魏魯予

(新疆阿克蘇地區(qū)庫(kù)車縣獸醫(yī)站，新疆阿克蘇 842000)

庫(kù)車縣豬高致病性藍(lán)耳病血清學(xué)調(diào)查研究

魏魯予

(新疆阿克蘇地區(qū)庫(kù)車縣獸醫(yī)站，新疆阿克蘇 842000)

通過(guò)對(duì)庫(kù)車縣生豬規(guī)模場(chǎng)進(jìn)行調(diào)查采樣，進(jìn)行豬高致病性藍(lán)耳病血清學(xué)檢測(cè)，分析本縣區(qū)域內(nèi)斷奶仔豬、育肥豬、母豬、公豬高致病性藍(lán)耳病抗體效價(jià)，為全縣養(yǎng)殖戶的合理使用該疫苗提供參考依據(jù)。

豬；高致病性藍(lán)耳??；血清學(xué)

豬高致病性藍(lán)耳病是一種高度接觸性傳染病，豬是唯一的自然宿主，不同年齡、各種品種和用途的豬均可感染，但以妊娠母豬和1月齡以內(nèi)的仔豬最易感染?；疾∝i和帶毒豬是本病的主要傳染源。

目前，豬高致病性藍(lán)耳病病毒仍是優(yōu)勢(shì)流行毒株[1]，流行數(shù)年之后，其致病性和毒力仍未降低，危害大且引發(fā)疫情，一旦豬場(chǎng)發(fā)病，仍然呈現(xiàn)高發(fā)病率、高死亡率、母豬流產(chǎn)，特別是中、小型豬場(chǎng)與散養(yǎng)戶多發(fā)。主要侵害豬免疫系統(tǒng)細(xì)胞，引起局部免疫抑制，常導(dǎo)致繼發(fā)感染，豬群中若存在高致病性藍(lán)耳病，則豬群中發(fā)生流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎及木乃伊胎兒等癥狀[2]。由于高致病性藍(lán)耳病能破壞豬體免疫系統(tǒng)，并引起繁殖障礙和呼吸問(wèn)題，常給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大損失，因此，各國(guó)科技工作者對(duì)該病的研究也在不斷深人。近年來(lái)不少豬場(chǎng)采取強(qiáng)制免疫、普遍免疫和頻繁免疫的不合理、不科學(xué)的免疫方法。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)庫(kù)車縣37個(gè)豬場(chǎng)進(jìn)行采樣，分離血清394份，進(jìn)行血清學(xué)抗體檢測(cè)，進(jìn)而判斷在不同的飼喂階段豬高致病性藍(lán)耳病抗體水平的高低，為進(jìn)一步推進(jìn)豬高致病性藍(lán)耳病防控工作提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器設(shè)備

酶標(biāo)儀、小型離心機(jī)、微量振蕩器、微量移液器、稀釋板、漩渦振蕩器等。

1.2 試劑

LSI豬繁殖和呼吸綜合征抗體檢測(cè)試劑盒（北京天之泰生物科技有限公司提供），包括包被PRRS抗原的96孔板、洗液（×10）、樣本稀釋液（×3）、酶標(biāo)復(fù)合物、底物TMB、底物終止液希硫酸、陽(yáng)性對(duì)照血清、陰性對(duì)照血清、蒸餾水。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 試劑的準(zhǔn)備

洗液（×10）：取1份清洗液加入9份的滅菌水或去離子水中，配好的液體在7天內(nèi)用完；

樣本稀釋液（×3）：配制時(shí)用1體積的樣品稀釋液中加入2倍體積的蒸餾水，配好的液體在2d內(nèi)用完；

2.2 樣本的準(zhǔn)備

樣本需用樣本稀釋液進(jìn)行200倍稀釋：先吸取5μl樣本加入95μl的樣本稀釋液中，混勻；再吸取5μl稀釋了20倍的液體加入ELISA反應(yīng)板孔，再加入45μl的樣本稀釋液。

2.3 操作步驟

（1）將試劑放在室溫，并輕搖或者倒置混勻；

（2）將樣本和對(duì)照加入板孔中，加入50μl陽(yáng)性和陰性對(duì)照，及200倍稀釋的樣品在反應(yīng)板孔。陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照雙份；

（3）蓋上膜，在37℃作用60min；

（4）去膜，用300μl洗液洗滌3遍，并在吸水紙上將平板弄干；

（5）在每個(gè)孔中加入50μl酶標(biāo)抗體；

（6）蓋上膜，在37℃作用60min；

（7）去膜，用300μl洗液洗滌3遍，并在吸水紙上將平板弄干；

（8）加入50μl底物，輕搖板2s；

（9）將平板放在黑暗中在20～25℃作用10min；

（10）加入50μl終止液，輕搖板混勻；

（11）在450nm下讀數(shù)并記錄結(jié)果。

2.4 試驗(yàn)結(jié)果判定

（1）試驗(yàn)成立條件：陽(yáng)性對(duì)照的平均值OD450＞0.6，

而且陽(yáng)性對(duì)照平均值/陰性對(duì)照平均值＞0.4

（2）結(jié)果解釋 結(jié)果用IPRC表示，計(jì)算公式是：

IPRC＝【（OD450樣品－OD450陰性對(duì)照平均值）/（OD450陽(yáng)性對(duì)照平均值－OD450陰性對(duì)照平均值）】×100。

IPRC≤20.0，陰性；IPRC＞20.0，陽(yáng)性。

3 結(jié)果

通過(guò)間接ELISA實(shí)驗(yàn)對(duì)37個(gè)豬場(chǎng)的394份血清進(jìn)行豬高致病性藍(lán)耳病抗體檢測(cè)，全縣豬高致病性藍(lán)耳病體合格率達(dá)到74.4%，其中斷奶仔豬、育肥豬、母豬、公豬抗體合格率分別為66.7%、71%、89.8%、77.8%，具體結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 豬高致病性藍(lán)耳病血清學(xué)抗體效價(jià)表

圖1 豬高致病性藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果

4 討論

通過(guò)對(duì)394份血清學(xué)抗體檢測(cè)，可以看出，本縣在母豬水平上高致病性藍(lán)耳病防疫水平較好，其次是公豬，在斷奶仔豬方面，高致病性藍(lán)耳病防疫較弱，對(duì)此病的防疫不能忽視。

具體綜合防治措施如下：（1）建立穩(wěn)定的種豬群，堅(jiān)持自養(yǎng)自繁的原則，如引種，引入后必需建立隔離區(qū)，一般需隔離檢疫3-4周，健康者方可混群飼養(yǎng)[3]。（2）建立健全規(guī)模化豬場(chǎng)的生物安全，實(shí)行封閉式管理，生產(chǎn)流通實(shí)現(xiàn)全進(jìn)全出。（3）在科學(xué)的管理基礎(chǔ)上做好飼喂、環(huán)境控制、防疫、檢疫、隔離、消毒等工作，以提高豬群對(duì)其他病原微生物的抵抗力，從而降低繼發(fā)感染的發(fā)生率和由此造成的損失。（4）定期對(duì)豬舍和飼養(yǎng)區(qū)域進(jìn)行消毒，保持豬舍、飼養(yǎng)管理用具及環(huán)境的清潔衛(wèi)生。（5）做好藥物控制豬群的細(xì)菌性繼發(fā)感染的敏感階段。建議在妊娠母豬產(chǎn)前和產(chǎn)后階段、哺乳仔豬斷奶前和斷奶后、轉(zhuǎn)群等階段按預(yù)防量適當(dāng)在飼料中添加一些抗菌藥物，以防治豬群的細(xì)菌性繼發(fā)感染。（6）對(duì)發(fā)病豬場(chǎng)要嚴(yán)密封鎖，對(duì)發(fā)病豬場(chǎng)周圍的豬場(chǎng)也要采取一定的防范措施，避免疫病擴(kuò)散。對(duì)流產(chǎn)的胎衣、死胎及死豬做好無(wú)害化處理，產(chǎn)房徹底消毒，隔離病豬，對(duì)癥治療，改善飼喂條件等。

[1] 李公美，錢(qián)愛(ài)東，高云航，等.豬繁殖與呼吸綜合征病毒致病機(jī)制及防制研究進(jìn)展[J].中國(guó)獸藥雜志，2008，42（10）：40-44.