倪文騏閆涵威李萍張雅李衛(wèi)燕曹蔚

第四軍醫(yī)大學(xué)(西安710032)

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長(zhǎng)春七脂溶性成分的GC-MS分析*

倪文騏閆涵威李萍張雅李衛(wèi)燕曹蔚△

第四軍醫(yī)大學(xué)(西安710032)

摘要目的：分析長(zhǎng)春七脂溶性成分。方法：采用乙醇回流、乙醚萃取法，提取了三批長(zhǎng)春七樣品的脂溶性成分，結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行分離、鑒定及分析。結(jié)果：從1號(hào)樣品中鑒定出42個(gè)成分，主要為萜類(35.38%)、烷烴類(17.08%)、脂肪酸類(11.65%)和香豆素類(10.00%)。從2號(hào)樣品中鑒定出39個(gè)成分，主要為萜類(37.60%)、香豆素類(14.06%)、脂肪酸類(11.65%)和烷烴類(10.88%)。從3號(hào)樣品中鑒定出37個(gè)成分，主要為萜類(39.99%)、香豆素類(16.79%)、脂肪酸類(14.94%)和烷烴類(13.61%)。結(jié)論：本研究全面分析了長(zhǎng)春七的脂溶性成分，為長(zhǎng)春七的開(kāi)發(fā)利用及質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了參考。

主題詞 氣相色譜-質(zhì)譜法@長(zhǎng)春七@脂溶成分

長(zhǎng)春七[Libanotisbuchtormensis( Fisch) DC]是傘形科巖風(fēng)屬草本植物，性微甘、味酸，主要分布于甘肅、新疆、四川和陜西等省區(qū)，為陜西太白七藥之一，在陜西民間有很好的應(yīng)用療效。一般以根莖入藥，主治風(fēng)寒感冒、咳嗽、跌打損傷、關(guān)節(jié)腫痛、風(fēng)濕筋骨痛等病癥[1]。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)長(zhǎng)春七的超臨界提取物的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜和抗炎作用，異歐前胡素的提取工藝進(jìn)行了深入的探討和研究[2-3]。目前，對(duì)長(zhǎng)春七的脂溶性成分未見(jiàn)報(bào)道，而長(zhǎng)春七的脂溶性成分對(duì)于其藥效活性具有一定的相關(guān)性。本研究組對(duì)長(zhǎng)春七脂溶性成分進(jìn)行了全面分析，為進(jìn)一步研究和開(kāi)發(fā)長(zhǎng)春七提供依據(jù)。

1儀器與試藥三批長(zhǎng)春七藥材樣品于2014年9月從陜西太白山采得，曬干，分別編號(hào)1～3號(hào)，經(jīng)本教研室曹蔚副教授鑒定。簡(jiǎn)單對(duì)三批長(zhǎng)春七藥材的形狀特征進(jìn)行描述。1號(hào)樣品，外形：圓柱形、較直；表面特征：表面灰黃色，粗糙，皮孔突出；質(zhì)地氣味：質(zhì)硬脆，易折斷，氣微，味酸。2號(hào)樣品，外形：圓柱形，稍彎曲；表面特征：表面土黃色，粗糙，皮孔明顯；質(zhì)地氣味：質(zhì)硬脆，易折斷，氣強(qiáng)，味微酸)。3號(hào)樣品，外形：圓錐形，稍彎曲；表面特征：表面灰棕色，粗糙，皮孔突出；質(zhì)地氣味：質(zhì)硬脆，易折斷，氣微，味微酸。實(shí)驗(yàn)中所用試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

2方法與結(jié)果2.1脂溶性成分的提取取三批長(zhǎng)春七的根狀莖各200g，粉碎，乙醇回流法分別提取3次，提取液分別合并，減壓回收乙醇，濃縮。用石油醚分別萃取3次，合并有機(jī)相后用無(wú)水硫酸鈉干燥，回收石油醚。

2.2脂溶性成分的測(cè)定條件GC-MS工作條件：儀器為Thermo Fisher SCIENTIFIC公司的GC-MS聯(lián)用儀(型號(hào)為Trace ISQ)。色譜柱為DB-5MS(30×0.25mm，0.25μm)毛細(xì)管色譜柱。程序升溫：初始溫度50℃，然后以3℃/min升到260℃，保持3min，接著以20℃/min升至280℃，保持3min。載氣為高純氦氣(99.99%)，進(jìn)樣不分流，載氣流量1.0mL/min，進(jìn)樣口溫度250℃。電子轟擊(EI)離子源：電離能70eV，掃描范圍50～650amu，掃描時(shí)間間隔0.2s，離子源溫度260℃，傳能線溫度 280℃。

2.3結(jié)果按照上述色譜-質(zhì)譜條件對(duì)樣品進(jìn)行分析，獲得三批長(zhǎng)春七樣品脂溶性成分的總離子流圖(見(jiàn)圖1)，經(jīng)GC數(shù)據(jù)處理機(jī)用峰面積歸一化法測(cè)定各組分的相對(duì)含量，并結(jié)合GC-MS聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，所得質(zhì)譜圖參照NIST 2005標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫(kù)和WILE 275質(zhì)譜圖庫(kù)檢索確定三批長(zhǎng)春七樣品脂溶性提取物的化學(xué)成分。

1號(hào)樣本共鑒定了42個(gè)化合物，占總含量的94.38%。按照含量從大到小的順序依次：α-甜沒(méi)藥醇(14.28%)；蛇床子素(10%)；蛇麻烯(9.64%)；(Z，Z)-9，12-亞油酸(9.46%)；α-甜沒(méi)藥烯(7.35%)；4-亞甲基-1-甲基-2-(2-甲基-1-丙烯-1-基)-1-乙烯基-環(huán)庚烷(6.28%)；(1S-順式)-1，2，3，5，6，8A-六氫化-4，7-二甲基-1-(1-甲乙基)-萘(2.81%)；4-(1，5-二甲基-1，4-己二烯基)-1-甲基環(huán)己烯(2.74%)；庚醛(2.7%)；5，8，11-十七碳三炔酸甲酯(1.98%)；正十六烷酸(1.83%)；(E)-α-金合歡烯(1.75%)；α-谷甾醇醋酸酯(1.67%)；4'-叔丁基-2'，6'-二甲基-苯丁酮(1.55%)；1-甲基-3-(1-甲乙基)-苯(1.42%)；N-(1-乙基-1，2，3，4-四氫化-2，2，4-三甲基-7-喹啉)-丙酰胺(1.39%)；(3α，5α)-5-氯-豆甾烷-3-醇醋酸酯(1.31%)；1，2，4A，5，6，8A-六氫化-4，7-二甲基-1-(1-甲乙基)-萘(1.27%)；十六烷酸乙酯(1.2%)；[2S-[2α，5α(R*)]]-四氫化α，α，5-三甲基-5-(4-甲基-3-環(huán)己烯-1基)-2 -呋喃甲醇(1.13%)；[1S-(1α，4α，5α)]-1，8-二甲基-4-(1-丙烯基)-螺[4.5]癸-7-烯(1.05%)；(Z，Z)-9，12-亞油酸酰氯(1.03%)；1-氯-7-十七碳炔；8，9-脫氫-9-甲?；?環(huán)異長(zhǎng)葉烯(0.83%)；(E)-3，7，11-三甲基-1，6，10-十二烷三烯-3-醇(0.79%)；(R)-9，10-二氫-9-羥基-8，8-二甲基-2H，8H-苯并[1，2-b:3，4-b']二吡喃-2-酮(0.75%)；2-溴-4-氟苯基辛酸酯(0.63%)；α-衣蘭油烯(0.61%)；豆甾-3，5-二烯(0.56%)；[1-(1α，4Aα，8Aα)]-1，2，4A，5，6， 8A-六氫化-4，7-二甲基-1-(1-甲乙基)-萘(0.51%)；Platambin(0.48%)；2-甲基-4-孕甾-3，20-二酮(0.47%)；喇叭烯氧化物-(II)(0.44%)；γ-谷甾醇(0.44%)；異丁酸香葉酯(0.41%)；5，8，11-二十碳三炔酸甲酯(0.4%)；8，11-亞油酸甲酯(0.39%)；4-(3，3-二甲基-1-丁炔)-4-羥基-2，6，6-三甲基環(huán)己-2-烯酮(0.38%)；4-亞甲基-1-(1-甲乙基)二環(huán)[3.1.0]己-3-醇醋酸酯(0.37%)；6-乙基-3-辛基-鄰苯二甲酸丁酯(0.36%)；5 -(4-甲苯基)呋喃甲酸(0.36%)；(3A)-△5，22-豆甾烯-3-醇醋酸酯(0.36%)。

2號(hào)樣本共鑒定了39個(gè)化合物，占總含量的92.31%。按照含量從大到小的順序依次：α-甜沒(méi)藥醇(23.78%)；蛇床子素(14.06%)；(Z，Z)-9，12-亞油酸(8.48%)；[ S-(E，E)]-1-甲基-5-亞甲基-8 -(1-甲乙基)-1，6-環(huán)癸二烯(7.66%)；5，8，11-十七碳三炔酸甲酯(7.15%)；藍(lán)桉烯(4.41%)；正十六烷酸(2.84%)；(E)-α-金合歡烯(2.05%)；N-(1-乙基-1，2，3，4-四氫化-2，2，4-三甲基-7-喹啉)-丙酰胺(1.74%)；[1S-(1α，4Aα，8Aα)]-1，2，4A，5，8，8A-六氫化-4，7-二甲基-1-(1-甲乙基)-萘(1.58%)；鐮葉芹醇(1.54%)；α-甜沒(méi)藥烯(1.33%)；[2S-[2α，5α(R*)]]-四氫化-α，α，5-三甲基-5-(4-甲基-3-環(huán)己烯-1基)-2-呋喃甲醇(1.28%)；α-香茅醇，氯二氟醋酸酯(1.22%)；順式-α-甜沒(méi)藥醇(1.19%)；2，6，6-三甲基二環(huán)[3.1.1]庚-3-胺(0.97%)；(1α，4Aα，8Aα)-1，2，3，4，4A，5，6，8A-八氫化-7-甲基-4-亞甲基-1-(1-甲乙基)-萘(0.77%)；(E)-3，7，11-三甲基-1，6，10-十二烷三烯-3-醇(0.77%)；9，12-亞油酸乙酯(0.73%)；角鯊烯(0.67%)；1，2，4A，5，6，8A-六氫化-4，7-二甲基-1-(1-甲乙基)-萘(0.58%)；Platambin(0.56%)；(R)-9，10-二氫-9-羥基-8，8-二甲基-2H，8H-苯并[1，2-b:3，4-b']二吡喃-2-酮(0.55%)；5，8，11-二十碳三炔酸甲酯(0.54%)；(Z，Z，Z)-9，12，15-十八碳三烯酸-2，3-二羥基丙酯(0.53%)；3-(1，1-二甲基-2-丙烯基)-7-羥基-6-甲氧基-2H-1-苯并吡喃-2-酮(0.53%)；3α，7α，12α，24α，25-五羥基四甲基硅烷-5α-膽甾烷(0.52%)；α-依蘭烯(0.49%)；2-亞甲基-6，8，8-三甲基三環(huán)[5.2.2.0(1，6)]十一烷-3-醇(0.47%)；9-羥基-7H-呋喃[3，2-g][1]苯并吡喃-7-酮(0.37%)；雪松醇(0.36%);[1AR-(1AR*,2R*,3S*,4AR*,6S*,7S*,7AS*,8E,10R*,11R*,11AS*)]-2,7,10-三乙酰氧基-1，1A,2,3,4,6,7,10,11,11A-十氫-1，1，3，6，9-五甲基-4-氧-4A,7A-環(huán)氧-5H-環(huán)戊二烯并[α]環(huán)丙基[f]環(huán)十一碳-11-烯基-3-吡啶羧酸酯(0.36%)；豆甾烷-3，5-二烯(0.35%)；1，3，4-三甲基-3-環(huán)己烯-1-甲醛(0.34%)；4'-apo-α，psi-胡蘿卜素甲酸(0.33%)；(6α)-6，17，21-三[(三甲基硅基)氧基]-3，20-雙(w鄰甲基肟)-孕-4-烯 -3，11，20-三酮(0.31%)；[3R-(3α，5Aα，9α，9Aα)]-八氫化-2，2，5A，9-四甲基-2H-3，9A-亞甲基-1-惡庚因(0.31%)；鄰苯二甲酸-丁基-2-戊酯(0.3%)；順式-1-甲基-3-(1-甲基乙烯基)-環(huán)己烷(0.29%)。

3號(hào)樣本共鑒定了37個(gè)化合物，占總含量的91.99%。按照含量從大到小的順序依次：蛇床子素(16.79%)；α-甜沒(méi)藥醇(13.56%)；α-甜沒(méi)藥烯(11.94%)；(Z，Z)-9，12-亞油酸(11.69%)；蛇麻烯(8.96%)；(1α，3Aα，7α，8Aα)-2，3，6，7，8，8A-六氫化-1，4，9，9-1H-3A,7-四甲基-亞甲基薁(4.08%)；正十六烷酸(3.25%)；(1S-順式)-1，2，3，5，6，8A-六氫化-4，7-二甲基-1-(1-甲乙基)-萘(2.69%)；γ-衣蘭油烯(1.45%)；1-甲基-2-(1-甲乙基)-苯(1.43%)；9，12-亞油酸乙酯(1.22%)；(R)-1H-2，4A，5，6，7，8-六氫化-3，5，5，9-四甲基-苯并環(huán)庚烯(1.21%)；5，8-二甲氧基-2，3，10，10A-四氫化-1H，4AH-菲-4，9-二酮(1.21%)；順式-α-金合歡烯(1.1%)；3，6，6-三甲基二環(huán)[3.1.1]-2-庚烯(1.08%)；庚醛(1.04%)；順式-α-甜沒(méi)藥烯(0.76%)；亞油酸乙酯(0.73%)；豆甾烷-3，5-二烯(0.7%)；α-衣蘭油烯(0.63%)；1-甲基-4-(1-甲乙基)-1，3-環(huán)己二烯(0.61%)；[2S-[2α，5α(R*)]]-四氫化α，α，5-三甲基-5-(4-甲基-3-環(huán)己烯-1-基)-2-呋喃甲醇(0.6%)；1-壬烯(0.58%)；α-蓽澄茄油烯(0.58%)；4-甲基-1-(1-甲乙基)二環(huán)[3.1.0]-2-己烯(0.51%)；γ-松油烯(0.48%)；辛醇(0.38%)；1，2，3，4，4A，7-六氫化-1，6-二甲基-4-(1-甲乙基)-萘(0.34%)；鄰異丙烯基甲苯(0.29%)；[1S-(1α，7α，8Aα)]-1，2，3，5，6，7，8，8A-八氫化-1，4-二甲基-7-(1-甲基乙烯基)-薁(0.29%)；3，4-二氫-4-羥基-2H-吡喃(0.27%)；石竹烯氧化物(0.27%)；(R)-9，10-二氫-9-羥基-8，8-二甲基-2H，8H-苯并[1，2-b:3，4-b']二吡喃-2-酮(0.26%)；1，10-二氯癸烷(0.26%)；(-)-α-波旁烯(0.26%)；6-甲基-5-庚烯-2-酮(0.25%)；Z，Z，Z-1，4，6，9-十九烷四烯(0.24%)。

三種長(zhǎng)春七樣品的脂溶性成分含量總結(jié)為：萜類{樣品1 (35.38%)、樣品2(37.60%)、樣品3(39.99%)}；烷烴類化合物{樣品1(17.08%)、樣品2(10.88%)、樣品3(13.61%)}；脂肪酸類化合物{樣品1(11.65%)、樣品2(11.65%)、樣品3(14.94%)}；香豆素類化合物{樣品1(10.00%)、樣品2(14.06%)、樣品3(16.79%)}；酯類化合物{樣品1(5.74%)、樣品2(9.61%)、樣品3(1.95%)}；甾體化合物{樣品1(4.81%)、樣品2(1.18%)、樣品3(0.70%)}；酮類化合物{樣品1(2.68%)、樣品2(1.45%)、樣品3(1.72%)}；醇類化合物{樣品1(1.92%)、樣品2(2.52%)、樣品3(0.98%)}；醛類化合物{樣品1(2.70%)、樣品2(0.34%)、樣品3(1.04%)}；胺類化合物{樣品1(1.39%)、樣品2(2.71%)}；雜環(huán)化合物{樣品2(0.31%)、樣品3(0.27%)}；酰氯類化合物{樣品1(1.03%)}。

依據(jù)本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將三批長(zhǎng)春七脂溶性成分的共有成分總結(jié)見(jiàn)表1。

3討論本文首次對(duì)長(zhǎng)春七的脂溶性成分進(jìn)行了系統(tǒng)的分析研究，采用GC-MS檢出豐富的化學(xué)成分，此次實(shí)驗(yàn)研究中，三批長(zhǎng)春七的脂溶性成分的化學(xué)組成相似，萜類、烷烴類、脂肪酸類和香豆素類成分為長(zhǎng)春七脂溶性物質(zhì)的主要組成部分。長(zhǎng)春七脂溶性成分中含有大量的萜類成分，其中，α-甜沒(méi)藥醇具有抗?jié)?、抗炎、滅菌、溶解膽石的作用，可用于胃腸道潰瘍及膽結(jié)石的治療[4]。香豆素類成分，如蛇床子素具有強(qiáng)力的抗心律失常、擴(kuò)血管、保護(hù)心血管、提高記憶力、鎮(zhèn)靜、抗骨質(zhì)疏松、抗炎、抗癌藥理作用，肝保護(hù)作用，在臨床上可用于治療酒精性脂肪肝；不飽和脂肪酸及其酯，如(Z，Z)-9，12-亞油酸，亞油酸甲酯，亞油酸乙酯具有降血脂、降血壓、軟化血管、促進(jìn)微循環(huán)、抗氧化、抗炎、抗衰老和防止動(dòng)脈硬化等活性，廣泛用于醫(yī)藥保健產(chǎn)品等開(kāi)發(fā)[5-8]。本次研究闡明了長(zhǎng)春七脂溶性成分的物質(zhì)基礎(chǔ)，為其藥效作用的深入研究提供了良好的理論基礎(chǔ)，同時(shí)研究表明α-甜沒(méi)藥醇，蛇床子素，(Z，Z)-9，12-亞油酸等為該植物脂溶性成分的主要特征和活性成分，含量較高，可以作為該藥材品質(zhì)分析的指標(biāo)成分。

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(收稿2015-10-21；修回2015-12-10)

通訊作者△

【中圖分類號(hào)】R282

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.03.046

*陜西省中醫(yī)藥管理局課題(13-ZY037)