蘇碧麗　胡　娟,2　龐文生,3*

1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建　福州　350122；2.福建中醫(yī)藥研究院，福建　福州　350003；

3.福建省第二人民醫(yī)院，福建　福州　350003

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不同產(chǎn)地粉葛四種異黃酮含量比較

蘇碧麗1胡娟1,2龐文生1,3*

1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122；2.福建中醫(yī)藥研究院，福建福州350003；

3.福建省第二人民醫(yī)院，福建福州350003

【摘要】目的：考察不同產(chǎn)地粉葛中葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的含量，為制定粉葛藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。方法：采用RP-HPLC法，色譜柱Hypersil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.2%磷酸，梯度洗脫；流速1.0 ml/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)250 nm。結(jié)果：葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的線性范圍分別為12.4～620ng、1.52～76ng、2.4～120ng、3.28～164 ng，四種成分的平均加樣回收率分別為101.1%、99.86%、101.78%、103.39%，RSD分別為1.43%、1.29%、0.95%、1.21%。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便快速，重復(fù)性良好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于不同產(chǎn)地粉葛藥材中四種異黃酮類(lèi)成分的含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】HPLC；葛根素；3＇-甲氧基葛根素；大豆苷；大豆苷元

粉葛為豆科植物甘葛藤PuerariathomsoniiBenth的干燥根，載于《中國(guó)藥典》[1]，具有解肌退熱、生津止渴的功效、臨床主要用于外感發(fā)熱頭痛、項(xiàng)背強(qiáng)痛、口渴等癥狀。粉葛的主要化學(xué)活性成分有葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元等異黃酮類(lèi)化合物[2]，具有降血壓、降血糖、保護(hù)肝臟、治療頸椎病等作用[3-4]；同時(shí)粉葛富含淀粉，因此具有較高的醫(yī)用和食用價(jià)值。近年來(lái)，文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)粉葛異黃酮多指標(biāo)成分的含量測(cè)定[5-8]，但是隨著粉葛栽培面積的不斷擴(kuò)大，出現(xiàn)了許多栽培品種，因此不同產(chǎn)地藥材之間的有效成分含量存在著一定的差異，進(jìn)而影響了藥材的質(zhì)量。研究采用高效液相色譜法同時(shí)對(duì)廣東、廣西、安徽粉葛中四種異黃酮成分的含量，為粉葛藥材質(zhì)量控制提供方法和依據(jù)。

1儀器與試藥

1.1儀器Waters2695高效液相色譜系統(tǒng)(2998型二極管陣列檢測(cè)器)；KQ3200DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超市儀器有限公司)；Thermo超純水設(shè)備；電子分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；FW135中草藥粉碎機(jī)(天津市泰勒特儀器有限公司)。

1.2藥品與試劑3＇-甲氧基葛根素對(duì)照品(批號(hào)：141217，成都普菲德生物技術(shù)有限公司)；葛根素對(duì)照品(批號(hào)：10752-201313)、大豆苷對(duì)照品(批號(hào)：111738-201302)、大豆苷元(批號(hào)：111502-200402)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；粉葛(批號(hào)：150420，安徽本草國(guó)藥飲片有限公司；批號(hào)：150302，安徽省金芙蓉中藥飲片有限公司；批號(hào)：1504005，江西樟樹(shù)天齊堂中藥飲片有限公司)；甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取各對(duì)照品適量，分別用甲醇制成每毫升中含有葛根素0.062 mg、3＇-甲氧基葛根素0.0076 mg、大豆苷0.012 mg、大豆苷元0.0164 mg即可。

2.2供試品溶液的制備取不同產(chǎn)地的粉葛粉末(過(guò)三號(hào)篩)約1.0 g，精密稱(chēng)定，分別置于具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇100 ml，稱(chēng)定重量，超聲提取30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用30%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，即得。

2.3色譜條件色譜柱Hypersil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：10 μl；梯度洗脫條件見(jiàn)表1。色譜見(jiàn)圖1。

表1　梯度洗脫條件

2.4方法學(xué)考察

2.4.1線性范圍考察分別精密吸取上述對(duì)照品溶液0.2、0.5、1、2、5、10 ml，置于10 ml容量瓶?jī)?nèi)，以甲醇定容至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)。分別按“2.3”項(xiàng)下條件測(cè)定，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X，ng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的回歸方程，見(jiàn)表2。

表2　四種異黃酮類(lèi)成分線性關(guān)系考察

(n=3)

2.4.2精密度試驗(yàn)取混合對(duì)照品溶液，按“2.3”項(xiàng)色譜條件重復(fù)測(cè)定6次，測(cè)得葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的峰面積RSD分別為0.52%、1.36%、1.00%、0.35%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.4.3重復(fù)性試驗(yàn)取同一來(lái)源的粉葛6份，分別按“2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的平均含量分別為0.29%、0.04%、0.04%、0.03%，RSD分別為1.61%、1.98%、1.50%、1.62%。結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

2.4.4穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一來(lái)源的供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)下的色譜條件，分別用于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣10 μL分別測(cè)定葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的峰面積，RSD分別為1.02%、1.98%、1.15%、1.54%，結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5加樣回收率試驗(yàn)精密稱(chēng)取同一粉葛根粉末約0.5 g，置于錐形瓶中，精密加入適當(dāng)量的對(duì)照品溶液，按“2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，平行制備6份。按“2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算平均回收率和RSD，葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的平均回收率分別為101.1%、99.86%、101.78%、103.39%，RSD分別為1.43%、1.29%、0.95%、1.21%。結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確可靠。

2.5樣品含量測(cè)定取不同產(chǎn)地的粉葛，分別按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄各個(gè)成分的峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中各成分的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　不同產(chǎn)地粉葛樣品中四種異黃酮類(lèi)成分含量測(cè)定(n=3，%)

3討論

不同產(chǎn)地粉葛藥材中四種異黃酮類(lèi)成分含量比較，葛根素：廣東>安徽>廣西；3-甲氧基葛根素：安徽>廣東>廣西；大豆苷：廣東>安徽或廣西；大豆苷元：廣東>廣西>安徽；不同產(chǎn)地之間含量相差較大的是3＇-甲氧基葛根素，進(jìn)一步的說(shuō)明不同產(chǎn)地的環(huán)境、氣候、土壤、降水等條件對(duì)粉葛根藥材有效成分還是存在一定的影響。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)高效液相色譜法建立對(duì)不同產(chǎn)地的粉葛多指標(biāo)成分的含量測(cè)定，能夠更全面的控制粉葛飲片的質(zhì)量，為粉葛藥材的選擇提供了一定的依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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Comparison the content of four kinds of isoflavonoids in different habitats of radixpuerariaethomsonii

SU Bili1HU juan1,2PANG Wensheng1,3*

1.FuJian University of Traditional Chinese Medicine of Pharmacy, Fuzhou 350122,China;2.FuJian Academy of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350003,China;3.Fujian Seeond Peopleis Hospitied, Fuzhou350000,China

Abstract:Objective To determine the content of puerarin, 3′-methoxy puerarin, daidzin,daidzein in different habitats of radix puerariae thomsonii,and provide reference for establishing its quality standards.Methods HPLC determination was performed on a Hypersil C18column(4.6 mm×250 mm,5 μm) and detected at 250 nm.The mobile phase was consisted of Acetonitrile and 0.2% Phosphate acid solution with gradient elution. The flow rate was 1.0 ml·min-1and column temperature was kept at 30℃.Results The method was proved to be linear in the ranges of 12.4～620,1.52～76,2.4～120,3.28～164 ng for the four isoflavonoids, puerarin, 3′-methoxy puerarin, daidzin, daidzein,respectively. The average recoveries were 101.1% (1.43%),101.78%(0.95%),103.39%(1.21%),respectively. Conclusion Results obtained showed that the method is convenient,accurate and reliable,can be applied to the determination of the content of Radix Pueraria thomsonii from different sources in four isoflavonoids.

Key words:HPLC;puerarin;3′-methoxy puerarin; daidzin;daidzein

(收稿日期：2015.12.19)

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284.1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1007-8517(2016)03-0010-02

作者簡(jiǎn)介：蘇碧麗，女，在讀碩士研究生，從事天然藥物化學(xué)研究。E-mail：912637905@qq.com通信作者：龐文生，E-mail:pws@fjtcm.edu.cn