●韋磊 李金玲 趙敏

松針提取物對(duì)大鼠血管內(nèi)皮依賴性舒張的影響

●韋磊 李金玲 趙敏

據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)告，目前全世界每年死于心血管疾病的人數(shù)已占發(fā)達(dá)國(guó)家的近50%，發(fā)展中國(guó)家的25%。心血管疾病已成為第二大死亡因素。心血管疾病的發(fā)生又與血管內(nèi)皮功能障礙有關(guān)。當(dāng)血管內(nèi)皮受損時(shí)，血管舒張活性物質(zhì)PGI2與NO的產(chǎn)生減少，縮血管因子增多，打破血管平衡穩(wěn)態(tài)，最終導(dǎo)致一系列心血管疾病的發(fā)生。而我們研究的松針提取物的主要成分為松針黃酮。

松針提取物；血管；影響

1 研究背景

松針黃酮，pineneedie flavonoid，是從松針中提取出來的?？捎糜跀U(kuò)張動(dòng)脈血管，增加紅血球攜氧能力，促進(jìn)血液循環(huán)，改善毛細(xì)血管的機(jī)能，提高免疫力，增加荷爾蒙的分泌，使身體的組織年輕化。且pinececdie flamnoid對(duì)心血管系統(tǒng)有很好的療效，如心臟功能方面，擴(kuò)張血管、抑制ACEI酶和改善微循環(huán)，并有很強(qiáng)的抗炎作用。這些作用的機(jī)理表明松針黃酮具有消除氧和氮自由基作用。而我們研究的對(duì)松針提取物與血管內(nèi)皮依賴性舒張作用的研究文獻(xiàn)甚少，所以通過我們的研究可以為臨床治療提供另一種方法。

2 研究目的和意義

心血管疾病一直是造成人類死亡的一大疾病因素，松針黃酮可通過誘導(dǎo)血管平滑肌松弛而產(chǎn)生舒張血管的作用，且本研究為擴(kuò)大松針黃酮的臨床作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

通過本實(shí)驗(yàn)?zāi)芴矫魉舍樚崛∥飳?duì)血管內(nèi)皮舒張的影響。隨著中藥制劑的研發(fā)，將會(huì)為心血管疾病患者提供更多安全、有效、經(jīng)濟(jì)的治療藥物。

3 研究方法

（1）建立血管環(huán)模型。

（2）設(shè)計(jì)對(duì)照實(shí)驗(yàn)。

（3）通過BL-820s生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)采集數(shù)據(jù)，并進(jìn)行結(jié)果分析。

4 研究方法與步驟

4.1 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

（1）動(dòng)物：健康SD大鼠（260-300g）20只，由張店實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)中心提供，雌雄兼用。隨機(jī)分為內(nèi)皮完整祖，去內(nèi)皮組，每組10只。

（2）儀器及設(shè)備：手術(shù)操作器械（大小剪刀、組織剪、止血鉗、鑷子、縫合線、玻璃分針）、鼠板、注射器（1ml、2ml）、培養(yǎng)皿、恒溫灌流裝置、血管環(huán)連接裝置、脫脂棉

（3）藥品：松針黃酮，粉末狀，苯腎上腺素Phe（10-6mol/ L）、Krebs液（成分NaCl 118 mol/L， KCl 4.75 mol/L, KH2PO4 1.18 mol/L，MgSO4 1.18 mol/ L,， CaCl2 2.5 mol/L, NaHCO3 25 mol/L， glucose 11 mol/L，PH 7.4）、乙酰膽堿Ach（10-6mol/L）生理鹽水、烏拉坦。

（4）連接恒溫裝置，調(diào)節(jié)水溫為37℃，內(nèi)置Krebs液5ml于恒溫水浴槽中，持續(xù)通入95%O2加5%CO2的混合氣體。

4.2 血管環(huán)模型建立

（1）用烏拉坦對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔麻醉，迅速取出胸主動(dòng)脈，在Krebs液中分離結(jié)締組織。

（2）內(nèi)皮完整組：將剝離后的血管剪成2-3mm的血管環(huán)，動(dòng)作要輕柔，防止內(nèi)皮損傷，血管環(huán)用兩根不銹鋼微型三角掛鉤貫穿血管管腔，懸掛在浴管中，下方固定，上方以一根細(xì)鋼絲連于張力換能器。

（3）接張力換能器與 BL-820s生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)后，初始張力調(diào)為2g，平衡1.5h，每15min更換Krebs液1次。

（4）用乙酰膽堿（Ach）10-6mol/L,舒張苯腎上腺素（Phe）所致的收縮反應(yīng)以檢查內(nèi)皮完整性。若加入Ach后，血管內(nèi)皮舒張程度大于60%，則認(rèn)為內(nèi)皮基本完整，不產(chǎn)生舒張或者舒張幅度小于10%視為去內(nèi)皮成功。符合條件的血管環(huán)用于實(shí)驗(yàn)。檢查完畢后，將血管環(huán)沖洗至刺激前的狀態(tài)，再穩(wěn)定30min，每隔15min換液一次，然后進(jìn)一步檢測(cè)藥物對(duì)血管環(huán)張力的影響。

（5）去內(nèi)皮組：在制備去內(nèi)皮血管環(huán)時(shí)，先用棉花簽插入動(dòng)脈內(nèi)，輕輕地向同一方向旋轉(zhuǎn)數(shù)圈，再將血管剪成2-3mm的血管環(huán)。血管環(huán)用兩根不銹鋼微型三角掛鉤貫穿血管管腔，懸掛在浴管中，下方固定，上方以一根細(xì)鋼絲連于張力換能器。重復(fù)之前步驟做實(shí)驗(yàn)。

5 結(jié)果分析與討論

（1）松針黃酮對(duì)Phe引起的內(nèi)皮完整胸主動(dòng)脈環(huán)收縮張力的影響。以10-6mol/ L的Phe作用于血管環(huán)，引起血管收縮，作用約15min，收縮達(dá)穩(wěn)定后，將松針黃酮溶液分別加入到4個(gè)浴管中，使松針黃酮的最終濃度依次為10-4mol/L、10-5mol/L、10-6mol/L，最后一個(gè)加入生理鹽水，觀察血管環(huán)張力的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)三種實(shí)驗(yàn)濃度的松針黃酮對(duì)Phe引起的內(nèi)皮完整胸主動(dòng)脈環(huán)收縮均有舒張作用，且高濃度的松針黃酮抑制作用比低濃度的舒張作用強(qiáng)，而只加生理鹽水的血管環(huán)張力未變化。說明松針黃酮對(duì)血管內(nèi)皮有依賴性舒張的作用。經(jīng)方差分析處理，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

（2）松針黃酮對(duì)Phe引起的去內(nèi)皮胸主動(dòng)脈環(huán)收縮張力的影響以10-6mol/ L的Phe作用于血管環(huán)，引起血管收縮，作用約15min，收縮達(dá)穩(wěn)定后，將松針黃酮溶液分別加入到4個(gè)浴管中，使松針黃酮的最終濃度依次為10-4mol/L、10-5mol/L、10-6mol/L，最后一個(gè)加入生理鹽水，觀察血管環(huán)張力的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在加入松針黃酮后，血管環(huán)張力無明顯變化，說明松針黃酮對(duì)去內(nèi)皮的血管環(huán)無明顯影響。經(jīng)方差分析處理，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

6 結(jié)論與展望

松針黃酮對(duì)苯腎上腺素引起的大鼠內(nèi)皮的收縮有一定的抑制作用，即松針黃酮對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)有內(nèi)皮依賴性舒張作用。且可以看出高濃度的松針黃酮抑制作用比低濃度的舒張作用強(qiáng)。

松針黃酮應(yīng)用越來越引起人們的重視，人們對(duì)松針黃酮的研究越來越細(xì)化，也會(huì)逐步由器官到細(xì)胞以及分子水平去研究松針黃酮，若本驗(yàn)可以達(dá)到預(yù)期目標(biāo)，則松針黃酮可經(jīng)過鑒定應(yīng)用于臨床，對(duì)心血管疾病的治療更上一層臺(tái)階，會(huì)為人類的健康事業(yè)作出更大的貢獻(xiàn)。

（作者單位：齊魯醫(yī)藥學(xué)院）

[1]金紅峰，周云連，陳云龍等 .石斛對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用.中國(guó)雜志，2003,28（11）：1062

[2]賈國(guó)棟，劉國(guó)樹，汪海。鹽酸埃他卡林對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠動(dòng)脈血管的舒張作用 .中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2007,11（2）：234

[3]錢令波，崔潔，等 .乙醇對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用及其機(jī)制[J].中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志，2008,24（3）：263-273