方玲玲，陳　剛,2,3，王忠良,2,3，湯保貴,2,3，張健東，黃建盛，周　暉（.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院 //2.廣東省普通高校 南海水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 //3.廣東省水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物病原生物學(xué)及流行病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東　湛江 524088）

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非諾貝特對(duì)卵形鯧鲹P(yáng)PAR α及CPTI基因表達(dá)的影響

方玲玲1，陳剛1,2,3，王忠良1,2,3，湯保貴1,2,3，
張健東1，黃建盛1，周暉1
（1.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院 //2.廣東省普通高校 南海水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 //3.廣東省水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物病原生物學(xué)及流行病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東湛江 524088）

摘要：對(duì)卵形鯧鲹（Trachinotus ovatus）腹腔注射20、50、100 mg/kg的激動(dòng)劑非諾貝特，用RT-PCR檢測(cè)肝臟、肌肉中PPAR α和CPTI基因表達(dá)的變化趨勢(shì)，研究激動(dòng)劑對(duì)卵形鯧鲹P(yáng)PAR α和CPTI基因表達(dá)的影響。結(jié)果表明，PPAR α基因表達(dá)量50 mg/kg非諾貝特組高于其他組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05），而CPTI表達(dá)量在20 mg/kg組有較高的表達(dá)水平（P ＜ 0.05）；50 mg/kg非諾貝特組中PPAR α基因表達(dá)量隨著時(shí)間的變化呈現(xiàn)先降低后恢復(fù)至初始水平的趨勢(shì)，CPTI表達(dá)量隨時(shí)間變化先升高后降低，隨后又升高的變化趨勢(shì)，肝臟組織中，CPTI表達(dá)量在注射后30 h達(dá)到最高（P ＜ 0.05），而在肌肉組織中18 h時(shí)達(dá)到最高值（P ＜ 0.05）；非諾貝特組PPAR α和CPTI基因的表達(dá)量均高于PBS對(duì)照組（P ＜ 0.05）。非諾貝特可誘導(dǎo)PPAR α基因的表達(dá)，但CPTI與PPAR α基因表達(dá)無(wú)較明顯的相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：卵形鯧鲹；基因表達(dá)； PPAR α；CPTI；非諾貝特；RT-PCR分析

過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體（Peroxisome proliferator activated receptors,PPAR s）是配體激活的核轉(zhuǎn)錄因子，有PPAR α、PPAR β及PPAR γ 3種亞型，其中PPAR α調(diào)控生物體的脂肪代謝，尤其對(duì)參與脂肪酸β氧化的多種酶類基因表達(dá)具有調(diào)控作用[1-2]。PPAR α具有棕櫚酸、油酸、花生四烯酸類代謝產(chǎn)物白三烯和前列腺素類等天然配體，以及氯貝特(Clofibrate)、非諾貝特(Fenofibrate)、WYl4643等人工化合物配體，這些配體作為激動(dòng)劑可激活PPAR α進(jìn)而調(diào)控與其相關(guān)基因的表達(dá)[3-4]。近年來(lái)，已有哺乳類[5-6]、鳥(niǎo)類[7-8]、魚(yú)類[9-10]PPAR α的研究，PPAR α配體相關(guān)研究也主要用于有關(guān)PPAR α疾病藥物的開(kāi)發(fā)[11-12]。貝特類藥物是從氯貝丁酯衍生出來(lái)的一組化合物，可降低肝臟極低密度脂蛋白(VLDL)分泌，加強(qiáng)清除血漿甘油三酯（TG）[13-14]。祝慶[12]研究發(fā)現(xiàn)，非諾貝特可上調(diào)大鼠動(dòng)脈壁組織中PPAR α表達(dá)水平，有效降低血脂水平，牛透明等[15]也證實(shí)了非諾貝特的降脂作用，可能誘導(dǎo)wister 大鼠脂蛋白脂酶（Lipoprteinlipase,LPL）活性升高和PPAR α基因表達(dá)，但鮮見(jiàn)魚(yú)類方面的相關(guān)研究。筆者以卵形鯧鲹（Trachinotus ovatus）為研究對(duì)象，腹腔注射微量非諾貝特，觀察不同藥物劑量下PPAR α及其調(diào)控的目的基因CPTI表達(dá)的變化趨勢(shì)，探討非諾貝特對(duì)二基因表達(dá)的影響以及PPAR α與CPTI表達(dá)的相關(guān)性，旨在探尋一種避免魚(yú)類脂肪過(guò)度蓄積的誘導(dǎo)劑，為魚(yú)類肉質(zhì)形成等分子機(jī)制的深入研究提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

健康卵形鯧鲹取自廣東海洋大學(xué)海洋生物研究基地，120尾，體質(zhì)量（30 ± 1.0）g；非諾貝特（力平之），法利博福尼制藥公司；Trizol試劑、EasyScript反轉(zhuǎn)錄試劑盒、TransStart熒光定量試劑盒，北京全式金生物有限公司；ABI7500熒光定量PCR儀，美國(guó)ABI公司；引物由生工生物（上海）有限公司合成。

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)分組及樣品采集取卵形鯧鲹40尾隨機(jī)分為4組，每組魚(yú)10尾，參照文獻(xiàn)[4,11-12，15-16]中的非諾貝特劑量，每尾卵形鯧鲹分別腹腔注射20、50、100 mg/kg的非諾貝特以及PBS緩沖液（對(duì)照組）200 μL，于注射后12、24 h取樣，各濃度組每次取魚(yú)5尾冷凍麻醉處死，快速分離肝臟和肌肉組織，于液氮中速凍后，轉(zhuǎn)入- 80 ℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

另外，取卵形鯧鲹80尾，隨機(jī)分為2組，實(shí)驗(yàn)組每尾魚(yú)腹腔注射濃度為50 mg/kg的非諾貝特200 μL，對(duì)照組注射同劑量的PBS緩沖液。分別在注射后6、12、18、24、30、36、42、48 h取樣，兩組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別取5尾魚(yú)的肝臟和肌肉組織于-80℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2總RNA的提取及cDNA第一鏈的合成取- 80 ℃保存的各組織約100 mg，按照UNlQ-10柱式Trizol總RNA抽提試劑盒中推薦的方法提取、純化總RNA。按照EasyScript反轉(zhuǎn)錄試劑盒推薦的體系，以O(shè)ligo(dT)18為引物，按照42 ℃ 1 h、85 ℃ 5 min的步驟來(lái)合成cDNA第一鏈。

1.2.3實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析根據(jù)卵形鯧鲹P(yáng)PAR α cDNA序列（GenBank登錄號(hào)KP893147）和CPTI基因cDNA序列（GenBank登錄號(hào)KP987456）設(shè)計(jì)特異性引物PPAR α（A）和PPARα（S），CPTI（A）和CPTI（S），以卵形鯧鲹β-actin為內(nèi)參基因，設(shè)計(jì)引物β-actin(A)、β-actin（S）（表1）。實(shí)驗(yàn)操作按照TransStart Tip Green qPCR試劑盒的使用方法，在ABI7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)。每個(gè)樣品均設(shè)3個(gè)復(fù)孔，進(jìn)行3組平行反應(yīng)。PPAR α反應(yīng)條件：94 ℃ 5 min；94 ℃ 20 s，52.5 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，40個(gè)循環(huán)；72 ℃ 5 min。CPTI反應(yīng)條件：94 ℃ 5 min；94 ℃ 20 s，51 ℃ 30 s，72 ℃30 s，40個(gè)循環(huán)；72 ℃ 5 min。通過(guò)與β-actin基因的比較，運(yùn)用ΔΔCT方法計(jì)算卵形鯧鲹肝臟、肌肉組織中PPAR α和CPTI基因的相對(duì)表達(dá)量2-ΔΔCT，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS19.0進(jìn)行單因素顯著性分析和Duncan多重性比較。

表1　引物序列Table 1　Primer Sequences

2　結(jié)果與分析

2.1總RNA質(zhì)量檢測(cè)

提取的總RNA樣品經(jīng)10 mg/mL瓊脂糖凝膠電泳顯示清晰的28S和18S rRNA條帶（圖1），微量核酸定量?jī)x測(cè)定其D（260 nm）/D（280 nm）值在1.8～2.0之間，說(shuō)明提取的總RNA完整性良好，可以用于下一步實(shí)驗(yàn)。

圖1　肝臟與肌肉的總RNAFig.1　Total RNA from liver and muscle

2.2非諾貝特濃度組PPAR α和CPTI的基因表達(dá)

在肝臟組織中（圖2），PPAR α表達(dá)量與注射后12 h相比，24 h時(shí)20、50 mg/kg組升高，50 mg/kg組變化最大。100 mg/kg組表達(dá)量各時(shí)間點(diǎn)均較高，明顯高于PBS對(duì)照組（P ＜ 0.05），50 mg/kg組則僅24 h時(shí)高與PBS組。而CPTI表達(dá)量各非諾貝特組12 h時(shí)均低于24 h，而對(duì)照組則相反；20 mg/kg組12 h時(shí)表達(dá)量明顯遠(yuǎn)高于其他各組（P ＜ 0.05），至24 h時(shí)各組表達(dá)量均低于PBS對(duì)照組（P ＜ 0.05）。

圖2 不同藥物濃度下肝臟PPAR α和CPTI基因表達(dá)量Fig.2　Relative expression analysis of PPAR α and CPTI gene in liver with different concentrations of fenofibrate solution

在肌肉組織中，不同非諾貝特濃度下卵形鯧鲹P(yáng)PAR α和CPTI基因的相對(duì)表達(dá)量不同。圖3表明，PPAR α表達(dá)量由高到低依次總體上是50 mg/kg、PBS、20 mg/kg、100 mg/kg組。24 h時(shí)20、50 mg/kg組表達(dá)量相對(duì)于12 h時(shí)升高。50 mg/kg與100 mg/kg組間表達(dá)差異各時(shí)間點(diǎn)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）。CPTI基因在20 mg/kg的濃度下相對(duì)表達(dá)量最高（P ＜ 0.05），50 mg/kg組次之，100 mg/kg與PBS組相當(dāng)（P ＞ 0.05）。24 h 時(shí)20、50 mg/kg組表達(dá)量相對(duì)于12 h時(shí)降低。

圖3 不同藥物濃度下肌肉PPAR α和CPTI基因表達(dá)量Fig.3　The relative expression analysis of PPAR α and CPTI gene in muscle with different concentrations of fenofibrate solution

2.3不同時(shí)間PPAR α和CPTI的基因表達(dá)

肝臟組織PPAR α和CPTI表達(dá)量見(jiàn)圖4。圖4可見(jiàn)，非諾貝特組PPAR α表達(dá)量隨時(shí)間大體上呈先緩慢降低再恢復(fù)至初始水平的趨勢(shì)（12 h時(shí)表達(dá)量明顯降低，可能是由RNA提取、反轉(zhuǎn)錄或者實(shí)時(shí)熒光定量操作過(guò)程時(shí)的失誤導(dǎo)致了RNA降解或其他原因所致），各時(shí)間點(diǎn)均高于PBS對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明50 mg/kg非諾貝特可有效促進(jìn)PPAR α的表達(dá)。同樣，CPTI表達(dá)量各組亦有差別，非諾貝特組CPTI表達(dá)量在0～12 h內(nèi)升高，12～24 h內(nèi)降低，隨后快速升高，在注射后30 h達(dá)到最高（P ＜ 0.05），然后呈緩慢下降趨勢(shì)（圖4）。除24 h外，各時(shí)間點(diǎn)50 mg/kg組的CPTI表達(dá)量均高于PBS對(duì)照組（P ＜ 0.05），表明非諾貝特可有效促進(jìn)CPTI基因的表達(dá)。

圖4　50 mg/kg非諾貝特對(duì)卵形鯧鲹肝臟中PPAR α 和CPTI基因相對(duì)表達(dá)量的影響Fig.4　Relative expression analysis of PPAR α and CPTI gene in livers with 50 mg/kg fenofibrate solution

肌肉組織PPAR α和CPTI表達(dá)量見(jiàn)圖5。圖5可見(jiàn)，非諾貝特組PPAR α表達(dá)量隨時(shí)間變化先降低后升高（圖5），各時(shí)間點(diǎn)均明顯高于PBS對(duì)照組（P ＜ 0.05）；而CPTI則隨時(shí)間變化先升高，18 h時(shí)達(dá)到最大值，后又降低，各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量均明顯高于PBS對(duì)照組（P ＜ 0.05）（圖5）。因此，50 mg/kg的非諾貝特可有效促進(jìn)肌肉中PPAR α和CPTI基因的表達(dá)。

圖5　50 mg/kg非諾貝特對(duì)卵形鯧鲹肌肉中PPAR α 和CPTI 基因的相對(duì)表達(dá)量的影響Fig.5　The relative expression analysis of PPAR α and CPTI gene in muscles with 50 mg/kg fenofibrate solution

3　討 論

PPAR α是核受體超家族的一員，具有多種生物學(xué)效應(yīng)，可通過(guò)調(diào)控脂肪酸氧化過(guò)程中脂蛋白脂酶（LPL）、肉堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶I、II（CPTI、CPTII）、脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（FATP-1）等[13-14,17]酶類來(lái)調(diào)節(jié)脂肪酸代謝，進(jìn)而調(diào)節(jié)機(jī)體血脂含量[18-19]。PPAR α與其配體相互作用調(diào)節(jié)目的基因的表達(dá)主要通過(guò)以下環(huán)節(jié)進(jìn)行：首先，PPAR α與飽和/不飽和脂肪酸及其衍生物等天然配體或者貝特類（Fibrate）和噻唑烷二酮類（TZDs）等人工合成配體結(jié)合，激活PPAR α，并與9-順式視黃醇X受體（RXR）結(jié)合形成異質(zhì)二聚體，接著與目的基因的啟動(dòng)區(qū)的PPAR特異性反應(yīng)元件（peroxisome proliferator responsive element，PPRE）結(jié)合，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用[16,20-23]。非諾貝特是PPAR α的人工合成配體之一，是化學(xué)合成的苯氧酸衍生物類藥物，早已獲美國(guó)批準(zhǔn)，并被廣泛用于臨床降血脂，其安全性已得到大量臨床數(shù)據(jù)支持，研究發(fā)現(xiàn)其降血脂的作用主要是通過(guò)PPAR α來(lái)調(diào)控脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)[24]來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本研究以卵形鯧鲹為研究對(duì)象，以非諾貝特為PPAR α配體來(lái)誘導(dǎo)PPAR α表達(dá)，通過(guò)觀察PPAR α和CPTI基因的相對(duì)表達(dá)量，尋找一種可以誘導(dǎo)食物中的脂質(zhì)轉(zhuǎn)化為能量，避免魚(yú)類脂肪過(guò)度沉淀蓄積的誘導(dǎo)劑[16]。結(jié)果表明，50 mg/kg的非諾貝特對(duì)卵形鯧鲹肌肉組織的PPAR α基因誘導(dǎo)作用顯著，在肝臟組織中，100 mg/kg組誘導(dǎo)作用亦較佳。PPAR α的相對(duì)表達(dá)量隨時(shí)間先降低后恢復(fù)至初始水平，提示非諾貝特對(duì)PPAR α的誘導(dǎo)作用可能是一種反饋調(diào)節(jié)的作用方式。

CPTI是線粒體脂肪酸β氧化的一種“限速酶”，主要調(diào)控長(zhǎng)鏈脂肪酸穿過(guò)線粒體膜進(jìn)行β氧化，是脂質(zhì)轉(zhuǎn)化為能量的關(guān)鍵酶。CPTI基因的啟動(dòng)區(qū)上游存在PPRE應(yīng)答元件，其表達(dá)受PPAR α的調(diào)控[25-26]。本研究中，在非諾貝特劑量為20 mg/kg時(shí)，CPTI的相對(duì)表達(dá)量較高，且在非諾貝特劑量為50 mg/kg時(shí)，隨著時(shí)間的變化，CPTI的相對(duì)表達(dá)量呈先升后降之后又升高的變化趨勢(shì)，在肝臟組織中，CPTI表達(dá)量在注射后30 h達(dá)到最高值，而肌肉組織中的CPTI在注射后18 h有最高表達(dá)量。在適量濃度的非諾貝特作用下，卵形鯧鲹P(yáng)PAR α和CPTI的表達(dá)量總體上均高于PBS對(duì)照組，可認(rèn)為該藥物對(duì)二基因表達(dá)均有上調(diào)作用，但二基因的表達(dá)量之間隨時(shí)間變化卻無(wú)明顯的相關(guān)性，猜測(cè)PPAR α對(duì)CPTI的調(diào)控可能通過(guò)更為復(fù)雜的途徑發(fā)生作用，PPAR α在非諾貝特的誘導(dǎo)下對(duì)CPTI進(jìn)行調(diào)控的具體機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。

4　結(jié)　語(yǔ)

本研究表明，適宜濃度的非諾貝特均可上調(diào)PPAR α和CPTI基因的表達(dá)，PPAR α的表達(dá)隨時(shí)間變化表現(xiàn)出反饋調(diào)節(jié)的作用。CPTI基因的表達(dá)與PPAR α基因表達(dá)間無(wú)明顯的相關(guān)性，或許顯示其基因的表達(dá)是一個(gè)更為復(fù)雜的調(diào)控過(guò)程?？梢?jiàn)，合適濃度的非諾貝特可作為避免魚(yú)類脂肪過(guò)度沉淀蓄積的候選誘導(dǎo)劑，通過(guò)注射作用于魚(yú)體，誘導(dǎo)脂肪代謝相關(guān)基因PPAR α和CPTI的表達(dá)來(lái)調(diào)控脂質(zhì)轉(zhuǎn)化為能量，維持魚(yú)體營(yíng)養(yǎng)代謝平衡，改善魚(yú)肉品質(zhì)。當(dāng)然，尚需進(jìn)行一系列非諾貝特相關(guān)的毒性機(jī)理研究，才有望最終應(yīng)用于養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)中。

參考文獻(xiàn)

[1]MANDRUP S,LANE M D.Regulating adipogenesis[J].Journal of Biological Chemistry,1997,272(9):5367-5370.

[2]胡琴,李隆貴,吳立榮,等.大鼠左室肥厚心肌PPARα信號(hào)通路失活及其意義[J].心肺血管病雜志,2004,23(3):166-169.

[3]勾海燕,朱雨嵐.PPAR激動(dòng)劑治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究進(jìn)展[J].國(guó)際免疫學(xué)雜志.2013,36(2):126-131.

[4]理文琰.非諾貝特對(duì)小鼠心肌能量代謝相關(guān)基因作用的研究[D].鄭州：鄭州大學(xué),2012.

[5]馮秉仁,徐凱,李步高,等.豬PPARα 蛋白的生物信息學(xué)分析[J].當(dāng)代畜牧,2014,29:93-96.

[6]吳佳蓉.PPAR-α 激動(dòng)劑（非諾貝特）對(duì)NAFLD 大鼠肝細(xì)胞凋亡的影響[D].福建：福建醫(yī)科大學(xué),2014.

[7]Luo J B,晉大鵬.鵝過(guò)氧化物酶體增殖劑激活受體(PPAR)基因在脂肪肝形成過(guò)程中的調(diào)控表達(dá)[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2010,37(8):68.

[8]孟和,李輝,王宇祥.雞PPARs 基因組織表達(dá)特性的研究[J].遺傳學(xué)報(bào),2004,31(7):682-687.

[9]賈成霞,張照斌,張清靖,等.虹鱒 PPARα 基因克隆,序列分析及其組織表達(dá)分布[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué),2012,19(4):707-714.

[10]林亞秋,吉紅,鄭玉才.草魚(yú)PPARα 和PPARγ 基因的克隆與組織表達(dá)差異[J].水產(chǎn)科學(xué),2011,30(2):94-97.

[11]王倩,包存剛,余以兵,等.不同劑型非諾貝特對(duì)高血脂大鼠血脂水平的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2003,19(7):833-836.

[12]祝慶.非諾貝特對(duì)大鼠主動(dòng)脈MMP-9 及PPARα 表達(dá)的影響及機(jī)制探討[D].濟(jì)南：山東大學(xué),2006.

[13]ALVAREZ-GUARDIA D,PALOMER X,COLL T,et al.PPARβ/δ activation blocks lipid-induced inflammatory pathways in mouse heart and human cardiac cells [J].Biochimica Et Biophysica Acta.2011,1811(2):59–67.

[14]BERGER J,MOLLER D E.The mechanisms of action of PPARs [J].Annual Review of Medicine,2002,53(1):

409-435.

[15]牛秀明,官波.非諾貝特對(duì)高脂大鼠肝臟PPAR-α基因表達(dá)及血清LPL活性的影響[J].山東醫(yī)藥,2008,48(20):26-27.

[24]陳亮.草魚(yú)PPAR基因的克隆、組成型表達(dá)及與誘導(dǎo)劑作用的研究[D].廣州：暨南大學(xué),2011.

[17]MANDARD S,MüLLER M,KERSTEN S.Peroxisome prolifera- tor-activated receptor a target genes[J].Cellular & Molecular Life Sciences,2004,61(2):393-416.

[18]KERSTEN S,DESVERGNE B,WAHLI W.Roles of PPARs in health and disease[J].Nature,2000,405(6785):421-424.

[19]王婷,崔旭妍,袁海平,等.過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體與脂代謝[J].河南醫(yī)學(xué)研究,2008,17(3):277-279.

[20]MARTIN G,SCHOONJANS K,LEFEBVRE A-M,et al.Coordinate regulation of the expression of the fatty acid transport protein and acyl-CoA synthetase genes by PPARα and PPARγ activators[J].Journal of Biological Chemistry,1997,272(45):28210-28217.

[21]王遠(yuǎn)孝,朱秋鳳,黃進(jìn),等.過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體對(duì)脂肪代謝的調(diào)控[J].畜牧與獸醫(yī),2008,40(7):100-104.

[22]張建英,蔡尚郎.非諾貝特聯(lián)合坎地沙坦治療高血壓合并高甘油三酯血癥療效觀察[J].山東醫(yī)藥,2007,47(35):63-64.

[23]PARK So-Young,CHO You-Ree,FINCK Brian N,et al.Cardiac-specific overexpression of peroxisome proliferator-activated receptor-alpha causes insulin resistance in heart and liver [J].Diabetes,2005,54(9):2514-2524.

[24]PANAGIA M,GIBBONS G F,RADDA G K,et al.PPAR-alpha activation required for decreased glucose uptake and increased susceptibility to injury during ischemia.[J].American Journal of Physiology Heart & Circulatory Physiology,2005,288(6):H2677- H2683.

[25]王鏡巖.生物化學(xué)[M].北京:高等教育出版社,2008:401-411.

[26]方玲玲,王忠良,陳剛,等.卵形鯧鲹肉堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶Ⅰ全長(zhǎng)cDNA序列的克隆及生物信息學(xué)分析[J].廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào),2015,35(3):7-15.

（責(zé)任編輯：劉慶穎）

Effects of Fenofibrate on Relatively Expression of Gene PPAR α and CPTI

FANG Ling-ling1,CHEN Gang1,2,3,WANG Zhong-liang1,2,3,TANG Bao-gui1,2,3,ZHANG Jian-dong1,HUANG Jian-sheng1,ZHOU Hui1
（1.Fisheries College of Guangdong Ocean University //2.Key laboratory of Aquaculture in South China Sea for Aquaculture Economic Animal of Guangdong Higher Education Institutes Laboratory of Fish Aquaculture //3.Guangdong Provincial Key Laboratory of Pathogenic Biology and Epidemiology for Aquatic Economic Animals,Zhanjiang 524088,China）

Abstract:The fenofibrate solution with concentration of 20,50,100 mg/kg were injected into the abdomen of Trachinotus ovatus respectively,and the expression of gene PPAR alpha and CPTI in livers and muscles were analyzed by RT-PCR,and the effects of the agonists on relatively expression of PPAR α and CPTI gene was studied.The result showed that the expression of PPAR α in group 50 mg/kg is significant higher than that in other groups(P ＜ 0.05),and CPTI had higher expression in group 20 mg/kg(P ＜ 0.05).The expression of PPAR α and CPTI gene had no significant difference in PBS group(P ＞ 0.05),but the expression of PPAR α in group 50 mg/kg firstly increased and decreased and then returned to the initial level trend finally as time changed.Meantime,thebook=14,ebook=17expression of CPTI gene fell after rose and then rose at last as the time gone by.The highest expression appeared at 30 h after injection in livers and the highest expression appeared at 18 h in muscles(P ＜ 0.05).The expression of gene PPAR alpha in livers and muscles with fenofibrate solution is higher than that with PBS.In conclusion,the fenofibrate can induce the expression of PPAR α,but the correlation of the expression between PPAR α and CPTI is not obviously.

Key words:Trachinotus ovatus; gene expression; fenofibrate; PPAR α; CPTI; RT-PCR

通信作者：陳剛（1961－），男，教授，研究方向?yàn)轸~(yú)類種子工程與增養(yǎng)殖。E-mail：cheng@gdou.edu.cn

基金項(xiàng)目：國(guó)家海洋公益性行業(yè)科研專項(xiàng)（201205028）；廣東省海洋經(jīng)濟(jì)創(chuàng)新發(fā)展區(qū)域示范專項(xiàng)（GD2012-A01-007，GD2012-A02-003）；廣東省教育廳創(chuàng)新計(jì)劃專項(xiàng)（2012KJCX0063）；廣西科技廳科技計(jì)劃（桂科攻1222013-2）

收稿日期：2015-08-17

doi:10.3969/j.issn.1673-9159.2016.01.003

中圖分類號(hào)：Q786

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1673-9159（2016）01-0013-06

第一作者：方玲玲（1990－），女，碩士研究生，研究方向?yàn)轸~(yú)類種子工程與生物學(xué)。E-mail：1176950041@qq.com