江國(guó)華，黃 健，陳淑映

（廣東省佛山市中醫(yī)院，廣東 佛山 528200）

三七化瘀口服液高效液相色譜指紋圖譜的建立

江國(guó)華，黃 健，陳淑映

（廣東省佛山市中醫(yī)院，廣東 佛山 528200）

目的 探討構(gòu)建三七化瘀口服液指紋圖譜的技術(shù)要點(diǎn)及檢測(cè)條件，建立能反映該制劑整體特征的高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，為提高制劑質(zhì)量穩(wěn)定性和保證臨床用藥的安全有效提供依據(jù)。方法 色譜柱為Shim－pack VP－ODS柱（250 mm×4．6 mm，5 m），流動(dòng)相為（A）乙腈－（B）0．05%磷酸水(pH＝5，梯度洗脫)，流速為1 mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm，進(jìn)樣量為10 L。結(jié)果 10個(gè)不同批次樣品的相似度均在0．9～1．0間。結(jié)論 該色譜圖可作為三七化瘀口服液指紋圖譜，用于三七化瘀口服液的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

三七化瘀口服液；指紋圖譜；高效液相色譜法

三七化瘀口服液為我院中醫(yī)骨傷科的優(yōu)良驗(yàn)方，由三七和延胡索經(jīng)醇提濃縮后調(diào)配分裝而成，具有活血化瘀、消腫止痛、舒筋通經(jīng)、強(qiáng)身健體的功效，經(jīng)多年臨床實(shí)踐證明，對(duì)跌打損傷、各種血癥、痛癥等癥療效顯著[1－2]。目前，我院制劑中心采用2010年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄ⅥB薄層色譜法對(duì)三七化瘀口服液的質(zhì)量進(jìn)行控制，以三七為對(duì)照藥材，以三七的活性成分三七皂苷R1和人參皂苷Rg1，Rb1為對(duì)照品。質(zhì)量合格標(biāo)準(zhǔn)為：供試品色譜中，在與對(duì)照品和對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)；置紫外光燈下檢視，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。此質(zhì)量控制方法僅對(duì)復(fù)方制劑三七化瘀口服液中的主要成分三七進(jìn)行定性檢測(cè)，不能反映制劑的全面質(zhì)量。指紋圖譜技術(shù)[3－4]是中藥材及中成藥質(zhì)量控制的一種新技術(shù)。本研究中采用高效液相色譜（HPLC）梯度洗脫法建立了三七化瘀口服液的HPLC指紋圖譜，可反映該制劑整體特征的質(zhì)量，提供整體質(zhì)量控制依據(jù)，從而提高制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性和保證臨床用藥的安全有效。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

LC－100PLUS型雙泵高效液相色譜儀(上海五豐科學(xué)儀器有限公司)，配有 UV100型紫外檢測(cè)器，WS100型色譜工作站；KH300E型超聲清洗機(jī)；BP211D型分析天平。

1．2 試藥

甲醇、乙腈(天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司)均為色譜純；水為新鮮重精餾水；磷酸(南京化學(xué)試劑一廠)為分析純。延胡索乙素（批號(hào)為110726－201213）、人參皂苷Rg1（批號(hào)為110703－201128）、人參皂苷Rb1（批號(hào)為110704－201122）均為化學(xué)對(duì)照品，供含量測(cè)定用，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；樣品為我院制劑中心自制的不同批次三七化瘀口服液，批號(hào)依次為11214171，11214172，11214173，11214181，11214182，11214183，11214191，11214192，11214193，11214201。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：Shim－pack VP－ODS柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）－0．05%磷酸水（B），pH＝5，線性梯度洗脫見(jiàn)表 1；流速為 1 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：203 nm；進(jìn)樣量：10 μL。所有組分均在90 min內(nèi)洗脫出柱。

2．2 溶液制備

對(duì)照品溶液：精密稱(chēng)取4種對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含延胡索乙素0．05 mg、人參皂苷Rg10．1 mg、人參皂苷Rb10．1 mg的溶液，經(jīng)0．45 μm有機(jī)系微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

表1 流動(dòng)相線性梯度表

供試品溶液：精密量取三七化瘀口服液5 mL，置50 mL具塞錐形瓶中，經(jīng)真空干燥后，精密加入甲醇25 mL，精密稱(chēng)定，超聲10 min，放冷，精密稱(chēng)定，用甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，濾過(guò)，精密量取1 mL續(xù)濾液，加入5 mL定量瓶中，用甲醇定量至5 mL，再經(jīng)0．45 μm有機(jī)系微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2．3 方法學(xué)考察

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一樣品溶液（編號(hào)1），分別于0，2，4，8，16，24 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，考察相似度的一致性。利用2004年A版《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，結(jié)果的相似度均值為0．982，相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的 RSD為0．16%(n＝6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

精密度試驗(yàn)：取同一樣品溶液（編號(hào)1），連續(xù)進(jìn)樣6次，考察相似度的一致性。利用2004年A版《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，結(jié)果的相似度均值為0．994，相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD為0．13%(n＝6)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批次樣品（編號(hào)1），按供試品溶液的制備方法平行制備6份進(jìn)樣測(cè)定，考察相似度的一致性。利用2004年A版《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，結(jié)果的相似度均值為0．996，相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的 RSD為0．14% (n＝6)，表明方法重復(fù)性良好。

2．4 指紋圖譜測(cè)定

將10批樣品分別按2．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依次進(jìn)樣，按擬訂色譜條件測(cè)定，記錄色圖譜，見(jiàn)圖1。并在相同條件下測(cè)定對(duì)照品溶液，見(jiàn)圖2。

圖2 對(duì)照品溶液HPLC指紋圖譜全圖

2．5 指紋圖譜分析與評(píng)價(jià)

2．5．1 共有峰標(biāo)定

根據(jù)10批次供試品結(jié)果，標(biāo)定共有指紋峰12個(gè)，共有峰面積大于總峰面積的90%，其中4，5號(hào)峰由于未能達(dá)到基線分離，故兩者的峰面積合計(jì)為一峰。而3號(hào)峰穩(wěn)定，分離度良好，且為最強(qiáng)峰。故以3號(hào)峰作參照峰，其余各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)保留峰面積以及標(biāo)準(zhǔn)偏差見(jiàn)表2和表3。

2．5．2 相似度評(píng)價(jià)

將10批次供試品測(cè)定數(shù)據(jù)結(jié)果導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》2004年A版軟件系統(tǒng)進(jìn)行譜峰差異性評(píng)價(jià)和整體相似度評(píng)價(jià)，并計(jì)算其共有模式，見(jiàn)圖3和表4。

表2 “三七化瘀口服液”指紋圖譜共有峰相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積及差異性比較

表3 三七化瘀口服液10批次樣品各共有峰相對(duì)峰面積

圖3 三七化瘀口服液共有模式均值圖（信號(hào)放大1倍）

3 討論

中藥制劑質(zhì)量的優(yōu)劣直接影響到臨床用藥的安全性和有效性，中藥制劑質(zhì)量控制是以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，應(yīng)用現(xiàn)代儀器分析手段和方法研究分析中藥制劑的質(zhì)量，對(duì)于保障臨床用藥安全、合理、有效有重要意義。醫(yī)院制劑具有針對(duì)性強(qiáng)、供應(yīng)及時(shí)、方便患者、需求量小等特點(diǎn)，是工業(yè)制劑的有益補(bǔ)充，但由于受到生產(chǎn)工藝、設(shè)備等限制，醫(yī)院制劑的質(zhì)量穩(wěn)定性往往不及正規(guī)制藥企業(yè)的產(chǎn)品。因此，醫(yī)院制劑中心應(yīng)加強(qiáng)制劑的質(zhì)量控制，通過(guò)制訂科學(xué)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)來(lái)控制制劑質(zhì)量，有利于制劑質(zhì)量穩(wěn)定、保證使用安全，也有利于制劑工藝流程的改進(jìn)。

本研究中采用HPLC法構(gòu)建三七化瘀口服液的指紋圖譜，專(zhuān)屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，操作簡(jiǎn)便，符合國(guó)家規(guī)定[5]的要求，能反映該制劑整體特征的質(zhì)量，可作為三七化瘀口服液質(zhì)量評(píng)價(jià)的依據(jù)。

[1]鐘廣玲，陳志維．陳渭良骨傷科臨證精要[M]．北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社，2001：109．

[2]沈楚龍，陳志維．復(fù)方三七口服液治療創(chuàng)傷早期86例[J]．新中醫(yī)，2006，38（10）：81．

[3]任 非，智麗敏，付 穎，等．中藥指紋圖譜色譜技術(shù)及其在質(zhì)量控制中的應(yīng)用與研究[J]．河北醫(yī)藥，2010，32（21）：3 075－3 078．

[4]曹 玲，王志剛，王連芝，等．色譜法在中藥指紋圖譜研究中的應(yīng)用 [J]．中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2012，19（1）：16－17．

[5]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局．關(guān)于印發(fā)《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求（暫行）》的通知[J]．中成藥，2000，22（10）：671．

HPLC Fingerprints of Sanqi Huayu Oral Liquid

Jiang Guohua,Huang Jian，Chen Shuying
（Foshan Traditional Chinese Medicine Hospital，F(xiàn)oshan，Guangdong，China 528200）

Objective To investigate the fingerprinting techniques and detection conditions of Sanqi Huayu Oral Liquid，build an HPLC fingerprint quality evaluation method to reflect the overall characteristics of the preparation in order to improve the quality of preparation and stability，and provide basis for the safety and effectiveness of clinical medication．M ethods The chromatographic column was Shim－packVP－ODS column（250 mm×4．6 mm，5 μm）；mobile phase was（A）acetonitrile－（B）0．05% phosphoric acid water（pH＝5，gradient elution），the flow rate was 1 mL／min，the detection wavelength was 203 nm；the injection volume was 10 μL．Results By calculating the similarity，the similarity of the 10 batches of samples were between 0．9－1．0．Conclusion The chromatographic diagram can be used as the fingerprint of Sanqi Huayu Oral Liquid，and to evaluate its quality．

Sanqi Huayu Oral Liquid；fingerprint；HPLC

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)08－0069－04

江國(guó)華，男，大學(xué)本科，主管中藥師，研究方向?yàn)獒t(yī)院制劑工藝及質(zhì)量控制，（電子信箱）1966325251＠qq．com。

表4 建有共有模式的10批次三七化瘀口服液的均值相似度數(shù)據(jù)表

S10 0．978 0．974 0．972 0．974 0．863 0．868 0．898 0．978 0．869 1．000 0．973樣品編號(hào)S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10對(duì)照指紋圖譜S1 1．000 0．996 0．990 0．995 0．857 0．863 0．837 0．997 0．864 0．978 0．975 S2 0．996 1．000 0．994 0．999 0．861 0．862 0．837 0．993 0．865 0．974 0．975 S3 0．99 0．994 1．000 0．996 0．868 0．864 0．841 0．993 0．866 0．972 0．976 S4 0．995 0．999 0．996 1．000 0．862 0．863 0．839 0．995 0．865 0．974 0．976 S5 0．857 0．861 0．868 0．862 1．000 0．989 0．894 0．862 0．991 0．863 0．945 S6 0．863 0．862 0．864 0．863 0．989 1．000 0．898 0．865 0．991 0．868 0．947 S7 0．837 0．837 0．841 0．839 0．894 0．898 1．000 0．841 0．898 0．898 0．912 S8 0．997 0．993 0．993 0．995 0．862 0．865 0．841 1．000 0．865 0．978 0．976 S9 0．864 0．865 0．866 0．865 0．991 0．991 0．898 0．865 1．000 0．869 0．948對(duì)照指紋圖譜0．975 0．975 0．976 0．976 0．945 0．947 0．912 0．976 0．948 0．973 1．000

2015－10－14)

廣東省佛山市衛(wèi)生局醫(yī)學(xué)科研項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：2014135。