袁健東　陳　鑫　高建清　朱旻譽(yù)　陳　雷

溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院骨科，浙江　溫州　325000

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浙江省強(qiáng)直性脊柱炎患者調(diào)查和ERAP1與HLA-B27的相互作用研究

袁健東陳鑫高建清朱旻譽(yù)陳雷

溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院骨科，浙江溫州325000

【摘要】目的：通過對浙江省中國人群AS疾病的流行病學(xué)進(jìn)行調(diào)查，探討ERAP1基因多態(tài)性與HLA-B27陽性AS患者的關(guān)聯(lián)性。方法：選取風(fēng)濕科門診確診的128例AS患者和無自身免疫性及系統(tǒng)性疾病的非AS病史健康對照者154例，通過收集臨床資料和視覺模擬評分對浙江省強(qiáng)直性脊柱炎患者進(jìn)行調(diào)查，分析ERAP1基因單核苷酸多態(tài)性與HLA-B27的相互作用。結(jié)果：AS患者群體中HLA-B27檢出率為91.4%，對照健康組為2.58%。ERAP1基因SNP位點(diǎn)：rs27037、rs27434、rs27980在浙江省強(qiáng)直性脊柱炎患者群體中具有強(qiáng)相關(guān)性(P< 0.05)。結(jié)論：ERAP1基因單核苷酸多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的易感性具有強(qiáng)相關(guān)性，多個不同種族群體研究表明群體間的ERAP1基因多態(tài)性位點(diǎn)存在差異。

【關(guān)鍵詞】強(qiáng)直性脊柱炎；單核苷酸多態(tài)性；ERAP1基因

強(qiáng)直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis,AS)是一種慢性自身免疫性疾病，以骶髂關(guān)節(jié)炎和附著點(diǎn)炎為特征。經(jīng)統(tǒng)計，AS在國外歐洲人群中的患病率為0.5%[1]，而在我國的患病率為0.2%～0.4%[2]。AS遺傳多態(tài)性的研究表明，超過90%的AS患者呈現(xiàn)HLA-B27陽性，而健康人群僅存在5%。Burton等[3]首次報道了歐洲高加索白種人AS患者中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氨基肽酶1基因(endoplasmic reticulum aminopeptidase 1,ERAP1)與AS具有相關(guān)性，其發(fā)現(xiàn)ERAP1的兩個單核苷酸多態(tài)性(SingleNucleotidePolymorphism，SNP)位點(diǎn)(rs27044，rs30187)與AS發(fā)病相關(guān)。因此，ERAP1和HLA-B27的相互作用在AS患者發(fā)病機(jī)制中具有著重要作用，在中國人群中進(jìn)行大規(guī)模的AS遺傳免疫學(xué)研究也就具有其重要性和必要性。

1資料與方法

1.1研究對象根據(jù)知情同意原則，經(jīng)溫州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)學(xué)院倫理委員會同意(NO：2012-092)。本研究組收集風(fēng)濕科門診確診的AS患者128例，另收集的154例對照來自門診就診的無自身免疫性和系統(tǒng)性疾病的非AS病史健康人。所有研究對象間無血緣關(guān)系且均為漢族，簽署知情同意書，并自愿捐獻(xiàn)血液樣品。

1.2臨床表型評估所有AS患者需全程參與體檢和臨床評估，并進(jìn)行問卷調(diào)查。記錄患者的一般資料(姓名、年齡、性別和病程等)、發(fā)病年齡、家族史及臨床表型特征等與AS疾病活動度相關(guān)的臨床表型評估資料。疼痛評價采用基于自我報告的視覺模擬評分(Visual Analogue Scale,VAS)法評價[4]，包括患者晝、夜疼痛的VAS，病情活動性指數(shù)[5](Bath Ankylosing Spondylitis Disease Activity Index,BASDAI)，功能性指數(shù)[6](BathAnkylosingSpondylitisFunctional Index,BASFI)。

1.3基因組DNA提取AS患者與健康對照組于無菌條件下用乙二胺四乙酸(EDTA)-K2 抗凝管采集外周靜脈血4ml。血液樣品基因組DNA的提取使用AxyPrep Blood Genomic DNA Miniprep Kit (Axygen, UnionCity, CA)，DNA濃度檢測使用QuantiTPicoGreen dsDNA assay (Invitrogen,Carlsbad, CA)，置于-20℃冰箱保存。

1.4基因分型通過文獻(xiàn)篩選出報道較多的公認(rèn)的8個ERAP1基因SNP位點(diǎn)，包括rs27038(A/G)， rs27037(G/T)，rs27434(A/G)，rs27980(A/C)，rs7711564(C/G)，rs30187(C/T)，rs10050860(C/T)和rs17482078(C/T)，用于ERAP1基因多態(tài)性位點(diǎn)的基因型檢測。采用美國Sequenom公司的MassARRAY iPLEX系統(tǒng)進(jìn)行SNP分型檢測。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理病例對照關(guān)聯(lián)分析應(yīng)用PLINK軟件。PLINK進(jìn)行病例對照群體SNP多態(tài)性之間的病例對照關(guān)聯(lián)分析，P< 0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1AS患者的一般特征和臨床特點(diǎn)兩組的年齡和性別分布無統(tǒng)計學(xué)意義?；颊邥?、夜疼痛的視覺模擬評分(VAS)分別為(38.10±23.58)和(32.21±21.84)；病情活動性指數(shù)(BASDAI)評分為(3.91±2.84)；功能性指數(shù)評分為(3.14±2.27)。見表1。AS患者群體中HLA-B27檢出率為91.4%，對照健康組為2.58%，AS患者HLA-B27抗原陽性率遠(yuǎn)超健康人群。說明HLA-B27與AS之間在存關(guān)聯(lián)。

表1　AS患者和健康對照組的一般特征和臨床特點(diǎn)

2.2ERAP1基因多態(tài)性位點(diǎn)的AS病例對照關(guān)聯(lián)分析3個SNP：rs27037、rs27434和rs27980，表現(xiàn)出強(qiáng)相關(guān)性(P<0.05)。P值最小的SNP位點(diǎn)為rs27434(P=0.000612)，OR值為1.13，95% 置信區(qū)間CI為1.031.46。見表2。通過文獻(xiàn)篩選處的8個高頻ERAP1基因SNP位點(diǎn)在中國浙江人群中的分布具有特殊性，其中僅有3個SNP位點(diǎn)具有AS疾病關(guān)聯(lián)性。

表2　ERAP1基因多態(tài)性位點(diǎn)的AS病例對照關(guān)聯(lián)分析結(jié)果

3討論

ERAP1是肽結(jié)合HLA-Ⅰ類分子(如HLA-B27)過程中相關(guān)的重要成分，能夠?qū)κ杷聂然┒说?-16個殘基的底物進(jìn)行水解，ERAP1作為抗原提呈過程中的重要蛋白酶在處理外來抗原時與HLA-B27分子聯(lián)動作用，參與AS的發(fā)病。

本實(shí)驗分析結(jié)果顯示，患者晝、夜疼痛的視覺模擬評分(VAS)分別為(38.10±23.58)和(32.21±21.84)，AS患者疼痛程度高；病情活動性指數(shù)(BASDAI)評分為(3.91±2.84)，AS患者處于中等疼痛；同時，功能性指數(shù)評分為(3.14±2.27)，AS患者的活動能力消弱至中等水平。AS患者群體中HLA-B27檢出率為91.4%，對照健康組為2.58%，AS患者HLA-B27抗原陽性率遠(yuǎn)超健康人群。說明HLA-B27影響AS發(fā)病機(jī)制。ERAP1基因多態(tài)性位點(diǎn)的AS病例對照關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，通過文獻(xiàn)篩選出的8個高頻ERAP1基因SNP位點(diǎn)在中國浙江人群中的分布具有特殊性，其中僅有3個SNP位點(diǎn)(rs27037、rs27434、rs27980)具有AS疾病關(guān)聯(lián)性。

綜上所述，本實(shí)驗證實(shí)了ERAP1基因多態(tài)性與HLA-B27的相互作用影響AS發(fā)病機(jī)制，為ERAP1基因多態(tài)性進(jìn)一步的深度挖掘和AS的診斷治療提供了可靠依據(jù)和重要參考。

參考文獻(xiàn)

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[4]劉健，盛長健，謝顏麗，等.強(qiáng)直性脊柱炎患者生存質(zhì)量變化及相關(guān)性分析[J].中國康復(fù)，2009，24(6)：390-392.

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[6]馬延梅，譚平，俞烜華，等.駐閩部隊126例強(qiáng)直性脊柱炎患者的生存質(zhì)量研究[J].2011,42(3):150-153.

(收稿日期：2015.12.10)

【中圖分類號】R593.23

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)04-0085-02

作者簡介：袁健東(1980-)，博士，副主任醫(yī)師，E-mail：manuyuanjd@163.com

基金項目：浙江省自然基金資助(項目編號：LQ12H06001)。