許小凡， 姜婷婷， 劉 芳， 張曉芹, 史迎莉， 陳 瑜， 李 濤， 張 紅△

(1. 陜西中醫(yī)藥大學(xué) 醫(yī)學(xué)科研實(shí)驗(yàn)中心， 西安 712046； 2. 榆林市第一醫(yī)院病理科， 榆林 719000； 3. 陜西中醫(yī)藥大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院， 西安 712046)

大柴胡湯調(diào)控TGF-β/Smad信號通路對DBTC聯(lián)合乙醇誘發(fā)小鼠胰腺纖維化的防治作用*

許小凡1， 姜婷婷2+， 劉 芳3， 張曉芹3, 史迎莉1， 陳 瑜3， 李 濤3， 張 紅1△

(1. 陜西中醫(yī)藥大學(xué) 醫(yī)學(xué)科研實(shí)驗(yàn)中心， 西安 712046； 2. 榆林市第一醫(yī)院病理科， 榆林 719000； 3. 陜西中醫(yī)藥大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院， 西安 712046)

目的：探討大柴胡湯對二丁基二氯化錫(DBTC)聯(lián)合乙醇所致小鼠慢性胰腺炎胰腺纖維化中TGF-β/Smad信號通路的影響及大柴胡湯防治胰腺纖維化的作用機(jī)制。方法：昆明小鼠96只，隨機(jī)分成空白組(Con 組)、慢性胰腺炎組(CP組)、大柴胡湯治療組(DCHD組)(n=32)。一次性尾靜脈注射DBTC(8 mg/kg)聯(lián)合10%乙醇飼喂代替正常飲水復(fù)制小鼠CP模型。注射DBTC 3 d 后小鼠又隨機(jī)分為CP組和DCHD組，DCHD組予大柴胡湯(1 g /ml，6 g/kg·d)灌胃，并伴隨10%乙醇飼喂代替正常飲水。各組在1、2、4、8周分批處死小鼠(n=8)，觀察胰腺組織的形態(tài)學(xué)變化及血清淀粉酶、透明質(zhì)酸的變化；檢測胰腺組織MMP-1/TIMP-1 mRNA的表達(dá)以及胰腺組織Ⅰ型膠原、TGF-βRⅠ、p-Smad 2/3、Smad 7 蛋白的表達(dá)。結(jié)果：與空白組相比，CP組2周、4周血清淀粉酶及透明質(zhì)酸處于較高水平，8周時(shí)淀粉酶明顯降低，而透明質(zhì)酸水平進(jìn)一步升高(P<0.05)；DCHD組血清淀粉酶及透明質(zhì)酸含量明顯低于CP組(P<0.01)。與空白組相比，CP組胰腺組織COLA1、TGF-βRⅠ、p-Smad 2/3表達(dá)持續(xù)升高，Smad 7蛋白表達(dá)明顯減少；DCHD治療組可降低COLA1的表達(dá)水平有效抑制CP小鼠胰腺TGF-βRⅠ、p-Smad 2/3表達(dá)，使Smad 7蛋白表達(dá)升高。與空白組相比，CP 2周、4周胰腺M(fèi)MP-1 mRNA表達(dá)持續(xù)降低，TIMP-1 mRNA表達(dá)隨造模時(shí)間延長明顯升高(P<0.01)；DCHD組各時(shí)間點(diǎn)胰腺M(fèi)MP-1表達(dá)明顯增多，TIMP-1表達(dá)減少(P<0.05)。結(jié)論：大柴胡湯通過抑制TGF-β/Smad信號通路活化，調(diào)節(jié)MMP-1/TIMP-1的平衡，發(fā)揮防治慢性胰腺炎胰腺纖維化的作用。

胰腺纖維化；大柴胡湯；TGF-β/Smad；細(xì)胞外基質(zhì)；DBTC聯(lián)合乙醇

胰腺纖維化(pancreatic fibrosis)是慢性胰腺炎(chronic pancreatitis)進(jìn)展的主要病理改變[1]。研究發(fā)現(xiàn)，不同病因引起的慢性胰腺炎，其共同病理表現(xiàn)均是因胰腺纖維化而引起的胰腺組織結(jié)構(gòu)改變，導(dǎo)致胰腺內(nèi)、外分泌功能的不可逆性損傷[2]。因此，有效遏制胰腺纖維化，成為防治慢性胰腺炎進(jìn)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。大柴胡湯是臨床上運(yùn)用中醫(yī)藥治療胰腺炎的常用方劑，但是該方能否抑制胰腺纖維化及其相關(guān)機(jī)制目前尚不清楚[3]。本課題組模擬人類慢性胰腺炎發(fā)病原因，采用尾靜脈注射二丁基二氯化錫(dibutyltin dichloride，DBTC)聯(lián)合10%乙醇飲用復(fù)制小鼠慢性胰腺炎模型[4]，觀察大柴胡湯對慢性胰腺炎小鼠胰腺組織轉(zhuǎn)化生長因子β(transforming growth factor-β receptor Ⅰ，TGF-βRⅠ)、 p-Smad 2/3、Smad 7的影響，并檢測纖維化相關(guān)指標(biāo)：血清透明質(zhì)酸、胰腺組織COLA1及與細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)的MMP/TIMP表達(dá)的影響，探討大柴胡湯防治胰腺纖維化的作用及機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品、試劑和儀器

DBTC(sigma-aldrich，205494)；大柴胡湯(陜西中醫(yī)藥大學(xué)校醫(yī)院)：柴胡15 g、黃芩9 g、枳實(shí)9 g、芍藥9 g 、半夏9 g、大黃6 g、生姜15 g、大棗4枚，常規(guī)水煎濃縮至70 ml(1 g/ml)，分裝置于4℃保存?zhèn)溆谩Ｍ每剐∈螃?actin 單克隆抗體(博奧森，019982)；COLA1、TGF-β RⅠ、p-Smad 2/3 、Smad 7多克隆抗體(Santa Cruz，sc-25974、sc-402 、sc-11769、sc-1139)；羊抗兔 HRP IgG(Santa Cruz，sc-2004)；淀粉酶試劑盒(南京建成生物研究所，A001-1)；透明質(zhì)酸ELISA試劑盒(美國 R&D 分裝)；RNA抽提試劑盒、cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR試劑盒(Takara，9767 、RR036A、RR091A)；β-actin、MMP-1、TIMP-1特異性引物由南京金斯瑞生物公司設(shè)計(jì)合成；其他為當(dāng)?shù)卦噭┕咎峁┑姆治黾冊噭?；酶?biāo)儀(美國Bio-Tek ELX808IU)；Western blot電泳及轉(zhuǎn)膜系統(tǒng)(美國Bio-Rad)；PCR儀(美國ABI 7500)。

1.2 動(dòng)物分組及造模

健康昆明小鼠(購自第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心， 動(dòng)物合格證書號 0001249)96只(6～8周齡，體重20～25 g)，實(shí)驗(yàn)前置清潔級環(huán)境適應(yīng)性飼養(yǎng)1周(室溫20℃～25℃，常規(guī)食水，12 h晝夜交替)。小鼠隨機(jī)分為3組(n=32)：即空白組(Con)、模型組(CP)和治療組(DCHD)。

造模用DBTC 160 mg溶于40 ml無水乙醇，完全溶解后加生理鹽水至50 ml,搖至清亮(3.2 mg/ml)。造模時(shí)按照8 mg/kg經(jīng)尾靜脈一次性注射DBTC[3,4]。每組再分為造模后1周、2周、4周、8周4組(n=8)，DBTC尾靜脈注射后第3天，隨機(jī)將小鼠分為CP組和DCHD組，CP組在注射DBTC后予10%乙醇代替正常飲水；DCHD組給予大柴胡湯濃縮液(1 g/ml)灌胃(6 g/kg·d)，同時(shí)以10%乙醇飼飲代替正常飲水。空白組經(jīng)尾靜脈注射0.9%氯化鈉溶液(25 μl/10 g體重)，常規(guī)飼料及飲水。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)本采集與檢測 各組于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)麻醉處死動(dòng)物，取血分離血清；完整摘除胰腺并稱重，均勻分配胰腺頭部、中部、尾部，將一部分胰腺置于10%中性福爾馬林溶液浸泡固定，另一部分胰腺置入液氮中速凍，-80℃冰箱保存，待提取RNA及蛋白進(jìn)行PCR及Western blot檢測。

1.3.2 胰腺組織的病理學(xué)觀察 10%中性福爾馬林溶液固定的胰腺組織經(jīng)脫水、包埋、3 μm切片，HE染色觀察各組小鼠胰腺組織病理學(xué)改變。

1.3.3 血清淀粉酶和血清透明質(zhì)酸的檢測 各組小鼠取血分離所得血清，分別采用化學(xué)比色法及ELISA法檢測血清淀粉酶和血清透明質(zhì)酸的變化。

1.3.4 Western blot檢測胰腺組織Ⅰ型膠原的表達(dá) 取部分胰腺組織，加蛋白裂解液勻漿后冰上裂解30 min，10 000 r/min，4℃，離心10 min，提取上清采用BCA法進(jìn)行蛋白定量后，將蛋白樣品統(tǒng)一稀釋至4 μg/μl；SDS-PAGE膠電泳，電轉(zhuǎn)移至PVDF膜，封閉液(5%脫脂奶粉)封閉1 h，TBST洗脫，滴加一抗[分別為β-action(1∶1 000)；COLA1、TGF-β RⅠ、p-Smad 2/3、Smad 7(1∶500)]至PVDF膜，4℃搖床上孵育過夜。TBST漂洗，羊抗兔HRP二抗(1∶1 000稀釋)室溫孵育1.5 h。TBST漂洗，滴加ECL發(fā)光液于PVDF膜上，在全自動(dòng)凝膠成像分析儀上，根據(jù)Marker進(jìn)行掃描成像。

1.3.5 RT-PCR檢測胰腺組織MMP-1/TIMP-1mRNA的表達(dá) 取部分胰腺組織，加裂解液冰上勻漿，將裂解液移至gDNA Eraser Spin Column去除雜質(zhì)以及gDNA，所得濾液中加入等體積的70%乙醇，混勻后移至RNA Spin Column結(jié)合RNA，以Buffer RWA及RWB分別清洗RNA Spin，最后以RNase Free ddH2O洗脫RNA，NaNo Drop 2000c核算測定儀測取RNA濃度，觀察測取RNA的260/280比值以判斷所提取的RNA純度。依據(jù)試劑盒操作反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，RT-PCR檢測胰腺組織MMP-1/TIMP-1mRNA水平。β-actin特異性引物上游序列為：5′-ACCACACCTTCTACAATGAG-3′，下游：5′-ACGACCAGAGGCATACAG-3′；MMP-1特異性引物上游序列為：5′-GTGAATGGCAAGGAGATGATGG -3′，下游：5′-ACGAGGATTGT TGTGAGTAATGG -3′；TIMP-1特異性引物上游序列為：5′-CATCTCTGGCATCTGGCATCC-3′，下游：5′-CGCTGGTATAAGGTGGTCTCG -3′。以cDNA為模板，擴(kuò)增反應(yīng)體系(20 μl體系)為：上游引物0.6 μl，下游引物0.6 μl，PCR反應(yīng)試劑10 μl，ROX Reference Dye II 0.4 μl，模板5 μl，ddH2O 3.4 μl。擴(kuò)增條件：50℃預(yù)熱2 min(一個(gè)循環(huán))；95℃預(yù)變性10 min(一個(gè)循環(huán))；95℃變性15 s，60℃延伸30 s，72℃退火30 s(40個(gè)循環(huán))，熒光信號采集在72℃退火30 s處進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 胰腺組織的病理學(xué)變化

HE染色結(jié)果顯示，空白組胰腺無損傷，胰腺小葉間排列緊密；DBTC尾靜脈注射聯(lián)合飲用乙醇2周可見胰腺組織水腫，小葉間間距擴(kuò)大，間質(zhì)中有炎癥細(xì)胞浸潤；造模后4周炎細(xì)胞浸潤進(jìn)一步增多，部分胰腺小葉內(nèi)腺泡細(xì)胞壞死，取而代之大量纖維組織；8周可見胰腺實(shí)質(zhì)片狀壞死，胰腺小葉內(nèi)的腺泡及胰島消失，纖維組織廣泛增生。而大柴胡湯灌胃治療后各組各時(shí)間點(diǎn)胰腺炎癥損傷及纖維化程度明顯減輕(圖1，見彩圖頁Ⅱ)。

2.2 血清淀粉酶活性及透明質(zhì)酸變化

與空白組比較，CP組1周、2 周、4 周血清淀粉酶持續(xù)升高，有顯著性差異(P<0.01)；而DCHD組 1周、2 周、4 周血清淀粉酶活性明顯下降，與CP組相比差異具有顯著性(P<0.01)。CP組8 周血清淀粉酶顯著降低，與空白組相比有顯著性差異(P<0.01)；而DCHD組8 周血清淀粉酶活性明顯升高，與CP組相比差異具有顯著性(P<0.01)。

與空白組相比CP組各時(shí)間點(diǎn)血清透明質(zhì)酸明顯升高，有顯著性差異(P<0.01)；經(jīng)大柴胡湯灌胃治療后血清透明質(zhì)酸明顯降低，與CP組比較存在顯著性差異 (P<0.01，表1)

GroupAmylase(U/l)Hyaluronieacid(ug/l)Control2w4888．23±79．333．96±2．024w4574．13±87．773．67±2．368w4685．27±78．433．89±2．45CP2w6036．42±129．35??7．26±2．36??4w6695．17±87．77?6．42±3．43??8w1508．2±438．37?9．19±2．35??CP+DCHD2w5328．26±219．08##4．96±2．414w5879．34±156．47##3．79±3．36##8w3098．97±531．64##4．23±2．53##

CP: Chronic pancreatitis; DCHD: Dibutyltin dichloride

*P<0.05,**P<0.01vscontrol group；?##P<0.01vsCP group

2.3 胰腺組織Ⅰ型膠原、TGF-βRⅠ、P-Smad 2/3、Smad 7的表達(dá)變化

空白組小鼠胰腺未見Ⅰ型膠原、TGF-βRⅠ、P-Smad 2/3的表達(dá)；CP組各時(shí)間點(diǎn)胰腺Ⅰ型膠原、TGF-βRⅠ、P-Smad 2/3的表達(dá)量均有明顯增加，而Smad 7的表達(dá)量明顯減少；DCHD組胰腺Ⅰ型膠原、TGF-βRⅠ、P-Smad 2/3的表達(dá)量明顯少于CP組，胰腺Smad 7的表達(dá)則明顯增加(圖2)。

Fig. 2 The effects of DaChaiHu Decoction on the expressions of type I collagen, P-Smad 2/3, Smad 7, TGF-βR1 in the pancreas of chronic pancreatitis at different time points

2.4 胰腺組織MMP-1/TIMP-1mRNA的表達(dá)變化

與空白組相比，CP組小鼠胰腺組織MMP-1mRNA表達(dá)持續(xù)降低， TIMP-1 mRNA表達(dá)明顯升高(P<0.01)。經(jīng)大柴胡湯灌胃治療后，可明顯增加CP胰腺M(fèi)MP-1 mRNA表達(dá)；降低TIMP-1 mRNA表達(dá)，與模型組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)， 8周組胰腺TIMP-1 mRNA維持在一個(gè)水平，與CP 8周組比較無顯著性差異(表2)。

Tab. 2 The effects of DaChaiHu Decoction on the MMP-1 and TIMP-1 mRNA levels in the pancreas of mice with chronic pancreatitis(±s，n=8)

GroupMMP?1TIMP?1Control2w1．00±0．631．00±0．074w1．00±0．421．00±0．098w1．00±0．191．00±0．05CP2w0．64±0．3414．90±5．18??4w0．32±0．30?9．59±2．31?8w0．08±12．25??3．15±1．06CP+DCHD2w13．11±7．09#5．01±1．60#4w4．39±2．03#3．64±0．81##8w4．38±0．45##4．98±0．01

CP: Chronic pancreatitis; DCHD: Dibutyltin dichloride

*P<0.05,**P<0.01vscontrol group；?#P<0.05，##P<0.01vsCP group

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)[5]，我國慢性胰腺炎以膽源性疾病引發(fā)的膽管狹窄、梗阻為主要病因，而流行病學(xué)調(diào)查顯示，近年來酒精引發(fā)的慢性胰腺炎在我國也日趨增多[6]。DBTC屬于有機(jī)錫類脂溶性物質(zhì)，經(jīng)尾靜脈注射后可直接引發(fā)膽管上皮細(xì)胞壞死，造成胰膽管阻塞，這一特點(diǎn)與臨床上膽源性胰腺炎的發(fā)病類似[7，8]。本課題組曾采用DBTC尾靜脈注射聯(lián)合長期飲用乙醇的方法，在小鼠成功模擬出了人類慢性胰腺炎的特征性病理改變，誘發(fā)了小鼠慢性胰腺炎胰腺纖維化的模型[7，8]。

轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)是迄今最為肯定的促進(jìn)組織纖維化的細(xì)胞因子[9，10]。TGF-β在纖維化疾病，尤其是以細(xì)胞外基質(zhì)降解失常為發(fā)病機(jī)理的疾病進(jìn)展中起關(guān)鍵作用[11，12]。TGF-β信號通路的關(guān)鍵信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子為胞質(zhì)蛋白Smads[13]。研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1通常先與其Ⅱ型受體結(jié)合,活化Ⅱ型受體蛋白激酶，并使Ⅰ型受體磷酸化，繼而直接作用于Smad 2、3, 使Smad 2和Smad 3發(fā)生磷酸化、構(gòu)型改變而活化，活化的Smad 2和Smad 3與Smad 4結(jié)合形成異源寡聚復(fù)合物, 轉(zhuǎn)移進(jìn)入胞核內(nèi)，作為轉(zhuǎn)錄因子與靶基因的特異序列相結(jié)合，調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄，如上調(diào)I型、III型膠原基因的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)膠原的合成，發(fā)揮組織損傷修復(fù)、連接等生理作用[14]。而Smad 7可與Smad 2或Smad 3競爭結(jié)合TGF-βⅠ型受體或Smad 4，阻斷Smad 2或Smad 3被磷酸化并轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核內(nèi)，抑制TGF-β1信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著造模時(shí)間的延長，胰腺組織中TGF-βRⅠ、P-Smad 2/3的蛋白表達(dá)量明顯升高，而Smad 7的表達(dá)持續(xù)降低，提示慢性胰腺炎進(jìn)展中TGF-β可以與胰腺的TGFβR結(jié)合，促進(jìn)Smad 2/3的磷酸化，啟動(dòng)Smad信號通路促進(jìn)胰腺纖維化的進(jìn)展。

同時(shí)我們也發(fā)現(xiàn)CP模型胰腺組織MMP-1 mRNA表達(dá)明顯減少，而其抑制劑TIMP-1 mRNA表達(dá)增加?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)動(dòng)態(tài)平衡的重要酶系，MMPs可被其特異性抑制因子TIMPs抑制，兩者的動(dòng)態(tài)平衡在ECM的合成、降解中發(fā)揮重要作用[16]。已有研究報(bào)道，在胰腺纖維化進(jìn)展中，MMPs/ TIMPs失衡是細(xì)胞外基質(zhì)沉積的主要機(jī)制之一，導(dǎo)致膠原沉積最終形成胰腺纖維化[17]。

中醫(yī)將慢性胰腺炎歸結(jié)為 “腹痛、胃心痛、脅痛、泄瀉、瘕”等病癥范疇，多由外邪侵襲、情志失暢、飲食不節(jié)、恣食肥甘、蟲積內(nèi)積或創(chuàng)傷等導(dǎo)致肝膽不利，濕熱積滯中焦，中焦氣機(jī)不暢，繼而氣滯血瘀生濕蘊(yùn)熱，邪熱壅塞[18]。因此，臨床治療慢性胰腺炎宜在疏肝理氣，活血化瘀的基礎(chǔ)上使用清熱化濕，通里瀉熱的藥物。大柴胡湯由柴胡、黃芩、大黃、枳實(shí)、半夏、芍藥、生姜、大棗組成，具有和解少陽，內(nèi)瀉熱結(jié)之功效。已有臨床實(shí)踐表明，大柴胡湯在緩解慢性胰腺炎臨床癥狀和改善預(yù)后方面效果顯著[19，20]。本研究發(fā)現(xiàn)大柴胡湯可以抑制TGF-β/Smad信號通路的活化，調(diào)節(jié)MMP-1/TIMP-1的平衡，有效遏制CP病程進(jìn)展中ECM合成與降解失衡，進(jìn)而減輕胰腺纖維化，對慢性胰腺炎發(fā)揮防治作用。

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Effect of DaChaiHu Decoction on pancreatic fibrosis induced by DBTC combined with alcohol and the mechanism of TGF-beta/Smad signaling pathway

XU Xiao-fan1, JIANG Ting-ting2+, LIU Fang3, ZHANG Xiao-qin3, SHI Ying-li1, CHEN Yu3, LI Tao3, ZHANG Hong1△

(1. Medical Research Center, Shanxi University of Chinese Medicine, Xi'an 712046; 2. Department of Pathology, Yulin First Hospital， Yulin 719000; 3. College of Basic Medicine， Shanxi University of Chinese Medicine, Xi’an 712046, China)

Objective: To investigate the effects of transforming growth factor-β (TGF-β) and Smad in chronic pancreatitis (CP) induced by dibutyltin dichloride (DBTC) combined with ethanol, and the effect for prevention and treatment of pancreatic fibrosis by DaChaiHu Decoction (tradeiional Chinese medicine). Methods: Ninety-six healthy male Kunming mice were randomly divided into control group (Con group), chronic pancreatitis (CP group) group, Dachai Hu decoction treatment group (DCHD group) (n=32). Then the mice were treated with DBTC 8 mg/kg by tail vein injection and fed with 10% ethanol replacing the normal drinking water to replicate mouse CP model. After three days of modeling the mice were randomly divided into CP group and DCHD group. The mice in DCHD group were administered intragastrically with DaChaiHu Decoction (1 g/ml, 6 g/kg·d) at the following 8 weeks. After modeling for 1 week, 2 weeks, 4 weeks and 8 weeks, the mice were anesthetized and sacrificed(n=8). The morphology and the degree of fibrosis changes of pancreatic tissue were detected by HE staining. The protein expressions of type I collagen and TGF beta R I, p-Smad 2/3 and Smad 7 in pancreatic tissue were detected by Western blot assay. The expressions of MMP-1/TIMP-1 mRNA in pancreatic tissue were detected by RT-PCR. Results: Compared with control group, DBTC combined with ethanol induced CP with increased activity of serum amylase and hyaluronic acid level. While in DCHD group, the activity of amylase and hyaluronic acid level were decreased significantly. Compared with control group, the protein expressions of COLA1, TGF beta R I, p-Smad 2/3 in CP Group were elevated, but the expression of Smad 7 was significantly reduced; In DCHD treatment group, the expression of TGF beta R I, p-Smad 2/3 and COLA1 were reduced, and the protein expression of Smad 7 was increased. In 2w and 4w, the level of MMP-1mRNA continued to decrease, while TIMP-1mRNA expression was increased significantly (P<0.01). At each time point of DCHD group, the expression of MMP-1 were markedly increased and TIMP-1 were reduced, compared with those of the CP group (P<0.05). Conclusion: DaChaiHu Decoction play a role in the prevention and treatment of chronic pancreatitis and the development of fibrosis, the mechanism may related to inhibit the activation of TGF beta /Smad signaling pathway, and regulate the balance between synthesis and degradation of extracellular matrix.

pancreatic fibrosis; dachaihu decoction; TGF beta/Samd; extracellular matrix; DBTC combined alcoholo

國家自然科學(xué)基金(81102725)；陜西省教育廳自然科學(xué)重點(diǎn)科研計(jì)劃(15JS027)

2016-03-01

2016-06-23

R363; R576

A

1000-6834(2016)05-444-05

10.13459/j.cnki.cjap.2016.05.015

△【通訊作者】Tel： 029-38183453； E-mail： zhangh1227@163.com；?+： 共同第一作者