蘇 亮，李 江，歐偉業(yè)（上海海利生物技術(shù)股份有限公司，上海 201403）

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不同免疫程序?qū)ωi瘟免疫效果的影響

蘇 亮，李 江，歐偉業(yè)
（上海海利生物技術(shù)股份有限公司，上海 201403）

摘 要：通過采用阻斷ELISA抗體檢測法檢測了豬瘟母源抗體的消長規(guī)律并比較了5種豬瘟免疫程序的免疫效果。結(jié)果表明，仔豬體內(nèi)母源抗體水平隨著日齡的增長不斷下降，21～28日齡下降幅度最大，35日齡時母源抗體水平低于保護(hù)限值（抗體阻斷率為40%），抗體陽性率為44.64%。未進(jìn)行超前免疫組（C組、D組、E組）比較，最佳首免日齡為28日齡；超前免疫組中B組（0、60）免疫效果比A組（0、35、60）免疫效果好；綜合比較確定B免疫程序（0、60）為最佳免疫方案。通過研究為規(guī)?；i場制定合理的豬瘟免疫程序提供了較好的參考價值。

關(guān)鍵詞：豬瘟；母源抗體；首免日齡；免疫程序

豬瘟（CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種豬的高度接觸性傳染病[1]，由于其傳播速度快、病死率高，給養(yǎng)豬業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，長期以來許多國家將豬瘟列為疫病防治的重點對象，國際獸疫局（OIE）更是將其列為必須上報的傳染病之一[2]。我國在豬瘟預(yù)防和控制方面主要依靠豬瘟疫苗免疫，其中我國自主研制的豬瘟兔化弱毒疫苗免疫原性強、性能穩(wěn)定、安全性高，處于世界領(lǐng)先水平，一直以來在降低豬瘟的感染率和發(fā)病率發(fā)面取得了較為顯著的效果。但在免疫時受到仔豬體內(nèi)母源抗體的干擾及其他多種因素的影響，生產(chǎn)實踐中豬瘟仍然頻繁發(fā)生，并出現(xiàn)了多種新的流行特征，多表現(xiàn)為非典型豬瘟、溫和型豬瘟、仔豬先天感染及種豬持續(xù)感染等，利用傳統(tǒng)免疫程序免疫時，出現(xiàn)免疫失敗的情況也不斷增多[3]。因此，合理制定免疫程序是取得良好免疫效果的關(guān)鍵。本研究以新疆省石河子地區(qū)某規(guī)?；i場為研究對象，對母源抗體的消長進(jìn)行了監(jiān)測并對5種免疫程序的免疫效果進(jìn)行了比較，結(jié)合豬瘟抗體檢測，以期確定一個對石河子地區(qū)規(guī)?；i場行之有效的免疫程序。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物

試驗用豬來源于新疆石河子地區(qū)某規(guī)?；i場，選擇年齡、胎次、飼養(yǎng)狀況、環(huán)境條件相近的種母豬（母豬于配種前3個星期注射豬瘟活疫苗1頭份），所產(chǎn)仔豬用于免疫程序試驗，仔豬21日齡斷奶，在正常條件下飼養(yǎng)管理。

1.1.2 疫苗

豬瘟兔源弱毒凍干苗購自上海海利生物技術(shù)股份有限公司。

1.1.3 試劑盒

豬瘟抗體阻斷 ELISA試劑盒（批號為43200-A651）購自北京愛德士元亨生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 仔豬母源抗體的消長規(guī)律

選取從未免疫豬瘟疫苗的5窩仔豬，每窩定義為一組，共有仔豬56頭（11 頭/第1組，10頭/第2組，12頭/ 第3組，12頭/第4組，11頭/第5組），分別在吃初乳前、7 d、14 d、21 d、28 d和35 d進(jìn)行前腔靜脈采血，分離獲得血清，采用豬瘟抗體阻斷ELISA試劑盒檢測仔豬在不同日齡時母源抗體的變化規(guī)律并計算抗體陽性率。

1.2.2 不同免疫程序免疫效果的比較

試驗共設(shè)置5個免疫組，每個免疫組選取5窩豬。A組（52頭仔豬）：乳前首免1頭份、35日齡二免1頭份和60日齡三免1頭份的豬瘟疫苗；B組（54頭仔豬）：乳前首免1頭份、60日齡二免1頭份豬瘟疫苗；C組（54頭仔豬）： 21日齡首免1頭份、60日齡二免1頭份豬瘟疫苗；D組（53頭）28日齡首免1頭份、60日齡二免1頭份豬瘟疫苗；E組（52頭仔豬）35日齡首免1頭份、60日齡二免1頭份豬瘟疫苗。分別在免疫仔豬的7、14、21、28、35、42、49、56、63、70和140日齡時進(jìn)行前腔靜脈采血，每組每次隨機抽檢25頭，分離獲得血清，用豬瘟抗體阻斷ELISA試劑盒檢測豬瘟抗體水平。

表1　仔豬體內(nèi)母源豬瘟抗體平均阻斷率檢測結(jié)果

1.2.3 血樣的處理與抗體檢測

每次采血量為3～5 mL，3 000 r/ min 離心10 min，分離獲得血清， -20 ℃冷凍保存。全程采血結(jié)束后，集中利用豬瘟抗體阻斷ELISA檢測試劑盒按照說明書進(jìn)行抗體檢測。

表2　不同免疫組仔豬豬瘟抗體平均阻斷率檢測結(jié)果

2 結(jié)果

2.1 仔豬母源抗體的消長規(guī)律

由表1可知，新生仔豬在吃乳前，母源豬瘟抗體平均阻斷率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于保護(hù)限值（阻斷率為40%），抗體陽性率為0；仔豬在7日齡時，豬瘟抗體水平達(dá)到最高，抗體阻斷率范圍在68%～74%之間，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于保護(hù)限值，抗體陽性率為100%；隨著仔豬日齡的增長抗體水平逐漸下降，至35日齡時，其中有4組仔豬的豬瘟抗體平均阻斷率下降至40%以下，抗體陽性率只有44.64%；另外，我們發(fā)現(xiàn)仔豬在21～28日齡時，抗體下降幅度最大。

2.2 不同程序免疫仔豬豬瘟免疫抗體水平差異

由表2可知，A組(超免，35日齡，60日齡）、B組（超免，60日齡）和D組（35日齡，60日齡）在抗體監(jiān)測的全程阻斷率均高于保護(hù)界限；而C組（21日齡，60日齡）在仔豬42日齡、70日齡和140日齡時抗體阻斷率均低于保護(hù)限值；E組（35日齡，60日齡）在仔豬35日齡和42日齡時抗體阻斷率低于保護(hù)限值。

3 分析和討論

大量臨床試驗表明，豬瘟疫苗首免時間的確定與仔豬體內(nèi)豬瘟母源抗體水平的高低有著直接的關(guān)系。因此，本研究對某規(guī)?；i場的5窩仔豬母源抗體消長過程進(jìn)行了跟蹤監(jiān)測，結(jié)果表明：吃乳前，仔豬體內(nèi)基本無母源抗體存在，7日齡時豬瘟母源抗體水平最高，隨著仔豬日齡的增長豬瘟母源抗體呈逐漸下降趨勢，其中21日齡至28日齡母源抗體下降幅度最大，至35日齡時55.36%的仔豬已經(jīng)低于保護(hù)界限。

根據(jù)仔豬母源抗體的消長規(guī)律，設(shè)置5個免疫組，分別為A組（超免，35日齡，60日齡）、B組（超免，60日齡）、C組（21日齡，60日齡）、D組（28日齡，60日齡）和E組（35日齡，60日齡）。結(jié)合檢測結(jié)果對未超免組進(jìn)行分析，當(dāng)仔豬21日齡時，各組仔豬母源抗體阻斷率仍高于保護(hù)界限，抗體陽性率超過80%，如在該階段進(jìn)行豬瘟首免，可能高水平的豬瘟母源抗體會中和部分疫苗毒，使疫苗達(dá)不到抗原刺激的閾值，從而導(dǎo)致免疫失敗。在21日齡首免后1周，豬瘟抗體阻斷率出現(xiàn)了大幅度下降，可能就是由于母源抗體的干擾所致。許多延用傳統(tǒng)免疫程序[4]（20～23日齡首免、60～65日齡二免）的豬場出現(xiàn)免疫失敗的案例有力地證實了這一推斷是正確的。在E免疫組中，仔豬35日齡時，母源抗體阻斷率已低于保護(hù)限值，在35日齡首免后的1周，抗體水平才緩慢上升，但仍未達(dá)到保護(hù)限值，致使出現(xiàn)了一段免疫空白期，在此階段極易導(dǎo)致野毒感染[5]。而28日齡首免后，抗體阻斷值一直高于保護(hù)限值，至140日齡時，抗體阻斷值達(dá)到53%。因此可以認(rèn)為28日齡為未超免組中最佳的首免日齡。

采用超前免疫的目的是為了克服母源抗體的干擾，同時又能預(yù)防豬瘟病毒對仔豬的感染。試驗中超前免疫的A組和B組均在免疫后1周獲得最高的抗體保護(hù)率，高達(dá)74%，隨后抗體阻斷率呈現(xiàn)緩慢下降趨勢。A組于35日齡進(jìn)行了二免，二免1周后，抗體阻斷率不升反降，2周后抗體水平略有回升，在60日齡進(jìn)行三免后，抗體水平基本無變化，至140日齡時，抗體阻斷率升為54%。而B組推遲二免至60日齡，免疫后10 d左右抗體水平快速上升，至140日齡時，抗體阻斷率升為62%。這與羅勇[6]，林毅[7]的研究結(jié)果相符合，超前免疫既可以避免母源抗體的干擾，又能長時間保持仔豬體內(nèi)抗體水平，可保證絕大多數(shù)豬在出欄時仍能抵抗豬瘟病毒的感染。同時我們發(fā)現(xiàn)A組進(jìn)行了3次免疫，B組只進(jìn)行了2次免疫，但至140日齡時，A組的抗體阻斷率卻低于B組，這也證明免疫效果與免疫次數(shù)無關(guān)。

綜合比較5個免疫組的豬瘟抗體水平，A組、B組和D組從仔豬出生至140日齡抗體阻斷值均高于保護(hù)限值，但A組和D組抗體阻斷值的離散度較大，而B組抗體水平高，免疫次數(shù)少，免疫效果最好，因此認(rèn)為B免疫程序為最佳免疫程序。

參考文獻(xiàn)

[1] 張大華，王波，姜世金.仔豬豬瘟免疫程序的探討[J].山東畜牧獸醫(yī)，2011，32（7）：18-19.

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[5] 王火平.仔豬豬瘟超前免疫的研究[J].福建畜牧獸醫(yī)，2005，27(4)： 8-9.

[6] 羅勇，吳斌，黎作華，等. 規(guī)?；i場豬瘟免疫狀況調(diào)查及仔豬首免日齡的優(yōu)化[J].中國獸醫(yī)雜志，2010，46（3）：12-15.

[7] 林毅，馮金傳，張道永，等.規(guī)?；i場4種豬瘟免疫程序的免疫效果比較[J].中國獸醫(yī)科技，2000，30（4）：20-21.

收稿日期：（2015-10-21）