陸品高

(江蘇省啟東市合作鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，江蘇啟東 226200)

禽流感的研究進(jìn)展

陸品高

(江蘇省啟東市合作鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，江蘇啟東 226200)

禽流感是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的主要病毒性傳染病之一，由于其血清型眾多，流行毒株復(fù)雜，感染宿主范圍廣泛及傳播途徑多樣，給家禽防制工作帶來很大困難，給養(yǎng)殖業(yè)造成難以估量的經(jīng)濟(jì)損失。近年來由于新的毒株不斷出現(xiàn)，甚至對(duì)人也造成危害，所以禽流感是目前研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)之一。本文就禽流感病毒的概況、流感病毒的進(jìn)化機(jī)制、禽流感的流行現(xiàn)狀和檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行綜述。

禽流感；病原學(xué)；進(jìn)化機(jī)制，流行現(xiàn)狀；檢測(cè)技術(shù)

近幾年來，由于空氣的嚴(yán)重污染，生態(tài)環(huán)境遭受嚴(yán)重破壞，病原的不斷變異使得養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展受到威脅。其中禽流感就是危害養(yǎng)殖業(yè)的主要病毒性傳染病之一，由于其血清型眾多給此病的防治帶來了極大困難，通過交換基因片段不同亞型可實(shí)現(xiàn)重排，從而產(chǎn)生新的毒株[1]，同時(shí)由于其抗原變異的頻繁所出現(xiàn)的抗原飄移和轉(zhuǎn)變更增加了防治的難度[2]，所以對(duì)禽流感進(jìn)行深入研究顯得至關(guān)重要，本文就禽流感的病原、流感病毒的進(jìn)化機(jī)制、禽流感的流行現(xiàn)狀和檢測(cè)技術(shù)等方面進(jìn)行綜述。

1 禽流感病毒的概述

禽流感病毒屬于正黏病毒科流感病毒屬。根據(jù)核蛋白與基質(zhì)蛋白的差異性將流感病毒分為A、B、C三個(gè)型。其中A型流感病毒的宿主范圍最廣，可以感染多種禽類、人及其它哺乳動(dòng)物。流感病毒由兩種不同糖蛋白構(gòu)成其結(jié)構(gòu)外層，一種為血凝素（HA），另一種為神經(jīng)氨酸酶，這兩種成分是流感病毒亞型劃分的主要依據(jù)。目前流感病毒共分為17個(gè)HA亞型（H1-H17）和10個(gè)NA亞型（N1-N10），HA與NA的不同組合形成不同類型的AIV[3-4]，理論上HA和NA組合可形成144種不同的禽流感病毒，目前已確認(rèn)的可感染人的禽流感就有135種。

根據(jù)其致病力不同可分為高致病性禽流感病毒和低致病性禽流感病毒其中，H5、H7亞型屬于高致病性AIV，發(fā)病率和死亡率都很高，可引起禽類大量死亡；OIE將高致病性禽流感列為A類動(dòng)物疫病，我國也將其列為一類動(dòng)物疫病[5]。H1和H3亞型雖然屬于低致病性AIV，在禽類中無明顯的臨床癥狀，死亡率也較低，但在人類流感中曾因這兩種亞型AIV引起全球性大流行。自1997年香港發(fā)現(xiàn)第一例人感染H5N1禽流感以來，H5N1禽流感病毒在亞洲各國多次引發(fā)人類流感疫情；近期，H7N9禽流感疫情的爆發(fā)，進(jìn)一步提示了高致病性禽流感病毒疫情防治工作的重要性。

2 流感病毒的進(jìn)化機(jī)制

流感病毒只有借助宿主的酶系統(tǒng)才能進(jìn)行復(fù)制和繁殖，離開了宿主流感病毒就不能長期存活，所以宿主與流感病毒之間的相互作用在病毒的進(jìn)化過程中扮演重要的角色。宿主的免疫系統(tǒng)會(huì)對(duì)病毒的進(jìn)化形成免疫選擇壓力，流感病毒會(huì)利用點(diǎn)突變和基因重排的方式進(jìn)行免疫逃避。由于流感病毒是RNA病毒，RNA聚合酶的錯(cuò)配率很高，而且沒有3′—5′的校正修復(fù)功能，流感病毒在繁殖過程中很容易發(fā)生突變和錯(cuò)配，當(dāng)變異達(dá)到一定程度就會(huì)出現(xiàn)新的病毒亞群，引發(fā)新一輪流感疫情。流感病毒在宿主本身及各種環(huán)境因素所形成的選擇壓力下極易發(fā)生基因結(jié)構(gòu)和蛋白構(gòu)想的改變，致使病毒與宿主細(xì)胞的受體結(jié)合能力發(fā)生變化，最終影響到病毒的感染對(duì)象、感染能力和宿主范圍，這在流感病毒進(jìn)化過程中具有極大的意義。流感病毒只有在傳播過程中感染更多的個(gè)體時(shí)，才可以形成足夠大的準(zhǔn)種群，與此同時(shí)病毒受到的選擇壓力也會(huì)隨之增加，從而促使病毒進(jìn)化動(dòng)力相應(yīng)地增大。

流感病毒進(jìn)化在自然選擇壓下會(huì)呈現(xiàn)一定的方向性和穩(wěn)定性，并且流感病毒的不同基因具有不同的進(jìn)化特征。其中編碼表面糖蛋白的HA和NA基因進(jìn)化較快，而編碼內(nèi)部蛋白的M基因卻相對(duì)保守。由于流感病毒在感染宿主過程中面對(duì)的進(jìn)化壓力（如疫苗、抗病毒藥物以及宿主自身的天然免疫和特異性免疫）是不同的，因此會(huì)朝著不同的方向進(jìn)化，從而導(dǎo)致流感病毒的基因型和表型日益豐富，而相對(duì)豐富的基因資源又可以在大量的水禽中得以保存[6]。H7N9亞型流感病毒為一種新型禽流感病毒株，農(nóng)業(yè)部專家稱，據(jù)統(tǒng)計(jì)，此前全球共檢出25株H7N9亞型流感病毒，均來自野鳥，病毒可通過候鳥遷徙傳播，候鳥遷徙將病毒帶入我國的可能性較大。

3 禽流感的流行現(xiàn)狀

流感大流行被認(rèn)為是人類歷史上最恐怖的大流行之一，20世紀(jì)總共有3次人類流感的大爆發(fā)，包括1918年“西班牙流感”、1957年“亞洲流感”和1968年“香港流感”。1997年，香港發(fā)現(xiàn)高致病性H5N1亞型禽流感病毒跨越物種障礙使人感染并致死6人，致死率60%[8]，這是歷史上首次報(bào)道人類直接感染AIV，隨后，東南亞、北非和歐洲等地區(qū)都有人類散發(fā)感染禽流感病毒的報(bào)道。2009年由豬流感病毒、AIV和人季節(jié)性流感病毒構(gòu)成的重配病毒在全世界范圍內(nèi)大規(guī)模流行，以及近幾年H5N2、H5N5和H5N8亞型重組病毒的不斷出現(xiàn)，除了高死亡率的H5N1曾嚴(yán)重爆發(fā)外，H7亞型也有傳播，如1967年英國H7N3，1975年澳大利亞H7N7，1985年美國的H7N7，1991年至今，報(bào)道發(fā)生高致病力流感的國家有澳大利亞的H7N3和H7N7，巴基斯坦的H7N3等；2013年3月在我國上海和安徽發(fā)現(xiàn)并感染人的新的流感病毒株H7N9，都表明流感病毒的進(jìn)化出現(xiàn)了新的動(dòng)向。

禽流感一年四季均可發(fā)生，但多爆發(fā)于冬、春季節(jié)，尤其是秋冬、冬春之交，氣候變化大的時(shí)期。本病常突然發(fā)生，傳播快，一般呈流行性或大流行性。不同品種、不同日齡的禽均易感。其中在雞、火雞、以及某些野禽的易感性最高。鴨、鵝等水禽類的易感性較低，也可感染人類。本病的傳染源為感染禽流感和攜帶禽流感病毒的禽類、豬、馬、貂、海豹、鯨等，都可能成為傳染源。本病的傳播主要是水平傳播，主要經(jīng)呼吸道傳播，也可通過消化道及氣溶膠或直接傳播。

4 禽流感的診斷技術(shù)

早期診斷對(duì)于控制疫情具有重要的意義，但是由于禽流感的臨床癥狀變化較大，除了典型禽流感的臨床癥狀具有診斷意義外，大部分禽流感無法以臨床癥狀做出準(zhǔn)確診斷。所以要快速、準(zhǔn)確的診斷禽流感必須依靠實(shí)驗(yàn)室診斷，其診斷方法主要包括病原學(xué)、血清學(xué)和分子生物學(xué)3種類型。

4.1 病原學(xué)檢測(cè)

4.1.1 禽流感病毒的分離鑒定。AIV在雞胚中生長良好，將疑似病料經(jīng)適當(dāng)處理接種在9～10日齡的雞胚中，分離培養(yǎng)病毒。若檢測(cè)出有凝血活性，可進(jìn)一步確定分型；若無凝血活性，則認(rèn)為未分離到病毒，該方法具有精確、敏感的優(yōu)點(diǎn)，但操作繁瑣，耗時(shí)較長，需要1周左右時(shí)間。

4.1.2 電鏡技術(shù)。利用電鏡技術(shù)可以直觀準(zhǔn)確地鑒別病毒，根據(jù)病毒自身的形態(tài)、結(jié)構(gòu)等不同特征，能很快做出診斷。檢驗(yàn)結(jié)果與樣品制備技術(shù)、收取病料的部位和時(shí)間有關(guān)，電鏡法不能用于亞型及致病性測(cè)定且其受到設(shè)備的限制，投入資金較大。

4.2 血清學(xué)鑒定

4.2.1 血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)。該方法是診斷禽流感最常用的方法之一。由于家禽血清中存在著一些非特異性血凝抑制因子，在血凝抑制試驗(yàn)中常會(huì)造成一定數(shù)量的假陽性，因此在進(jìn)行血凝試驗(yàn)前，血清樣品除了需要滅活外，還應(yīng)該用高碘酸鉀除去非特異性血凝抑制因子。同時(shí)動(dòng)物感染后產(chǎn)生抗體需要時(shí)間長，對(duì)于感染時(shí)間短采用此法易產(chǎn)生假陰性。

4.2.2 瓊脂擴(kuò)散（AGP）試驗(yàn)。AGP試驗(yàn)的原理是利用可溶性抗原與抗體特異性結(jié)合，在瓊脂中擴(kuò)散形成濃度梯度來檢測(cè)AIV群特異性血清抗體的一種試驗(yàn)方法。該方法具有操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性高等特點(diǎn)，但是試驗(yàn)受反應(yīng)物濃度和時(shí)間的影響較大，容易出現(xiàn)假陽性的結(jié)果。

4.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。用酶標(biāo)記抗原或抗體，通過顯色反應(yīng)來檢測(cè)相應(yīng)抗體或抗原的一種方法。本法具有快速、敏感度高（其敏感度高于AGP試驗(yàn)和HI試驗(yàn)）的特點(diǎn)，因此，本法常用于大批樣品盒血清學(xué)檢疫。

4.3 分子生物學(xué)（RT-PCR技術(shù)）

RT-PCR技術(shù)從基因水平檢測(cè)AIV RNA基因，具有高度敏感性和特異性，大大縮短了對(duì)AIV的檢出時(shí)間。通過研究表明，多重RT-PCR快速檢測(cè)方法對(duì)AIV高致病性H5、H7亞型感染的診斷及制定有效的防治措施具有實(shí)用價(jià)值和指導(dǎo)意義[9]。

綜上所述，高致病性禽流感病毒引發(fā)的禽流感疫情波及范圍越來越廣，且禽流感病毒跨種間傳播感染人，并致死的病例不斷出現(xiàn)，使禽流感不僅僅是引起經(jīng)濟(jì)損失的問題，同時(shí)具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。由于禽流感病毒血清型眾多，變異頻繁，至今仍沒有一種疫苗能夠保證禽類能抵抗多種亞型禽流感病毒的攻擊。因此，利用新的分子生物學(xué)技術(shù)研制高效、安全、生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉、適用的禽流感疫苗對(duì)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展非常急迫。同時(shí)，我們可以通過加強(qiáng)動(dòng)物飼養(yǎng)管理，提高養(yǎng)殖水平，定期使用中草藥添加劑，提高機(jī)體抗病了，從而盡可能減少疾病的發(fā)生。

[1] 李永清，王欣，李媛.抗禽流感病毒M2蛋白單克隆抗體的制備及鑒定[J].細(xì)胞分子免疫學(xué)雜志，2008，（5）：78-82.

[2] 車永亮，胡軍.豬圓環(huán)病毒單克隆抗體的制備及應(yīng)用[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，（4）：65-69.