利的同時(shí)兼顧實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。

如果出現(xiàn)非實(shí)驗(yàn)因素引起的疾病，例如腹瀉、外傷等，動(dòng)物飼養(yǎng)人員觀察后應(yīng)及時(shí)記錄并報(bào)告獸醫(yī)，獸醫(yī)人員應(yīng)采取及時(shí)治療措施，來減少動(dòng)物的病痛和對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響。

動(dòng)物的疾病監(jiān)控需要工作人員具有豐富的知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)，采取及時(shí)有效的措施來處置。良好的疾病監(jiān)控措施，是保證動(dòng)物福利的重要條件。

4.3 實(shí)驗(yàn)操作結(jié)束后和術(shù)后的護(hù)理

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將未蘇醒的動(dòng)物側(cè)臥放在溫暖的地方，隨時(shí)觀察動(dòng)物呼吸頻率，確保動(dòng)物沒有嘔吐，待動(dòng)物蘇醒或無異常后，人員再離開［8］。采過血或有較大創(chuàng)口的動(dòng)物，應(yīng)密切注意傷口是否流血，縫合處是否完好，如果有血液污染籠具，應(yīng)及時(shí)消毒處理，降低血液中的感染因子在環(huán)境中的暴露量。經(jīng)過大手術(shù)的動(dòng)物，術(shù)后應(yīng)給予鎮(zhèn)痛藥，同時(shí)， 在術(shù)后一周內(nèi)應(yīng)每日觀察傷口情況，確定傷口沒有發(fā)生縫合線斷裂和感染，必要時(shí)需要每日清理傷口或進(jìn)行抗生素治療，以防發(fā)生感染。在術(shù)后一周左右及時(shí)拆線，以便傷口迅速愈合。

4.4 仁慈終點(diǎn)與施行安死術(shù)

在感染性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，動(dòng)物疾病的進(jìn)展有時(shí)可能不完全符合實(shí)驗(yàn)計(jì)劃，因此，在制定實(shí)驗(yàn)計(jì)劃時(shí)，應(yīng)充分考慮動(dòng)物疾病的進(jìn)展的各種可能性，制定詳細(xì)的仁慈終點(diǎn)和安死術(shù)方案。

當(dāng)動(dòng)物發(fā)生疾病癥狀時(shí)，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)動(dòng)物的觀察，每日觀察2～3次，必要時(shí)可以增加觀察次數(shù)。若出現(xiàn)令動(dòng)物極度痛苦的癥狀，應(yīng)及時(shí)對(duì)其實(shí)施安死術(shù)。在非人靈長類動(dòng)物感染性實(shí)驗(yàn)中，適于安死術(shù)的基本標(biāo)準(zhǔn)包括： 體質(zhì)量嚴(yán)重下降（3周內(nèi)體質(zhì)量下降超過20%）； 體溫嚴(yán)重下降； 嚴(yán)重的嗜睡或昏迷；嚴(yán)重的呼吸困難； 咳血； 持續(xù)性腹瀉導(dǎo)致代謝紊亂；行為失調(diào)導(dǎo)致無法進(jìn)食等。一旦出現(xiàn)上述癥狀，如不采取措施，動(dòng)物往往會(huì)在極度痛苦中于數(shù)日甚至數(shù)小時(shí)之內(nèi)死亡。因此，動(dòng)物若出現(xiàn)上述癥狀，應(yīng)及時(shí)對(duì)其實(shí)施安死術(shù)，以避免動(dòng)物遭受更多不必要的痛苦，在動(dòng)物存活時(shí)可以獲得新鮮的樣本，有利于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的收集。

非人靈長類動(dòng)物首選的安死術(shù)方法為靜脈注射過量戊巴比妥鈉溶液（100 mg/kg體質(zhì)量）?？諝馑ㄈ〞?huì)造成動(dòng)物在死亡之前劇烈掙扎，并且死亡后的動(dòng)物各臟器淤血明顯，不利于病理學(xué)診斷，因此無論從動(dòng)物福利的角度還是從保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性的角度均不推薦使用［9］。實(shí)施安死術(shù)的人員應(yīng)經(jīng)過良好培訓(xùn)，保證能以最人道和最仁慈的方法實(shí)施安死術(shù)。動(dòng)物死亡后，尸體先通過高壓滅菌，然后送至專業(yè)的醫(yī)療廢棄物公司進(jìn)行處理，不可用于其它任何用途。

5 總結(jié)

感染性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中非人靈長類動(dòng)物（猴）的福利問題具有一定的特殊性、復(fù)雜性和多樣性，有些問題作者可能還沒有考慮到?？傊?，在感染性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，不僅要考慮人員和環(huán)境的生物安全問題，還應(yīng)該重點(diǎn)考慮動(dòng)物的福利問題。保證了動(dòng)物的福利，不論對(duì)于動(dòng)物倫理，還是對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果和生物安全都具有非常重要的積極意義。

［1］ 秦川.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)［M］ 北京： 人民衛(wèi)生出版社， 2010：154-155.

［2］ 中華人民共和國科技部.關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見［Z］.2006.

［3］ 賀爭鳴， 李根平， 李冠民， 等.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)科學(xué)［M］.北京： 科學(xué)出版社， 2011：85-86.

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湖北省科技廳科技支撐計(jì)劃（條件領(lǐng)域）資助項(xiàng)目《湖北省感染性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心建設(shè)》（2015BCE084）

鮮巧陽（1980-）， 男， 實(shí)驗(yàn)師， 獸醫(yī)碩士， 研究方向： 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物醫(yī)學(xué)/實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利/生物安全。E-mail： xianqy@whu.edu.cn

李湘東（1969-）， 女， 碩士， 講師， 研究方向： 生物安

全管理/實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利。E-mail： xdli@whu.edu.cn