亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        超濾法和HPLC法測定14-去氧穿心蓮內酯的血漿蛋白結合率

        2016-04-06 01:24:04張二鋒趙軍利孫瑞潔河南大學藥物研究所河南開封475004
        中成藥 2016年3期
        關鍵詞:穿心蓮法測定內酯

        張二鋒, 趙軍利, 楊 靜, 孫瑞潔, 韓 光(河南大學藥物研究所,河南開封475004)

        ?

        超濾法和HPLC法測定14-去氧穿心蓮內酯的血漿蛋白結合率

        張二鋒, 趙軍利, 楊 靜, 孫瑞潔, 韓 光*
        (河南大學藥物研究所,河南開封475004)

        摘要:目的 測定14-去氧穿心蓮內酯在大鼠與人血漿中的蛋白結合率。方法 超濾法和HPLC法測定14-去氧穿心蓮內酯在大鼠與人血漿中的血漿蛋白結合率。結果 14-去氧穿心蓮內酯與大鼠和人血漿中的平均血漿蛋白結合率分別為(93.88±2.16)和(95.55±0.83)%。結論 14-去氧穿心蓮內酯與大鼠和人血漿蛋白均具有很強的結合能力,而且無明顯的濃度依賴性。

        關鍵詞:14-去氧穿心蓮內酯;血漿蛋白;結合率;超濾;HPLC

        穿心蓮為爵床科穿心蓮屬植物穿心蓮Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees的干燥地上部分,《中國藥典》2010版一部記載,其性寒,味苦,歸心、肺、大腸、膀胱經,具有清熱解毒,涼血消腫功效[1],其有效成分為穿心蓮內酯、14-去氧穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯和新穿心蓮內酯等二萜內酯類化合物?,F代藥理研究表明,14-去氧穿心蓮內酯具有抗炎、抗癌、抗鉤端螺旋體病、治療酒精肝、抗菌等作用[2-10]。吳陽等[11]發(fā)現,脫水穿心蓮內酯與牛血清白蛋白、正常人血漿、大鼠血漿的血漿蛋白結合率分別為(71.50±1.50)%、(79.91±2.51)%、(82.41± 2.05)%,屬于中等強度的結合,但目前尚無關于14-去氧穿心蓮內酯與血漿蛋白結合率的研究報道。藥物血漿蛋白結合率可直接影響藥物在體內的吸收、分布、代謝與排泄,從而影響其作用強度與時間,是藥代動力學、分子藥理學等學科研究的重要課題之一[12]。本實驗采用超濾法和HPLC法測定14-去氧穿心蓮內酯與大鼠和人血漿的血漿蛋白結合率,為該成分的臨床合理應用與相關新藥研發(fā)提供可靠的依據。

        1 儀器與材料

        1.1 儀器 島津LC-20AT HPLC色譜儀,包括CLASS-VP色譜工作站、紫外檢測器(日本島津公司);精密移液器(大龍興創(chuàng)實驗儀器北京有限公司);KQ-300VDE雙頻數控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);NanosepI10KDa超濾管(美國Pa11公司);TGL-16G高速離心機(上海安亭科學儀器廠);MaxiMix P1us漩渦混合器(美國Thermo Fisher Scientific公司)。

        1.2 藥品與試劑 14-去氧穿心蓮內酯對照品(自制,結構經各波譜手段確認和HPLC法測定,按面積歸一化法計算,純度在99.5%以上);14-去氧穿心蓮內酯樣品(自制,純度在98.0%以上);肝素鈉(江蘇萬邦生化醫(yī)藥股份有限公司,批號1307132);正常人血漿(開封市中心血站)。乙腈為色譜純(天津市四友精細化學品有限公司);水為娃哈哈純凈水;其他試劑均為分析純。

        1.3 動物 SD大鼠,雄性,體質量(200±20)g(河南省實驗動物中心,合格證號SCXK[豫]2010-0002)。取健康SD大鼠5只,乙醚麻醉,75%酒精消毒,摘除眼球取血,置于肝素化的EP管中,4 000 r/min離心15 min,然后將上清液(血漿)轉移到另一EP管中,保存于4℃冰箱中,備用。

        2 方法與結果

        2.1 色譜條件 ST Pak C18-ES色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),包括預柱(50 mm×4.6 mm,北京迪馬科技有限公司);流動相為乙腈-水(40∶60);體積流量為1.0 mL/min;檢測波長為205 nm;柱溫為室溫;進樣體積為20 μL。在該條件下,空白血漿中的內源物質不干擾主成分測定,專屬性較好,見圖1。

        2.2 磷酸鹽緩沖溶液(PBS,pH=7.4)的配制 取磷酸二氫鉀1.36 g,加入0.1 mo1/L氫氧化鈉溶液79 mL,蒸餾水稀釋至200 mL,即得。

        2.3 對照品溶液的配制 精密稱取對照品10.02 mg,置于10 mL量瓶中,加入甲醇適量,超聲溶解,甲醇定容至10 mL,搖勻。精密吸取5 mL,置于25 mL量瓶中,PBS液定容,搖勻,即得。

        2.4 標準曲線的制備 分別精密吸取“2.3”項下對照品溶液0.005、0.05、0.1、0.2、0.5、1 mL,置于10 mL量瓶中,PBS液定容,搖勻,過0.22 μm濾膜,進樣20 μL。然后,以峰面積(A)對質量濃度(C)作回歸,得到標準曲線A=41 168C-6 218.2(r=0.999 9),表明在0.100 2~20.04 μg/mL范圍內線性關系良好。

        2.5 精密度 分別精密配制質量濃度為4.008、10.02、20.04 μg/mL的14-去氧穿心蓮內酯溶液,PBS液定容,搖勻,過0.22 μm濾膜,進樣20 μL,測定峰面積ISD值。日內精密度分別在2、4、6、8、10 h進樣測定,而日間精密度分別在第1、2、3、4、5天進樣測定,結果見表1,表明儀器精密度良好。

        表1 14-去氧穿心蓮內的精密度

        圖1 超濾液的HPLC色譜圖

        2.6 超濾膜回收率的考察 PBS液配制質量濃度分別為2.00、4.00、10.00 μg/mL的標準品溶液500 μL,置于超濾離心管超濾膜上,6 000 r/min離心30 min,取20 μL進樣測定,代入“2.4”項下標準曲線方程,計算回收率。結果,14-去氧穿心蓮內酯的回收率均大于93%,說明超濾膜對其沒有特異性吸附。

        2.7 溫孵時間的考察 模擬人體體溫37℃的孵化時間,分別溫孵20、40、60、80、120、150 min。最終確定,溫孵120 min時,藥物與蛋白達到結合平衡狀態(tài)。

        2.8 血漿蛋白結合率試驗 精密吸取標準品溶液30、50、100 μL,置于1.5 mL EP管中,分別加入大鼠與人血漿970、950、900 μL,渦旋1 min,37℃下恒溫水浴中溫孵2 h。然后,移取0.5 mL置于超濾管中,6 000 r/min離心30 min,取20 μL進樣測定,將峰面積代入標準曲線方程,計算14-去氧穿心蓮內酯的質量濃度,求出其血漿蛋白結合率,計算公式如下,結果見表2。

        (ρ超濾前為超濾前14-去氧穿心蓮內酯的質量濃度,ρ超濾后為超濾后14-去氧穿心蓮內酯的質量濃度)

        表2 14-去氧穿心蓮內酯與大鼠和人血漿的血漿蛋白結合率(±s,n=3)

        表2 14-去氧穿心蓮內酯與大鼠和人血漿的血漿蛋白結合率(±s,n=3)

        質量濃度/ (μg·mL-1)大鼠血漿蛋白結合率/%人血漿蛋白結合率/% 6.012 91.20±4.03 93.87±1.33 10.02 94.30±1.39 95.77±0.43 20.04 96.14±1.06 97.02±0.73平均值93.88±2.16 95.55±0.83

        由表可知,14-去氧穿心蓮內酯與大鼠和人血漿均具有很強的結合能力,并且在所考察的質量濃度范圍內,無明顯的濃度依賴性。

        3 討論

        研究藥物血漿結合率的方法有超濾法、平衡透析法、超速離心法、凝膠過濾法等[12],其中較常用的為平衡透析法與超濾法,但前者耗時較長,可能引起藥物代謝降解,對藥物蛋白結合率的測定造成較大誤差,而后者不僅操作方便簡便,而且測定速度快,樣品用量少。因此,本實驗選擇超濾法[13]。

        另外,本實驗考察了藥物模擬人體體溫37℃的孵化時間,發(fā)現藥物在溫孵120 min時,與蛋白達到結合平衡狀態(tài)。同時,還研究了超濾離心的轉速和時間,根據不漏蛋白,而且超濾液體積與超濾前總體積之比為0.3~0.6為宜的標準[14],最終確定離心時間為30 min,轉速為6 000 r/min。

        實驗顯示,14-去氧穿心蓮內酯的平均蛋白結合率在93%以上,屬于高蛋白結合[15],表明如果在臨床上與其它藥物聯合使用,容易產生安全性問題。因此,有必要選擇臨床上聯合使用并具有高蛋白結合率的藥物,開展體外藥物蛋白競爭結合實驗,用于保證人體用藥的安全性。

        參考文獻:

        [1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:251-252.

        [2] 韓 光,李景華.14-去氧穿心蓮內酯β-環(huán)糊精包合作用的研究[J].中南藥學,2008,6(3):274-277.

        [3] 韓 光,李景華,郭國超,等.14-去氧穿心蓮內酯β-環(huán)糊精包合機制的研究[J].中草藥,2010,41(2):212-216.

        [4] 張志林,顧亞明,吳菊芳,等.穿心蓮內酯化合物抗感染機制探討[J].新藥與臨床,1982,1(1):4-7.

        [5] 鄧文龍,聶仁吉,劉家玉.四種穿心蓮內酯的藥理作用比較[J].藥學通報,1982,17(4):3-6.

        [6] 四川省中藥研究所,雅安地區(qū)衛(wèi)生防疫站,雅安縣衛(wèi)生防疫站,等.穿心蓮甲素、乙素、丙素治療鉤端螺旋體病的療效觀察[J].新醫(yī)藥學雜志,1973(7):7-9.

        [7] Zhang C Y,Tan B K.Vasore1axation of rat thoracic aorta caused by 14-deoxyandrographo1ide[J].Clin Eχp Pharmacol Physiol,1998,25(6):424-429.

        [8] Burgos I A,Loyo1a M,Hida1go M A,et al.Effect of 14-deoxyandrographo1ide on ca1cium-mediated ratuterine smooth musc1e contracti1ity[J]. Phytother Res,2003,17(9):1011-1015.

        [9] Zhang C Y,Tan B K.Effects of 14-deoxyandrographo1ide and 14-deoxy-11,12-didehydroandrographo1ide on nitric oxide production in cu1tured human endothe1ia1ce11s[J].Phytother Res,1999,13(2):157-159.

        [10] Manda1S,Ne1son V K,Mukhopadhyay S,et al.14-Deoxyandrographo1ide targets adeny1ate cyc1ase and prevents ethano1-induced 1iver injury through constitutive NOS dependent reduced redox signa1ing in rats[J].Food Chem Toχicol,2013,59:236-248.

        [11] 吳 陽,張英豐.超濾法測定脫水穿心蓮內酯的血漿蛋白結合率[J].中國實驗方劑學雜志,2011,17(21):57-59.

        [12] 李曉天,褚延樂,吳鳳娟,等.超濾法測定冬凌草乙素的血漿蛋白結合率[J].中國新藥雜志,2013,22(20):2418-2422.

        [13] 韓雪瑩,王 巍,譚日秋,等.超濾法測定牛蒡苷及牛蒡苷元的血漿蛋白結合率[J].中國中藥雜志,2013,38(3):432-434.

        [14] 孔 慧,邢紅霞,劉 瑾,等.異亞丙基莽草酸血漿蛋白結合率的測定[J].中國中藥雜志,2012,37(2):255-257.

        [15] 佟立今,鄭 玲,張 石,等.西瑞香素與大鼠血漿蛋白結合率的測定[J].沈陽藥科大學學報,2013,30(2):109-113.

        *通信作者:韓 光(1966—),女,博士,教授,碩士生導師,研究方向為天然活性成分研究及新藥開發(fā)。Te1:(0371)23880680,E-mai1:hang@henu.edu.cn

        作者簡介:張二鋒(1988—),男,碩士,研究方向為天然活性成分研究及新藥開發(fā)。Te1:15136226020,E-mai1:779354666@qq.com

        基金項目:國家自然科學基金項目(81373974);河南大學研究生教育綜合改革項目(Y1319023)

        收稿日期:2015-01-27

        doi:10.3969/j.issn.1001-1528.2016.03.047

        中圖分類號:I969.1

        文獻標志碼:B

        文章編號:1001-1528(2016)03-0689-03

        猜你喜歡
        穿心蓮法測定內酯
        穿心蓮內酯滴丸
        ICP-OES法測定鋼和鐵中微量元素
        昆鋼科技(2020年6期)2020-03-29 06:39:40
        HPLC法測定桂皮中的cinnamtannin D-1和cinnamtannin B-1
        中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:56
        UPLC法測定萹蓄中3種成分
        中成藥(2017年5期)2017-06-13 13:01:12
        穿心蓮內酯固體分散體的制備
        中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:27
        HPLC法測定炎熱清片中4種成分
        中成藥(2016年8期)2016-05-17 06:08:41
        蒙藥如達七味散中木香烴內酯和去氫木香內酯的含量測定
        消炎止咳片穿心蓮中脫水穿心蓮內酯含量的HPLC分析
        特產研究(2015年1期)2015-04-12 06:36:19
        α-甲氧甲?;?γ-丁內酯和α-乙氧甲酰基-γ-丁內酯的合成及表
        應用化工(2014年5期)2014-08-08 13:10:58
        熱處理對穿心蓮內酯降解的影響
        中成藥(2014年9期)2014-02-28 22:28:48
        久久精品国产亚洲av麻豆图片| 岛国av一区二区三区| 青青草久久久亚洲一区| 先锋影音人妻啪啪va资源网站| 国产精品亚洲一区二区在线观看| 久久99国产精品尤物| 日本高清一区二区在线观看 | 变态调教一区二区三区女同| 欧美精品v国产精品v日韩精品| 免费看操片| 色青青女同性恋视频日本熟女 | 久久av粉嫩一区二区| 国产午夜成人av在线播放| 精品人体无码一区二区三区| 亚洲国产剧情一区在线观看| 亚洲一区二区三区精品视频| 性猛交╳xxx乱大交| 国产成人综合一区二区三区| 国产天堂av手机在线| 免费人成视频网站在在线| 天天燥日日燥| 亚洲V在线激情| 日本在线一区二区免费| 亚洲av日韩av永久无码下载| 久久丫精品国产亚洲av| 日本一区二区三区小视频| 9久久婷婷国产综合精品性色| 私人毛片免费高清影视院| 国产片AV在线永久免费观看| 国产精品女同二区五区九区| 98色婷婷在线| 无遮高潮国产免费观看| 国产目拍亚洲精品区一区| 亚洲久悠悠色悠在线播放| 无码中文字幕日韩专区视频| 日本香蕉久久一区二区视频 | 曰批免费视频播放免费| 亚洲av男人的天堂在线观看| 亚洲欧美香港在线观看三级片| 91精品啪在线观九色| 激情第一区仑乱|