謝 滟， 黃麗貞， 廖敏君， 曾伊姚（廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西南寧530001）

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八角茴香配方顆粒的制備工藝

謝 滟， 黃麗貞*， 廖敏君， 曾伊姚
（廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西南寧530001）

摘要：目的 優(yōu)選八角茴香配方顆粒的制備工藝。方法 以揮發(fā)油包合率和包合物得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，正交試驗(yàn)考察八角茴香β-環(huán)糊精的最佳包合工藝；以莽草酸含有量為指標(biāo)，優(yōu)選去揮發(fā)油八角茴香的水煎煮工藝。結(jié)果 揮發(fā)油最佳包合工藝為揮發(fā)油∶β-CD＝1∶8，β-CD∶水＝1∶6，包合溫度為40℃，攪拌時(shí)間為1.5 h；去揮發(fā)油藥材的水煎煮最佳條件為加水量15倍，提取時(shí)間120 min，提取次數(shù)3次。結(jié)論 該工藝能有效提取利用揮發(fā)油和莽草酸，為八角茴香配方顆粒的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化生產(chǎn)工藝提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：八角茴香；配方顆粒；揮發(fā)油；莽草酸；正交試驗(yàn)

八角茴香為木蘭科八角茴香Illicium verum Hook.f.的干燥成熟果實(shí)，具有溫陽散寒，理氣止痛的功效［1］，作為廣西道地藥材之一，在全省各地均有種植［2-3］?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，八角茴香中含有大量的揮發(fā)油［4-5］，含有量達(dá)10%，主要成分為反式茴香腦［6-8］。除揮發(fā)油外，其水溶性成分之一莽草酸的近年研究較多，為抵抗禽流感藥物達(dá)菲的原料成分［9-11］，而且藥理研究表明，它具有鎮(zhèn)痛作用［12］。

中藥配方顆粒是經(jīng)現(xiàn)代制藥技術(shù)提取、濃縮、分離、干燥、制粒、包裝精制而成的純中藥產(chǎn)品，由于它保證了原中藥飲片的全部特征，同時(shí)又具有不需要煎煮、直接沖服等許多優(yōu)點(diǎn)得以迅速發(fā)展［13-14］。八角茴香飲片多以水煎為傳統(tǒng)用藥方式，其揮發(fā)性成分易損失，影響其療效。本實(shí)驗(yàn)制備八角茴香配方顆粒，首先通過β-環(huán)糊精包合揮發(fā)油，防止其逸散，提高穩(wěn)定性，并以具有鎮(zhèn)痛作用的水溶性成分莽草酸為評(píng)價(jià)指標(biāo)，確定水煎煮工藝，從而優(yōu)選八角茴香配方顆粒的制備工藝。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters2695高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）；賽多利斯BT125D電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）；SB25-12D超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司）；加熱磁力攪拌器（金壇市醫(yī)療儀器廠）；烘干箱（南京實(shí)驗(yàn)儀器廠）。

1.2 試藥 反式茴香腦（純度99%，25 mL，批號(hào)101424586）、莽草酸（純度99%，1 G，批號(hào)1001702635）對(duì)照品（美國(guó)Sigma公司）；β-環(huán)糊精（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號(hào)CNAB035-Q）。無水乙醇為分析純；甲醇為色譜純；實(shí)驗(yàn)用水為娃哈哈蒸餾水。

八角茴香購(gòu)自廣西省南寧市上林縣，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)梁子寧教授鑒定為為木蘭科八角茴香Illicium verum Hook.f.的干燥成熟果實(shí)。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油的提取 稱取八角茴香藥材（粉碎后過三號(hào)篩）150 g，加入10倍量水，水蒸氣蒸餾法連續(xù)提取6 h，無水硫酸鈉脫水，即得。

2.2 正交試驗(yàn)優(yōu)選揮發(fā)油β-環(huán)糊精（β-CD）包合工藝

稱取一定量β-CD，加入適量的蒸餾水，置于加熱磁力攪拌器上恒溫水浴攪拌，同時(shí)緩緩滴加八角茴香揮發(fā)油，設(shè)定一定的攪拌時(shí)間。攪拌結(jié)束后，將包合物混懸液冷卻至室溫，置于冰箱中冷藏24 h，抽濾，濾餅用少量水和石油醚多次洗滌，棄去濾液，沉淀減壓干燥，稱重計(jì)算包合物得率。精密稱取揮發(fā)油β-CD包合物，置于圓底燒瓶中，加入100 mL水，按《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄XD揮發(fā)油測(cè)定法項(xiàng)下甲法，煮沸4 h至油量不再增加，讀取揮發(fā)油回收量，計(jì)算揮發(fā)油包合率。

選擇揮發(fā)油與β-環(huán)糊精投料比、β-環(huán)糊精與水配比、包合溫度、包合時(shí)間4個(gè)因素，每個(gè)因素選取3個(gè)水平，以揮發(fā)油包合率和包合物得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用L9（34）正交表安排試驗(yàn)，設(shè)計(jì)方案見表1，試驗(yàn)結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3和表4。

表1 因素和水平

表2 揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 揮發(fā)油包合率方差分析結(jié)果

表4 包合物得率方差分析結(jié)果

由表2的直觀分析可知，以揮發(fā)油包合率為評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)，各影響因素的順序依次為A＞B＞C＝D，最佳包合條件為A2B3C1D2，其中A因素，即揮發(fā)油與環(huán)糊精投料比，對(duì)揮發(fā)油包合率有顯著影響（表3）；以包合物得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)，各影響因素的順序依次為D＞B＞C＞A，最佳包合條件為A2B3C1D2，方差分析結(jié)果表明均無顯著影響因素（表4）。最終確定，最佳包合工藝為A2B3C1D2，即揮發(fā)油∶β-CD為1∶8，β-CD∶水為1∶6，包合溫度為40℃，攪拌時(shí)間為1.5 h。

2.3 去揮發(fā)油的八角茴香水提工藝 由于八角茴香的水溶性成分莽草酸具有鎮(zhèn)痛作用，故以浸膏量、莽草酸為測(cè)定指標(biāo)，考察去揮發(fā)油的八角茴香水液煎煮方法。

2.3.1 莽草酸的HPLC測(cè)定方法

2.3.1.1 色譜條件 Synergi Hydro-IP80A C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，4 μm）；流動(dòng)相0.1%磷酸-水溶液；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量2 μL；體積流量1.0 m L/min。莽草酸對(duì)照品和供試品HPLC圖譜見圖1。

圖1 莽草酸HPLC色譜圖

2.3.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取莽草酸對(duì)照品適量，甲醇配成0.826 0 mg/mL的溶液。精密吸取適量，稀釋成0.082 6、0.165 2、0.330 4、0.495 8、0.660 8 mg/mL的溶液，即得。

2.3.1.3 供試品溶液的制備 精密稱取八角茴香150 g，加入適量水提取后抽濾，濾液濃縮噴霧干燥。精密稱取干燥粉末0.2 g，加入甲醇50 mL，超聲提取90 min，濾液置于100 mL量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.1.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取上述各質(zhì)量濃度對(duì)照品溶液2 μL，在“2.3.1.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，記錄峰面積，以對(duì)照品溶液峰面積為縱坐標(biāo)（Y），對(duì)照品質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程Y＝7×106X-37 724（R2＝0.999 6），表明莽草酸在0.082 6～0.826 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.1.5 精密度考察 精密吸取上述供試品溶液2 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果，ISD為1.50%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.3.1.6 穩(wěn)定性考察 精密吸取上述供試品溶液2 μL，分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，在“2.3.1.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定。結(jié)果，ISD為1.60%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.1.7 重復(fù)性考察 取同一方法提取的干燥粉末6份，按“2.3.1.3”項(xiàng)下方法操作，在“2.3.1.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定。結(jié)果，ISD為1.97%，表明該方法重復(fù)性良好。2.3.1.8 加樣回收率考察 精密稱定含有量已知的粉末0.1 g，平行6份，分別精密加入適量莽草酸，按“2.3.1.3”項(xiàng)下方法操作，在“2.3.1.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定。結(jié)果，莽草酸平均加樣回收率為99.55%，ISD 為1.89%。

2.3.2 工藝與結(jié)果 選擇加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)3個(gè)因素，每個(gè)因素3個(gè)水平，以莽草酸含有量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，L9（34）正交表安排試驗(yàn)，設(shè)計(jì)見表5，試驗(yàn)結(jié)果見表6，方差分析見表7和表8。

表5 因素和水平

表6 正交試驗(yàn)結(jié)果

表7 浸膏得率方差分析結(jié)果

表8 莽草酸含有量方差分析結(jié)果

根據(jù)表6的直觀分析可知，以浸膏得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)，各影響因素的順序依次為C＞B＞A，最佳包合條件為A2B3C3，其中C因素，即提取次數(shù)，對(duì)浸膏得率有非常顯著的影響（表7）；以莽草酸含有量為評(píng)價(jià)指標(biāo)時(shí)，各影響因素的順序依次為C＞B＞A，最佳包合條件為A2B3C3，其中C因素，即提取次數(shù)，對(duì)浸膏得率有非常顯著的影響（表8）。由此可知，最佳包合工藝為A2B3C3，但是B因素，即提取時(shí)間120 min與150 min差別不大，從節(jié)約能源成本的角度考慮，最終確定提取工藝為A2B2C3，即加水量為15倍，提取時(shí)間為120 min，提取次數(shù)為3次。2.3.3 驗(yàn)證工藝 稱取八角茴香飲片150 g，根據(jù)確定的提取工藝A2B2C3，試驗(yàn)3次，結(jié)果見表9。由表可知，該工藝重復(fù)性好，具備可行性。

表9 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

2.4 八角茴香配方顆粒制備工藝驗(yàn)證 稱取八角茴香飲片150 g，各3份，加10倍量水，水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油，提取時(shí)間為6 h，收集揮發(fā)油，備用。殘?jiān)^濾，收集濾液，備用。殘?jiān)?5倍量水煎煮3次，每次2 h，合并煎液，過濾，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.05～1.15（80℃），噴霧干燥。將提得的揮發(fā)油按揮發(fā)油∶環(huán)糊精∶水為1 mL∶8 g∶48倍量的比例混合攪拌1.5 h，然后靜置冷藏24 h，濾過，減壓干燥，制成包合物。將藥材提取物、揮發(fā)油包合物和糊精混合均勻，干法制粒。結(jié)果見表10。

表10 八角茴香配方顆粒制備工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

3 討論

預(yù)試驗(yàn)對(duì)八角茴香揮發(fā)油的提取進(jìn)行單因素考察，發(fā)現(xiàn)提取時(shí)間、加水量對(duì)揮發(fā)油提取有影響，而浸泡時(shí)間無影響。因此，單因素試驗(yàn)確定揮發(fā)油的提取工藝為提取時(shí)間6 h，加水量10倍。

本試驗(yàn)首次確立了八角茴香配方顆粒提取工藝的一系列參數(shù)，通過正交試驗(yàn)，最終確定揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合工藝和去揮發(fā)油藥材的水煎煮工藝。

揮發(fā)油為八角茴香的主要活性成分，現(xiàn)代研究方面，其水溶性成分莽草酸具有鎮(zhèn)痛作用。本實(shí)驗(yàn)有效提取利用了揮發(fā)油和莽草酸，將八角茴香飲片制成配方顆粒，既保證其療效，又是對(duì)其飲片劑型的發(fā)展和補(bǔ)充。

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*通信作者：黃麗貞（1982—），女，碩士，實(shí)驗(yàn)師，從事中藥藥效研究。Te1：（0771）3137585，E-mai1：88011457@qq.com

作者簡(jiǎn)介：謝 滟（1984—），女，碩士，講師，從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。Te1：（0771）4928385，E-mai1：1733013057@qq.com

基金項(xiàng)目：國(guó)家科技支撐計(jì)劃（2011BAI01B04）；廣西中藥藥效研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)（14-045-12）

收稿日期：2015-05-14

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.03.049

中圖分類號(hào)：I944

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：1001-1528（2016）03-0695-04