龐文生　胡　娟

1. 福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院，福建　福州　350003；2. 福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建　福州　350122

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瓜蔞桂枝湯對(duì)MCAO大鼠腦組織自由基代謝藥效學(xué)研究

龐文生1,2胡娟2

1. 福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院，福建福州350003；2. 福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122

【摘要】目的：探討瓜蔞桂枝湯對(duì)MCAO大鼠腦組織自由基代謝影響。方法：采用線栓法制造大鼠局灶性腦缺血再灌注MCAO模型，給藥組給予瓜蔞桂枝湯原方和化裁方臨床折合劑量的水煎液，每日1次，連續(xù)灌胃14d；模型組與假手術(shù)組均給予同體積生理鹽水。生化法測(cè)定MCAO大鼠腦組織中SOD、GST和GSH-Px活力和MDA含量。結(jié)果：瓜蔞桂枝湯可以顯著提高M(jìn)CAO大鼠SOD、GSH-Px、CAT的活力，對(duì)大鼠腦組織MDA升高具有明顯抑制作用。結(jié)論：瓜蔞桂枝湯可能通過(guò)減輕腦組織自由基損傷發(fā)揮其腦缺血保護(hù)作用。

【關(guān)鍵詞】瓜蔞桂枝湯；MCAO大鼠模型；SOD；MDA；GSH-PX；CAT

瓜蔞桂枝湯是《金匱要略》治療柔痙的中醫(yī)經(jīng)典方劑，以瓜蔞根加桂枝湯組成。柔痙之病是因外感風(fēng)寒、過(guò)汗或誤下，耗損津液，致筋脈失養(yǎng)所造成的。桂枝湯解肌祛邪，瓜蔞根(即天花粉)能滋養(yǎng)津液而潤(rùn)燥養(yǎng)筋、舒緩筋脈，以治柔痙。湯本求真氏說(shuō)：“瓜蔞根治因虛熱，臟器組織燥枯，而于外表發(fā)輕微強(qiáng)直性痙攣，于里現(xiàn)口燥口渴及其他之癥狀”[1]。根據(jù)臨床實(shí)踐，瓜萎根確有治療因熱傷津而致強(qiáng)直痙攣的作用。

福建中醫(yī)藥大學(xué)校長(zhǎng)陳立典教授創(chuàng)新性地臨床運(yùn)用瓜蔞桂枝湯治療腦卒中后痙攣性偏癱，跟蹤多年臨床上使用本方的情況，患者服藥后癥減，取得較好療效[2]。將此方已研發(fā)為醫(yī)院制劑，具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)。中藥復(fù)方多具有多靶點(diǎn)、多途徑的作用特點(diǎn)，因此從多方面多層次探討瓜蔞桂枝湯用于治療腦卒中后遺癥的作用機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

本文研究瓜蔞桂枝湯(GLGZT)對(duì)MCAO大鼠腦組織丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化酶(GSH-PX)及過(guò)氧化氫酶(CAT)等代謝的影響，探討其逆轉(zhuǎn)腦卒中神經(jīng)損傷的藥理作用靶點(diǎn)。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)雄性SD大鼠，體重(250±20)g，上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)儀器VF3001全波長(zhǎng)掃描多功能酶標(biāo)儀(美國(guó))。

1.3實(shí)驗(yàn)藥物與試劑瓜蔞根(天花粉)、桂枝、白芍、甘草、干姜、大棗購(gòu)于福建祥安藥業(yè)有限公司，經(jīng)檢測(cè)符合藥典標(biāo)準(zhǔn)；氯化鈉(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；SOD、GSH-Px和MDA試劑盒(南京建成生物工程研究所)；CAT試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司)。

1.4方法

1.4.1動(dòng)物模型制備目前進(jìn)行腦缺血再灌注損傷研究的常用動(dòng)物模型為大鼠MCAO模型。采取線栓法制作大腦中動(dòng)脈閉塞/再灌注模型[3]：動(dòng)物術(shù)前禁食12h，自由飲水；用10%水合氯醛3ml/kg行腹腔注射麻醉；鈍性分離右側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA)、頸外動(dòng)脈(ECA)、和頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)，并小心分離迷走神經(jīng)，分別電凝ECA分支枕動(dòng)脈和甲狀腺上動(dòng)脈；在距CCA分叉大約1cm處結(jié)扎ECA近心端，電凝遠(yuǎn)心端；用無(wú)創(chuàng)小動(dòng)脈夾夾閉CCA，在ECA殘端距CCA分叉3mm剪一小口，將制備好的線栓經(jīng)ECA插入ICA，線栓頭端距CCA分叉處約18mm，此時(shí)進(jìn)線有輕微阻力，栓線正好插至顱內(nèi)的大腦前動(dòng)脈，堵住大腦中動(dòng)脈(MCA)開(kāi)口，制成MCAO模型；造模后2h，以半劑量10%水合氯醛再次麻醉動(dòng)物，拔出線栓，結(jié)扎ECA殘端。術(shù)后20～25℃條件下飼養(yǎng)大鼠，自由進(jìn)食水。假手術(shù)組除不在頸內(nèi)動(dòng)脈插入線栓外，其余步驟與上述相同。

1.4.2分組與給藥將40只大鼠隨機(jī)分成4組，每組10只，分別為模型組、假手術(shù)組、原方組和化裁方組。兩個(gè)給藥組分別給予瓜蔞桂枝湯原方(天花粉6g，桂枝9g，芍藥15g，甘草6g，生姜9g，大棗12枚和增大天花粉用量的化裁方(天花粉30g，其余藥味用量與原方相同)按臨床劑量折合大鼠劑量水煎劑，用水煎煮兩次合并混勻。模型組與假手術(shù)組均給予生理鹽水。每日1次，連續(xù)給藥14d。

1.4.3MDA、SOD、GSH-Px和CAT的測(cè)定大鼠于缺血再灌注24h后斷頭取腦，冰上分離缺血側(cè)大腦皮質(zhì)適量，在冰浴中勻漿，用0.9%生理鹽水制成10%的組織勻漿液。4000r/min離心10 min，取上清分裝備用。具體檢測(cè)方法嚴(yán)格按各自試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，按說(shuō)明書(shū)公式計(jì)算具體數(shù)值。

2結(jié)果

2.1GLGZT對(duì)MCAO大鼠腦組織SOD和MDA的影響腦組織缺血缺氧后，組織氧化和抗氧化平衡被打破，結(jié)果顯示模型組SOD、GXH-Px和CAT活力明顯降低，表明機(jī)體清除超氧陰離子自由基的能力降低；腦組織缺血缺氧后產(chǎn)生大量的自由基，攻擊生物膜中的多種不飽和脂肪酸，生成MDA等脂質(zhì)過(guò)氧化物，顯示模型組腦組織MDA明顯升高。給予GLGZT后，原方和化裁方可明顯升高腦組織SOD活力；MDA均有不同程度的降低，表明GLGZT對(duì)腦組織缺血后自由基的生成有一定抑制作用；尤以化裁方效果更好；結(jié)果見(jiàn)表1。

表1GLGZT對(duì)MCAO大鼠腦組織

組別nSOD/U/mgMDA/nmol假手術(shù)組10145.22±8.760.93±0.26模型組10112.03±9.52▲▲1.50±0.48▲▲GLGZD原方10129.65±5.94*1.38±0.27*GLGZD化裁方10138.12±5.36**1.33±0.31*

注：與假手術(shù)組比較，▲▲P<0.01；與模型組比較，**P<0.01，*P<0.05。

2.2GLGZT對(duì)MCAO大鼠腦組織GSH-Px和CAT的影響腦缺血缺氧后通過(guò)COQ途徑產(chǎn)生H2O2等過(guò)氧化物，造模后MCAO大鼠腦組織CAT、GSH-Px活性明顯降低。GLGZT原方和化裁方均可提高CAT、GSH-Px活力，同模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2GLGZT對(duì)MCAO大鼠腦組織

組別nGSH-Px/U/mgCAT/U/mg假手術(shù)組1016.11±2.164.39±0.62模型組108.78±1.53▲▲2.55±0.37▲▲GLGZT原方1011.34±2.44*2.83±0.37*GLGZT化裁方1013.12±3.28**3.16±0.24**

注：與假手術(shù)組比較，▲▲P<0.01，▲P<0.05；與模型組比較，**P<0.01，*P<0.05。

3討論

腦血管疾病以其高發(fā)病率、高致殘率、高復(fù)發(fā)率己成為嚴(yán)重威脅人類生命與健康的主要疾病之一，隨著我國(guó)老齡化社會(huì)的到來(lái)，其發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)。腦血管疾病主要包括缺血性和出血性腦卒中，其中以缺血性腦卒中最常見(jiàn)，而且大腦中動(dòng)脈(MCA)是腦缺血的多發(fā)部位[4]。

腦組織缺血缺氧后，組織氧化和抗氧化平衡被打破，SOD、GXH-Px和CAT活力明顯降低，表明機(jī)體清除超氧陰離子自由基的能力降低；腦組織缺血缺氧后產(chǎn)生大量的自由基，攻擊生物膜中的多種不飽和脂肪酸，生成MDA等脂質(zhì)過(guò)氧化物，腦組織MDA明顯升高；GXH-Px可催化過(guò)氧化物分解，保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的完整；CAT也可促使H2O2分解為分子氧和水，清除體內(nèi)的過(guò)氧化氫，從而使細(xì)胞免于遭受H2O2的毒害[5]。瓜蔞桂枝湯能提高SOD、GXH-Px、CAT活性，減少M(fèi)DA產(chǎn)生，對(duì)腦缺血后自由基的損傷有明顯的保護(hù)作用。

參考文獻(xiàn)

[1]田文熙. 《金匱要略》中桂枝湯類方調(diào)和陰陽(yáng)的作用[J]. 中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2010，16 (8)：646-647.

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[5]邵福源，王宇卉. 分子神經(jīng)藥理學(xué)[M]. 上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2005.

(收稿日期：2015.12.07)

【中圖分類號(hào)】R285.5

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1007-8517(2016)03-0019-01

作者簡(jiǎn)介：龐文生，男，從事天然藥物化學(xué)研究。E-mail：pws@fjtcm.edu.cn

基金項(xiàng)目：福建省科技廳社會(huì)發(fā)展引導(dǎo)性(重點(diǎn))項(xiàng)目(2013Y0047)資助。