馬妮，高明菊※，王銀，刁勇，馮光泉

(1．文山學(xué)院，云南文山663099；2．云南七丹藥業(yè)股份有限公司，云南文山663099)

川芎原名芎穹，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，謂其“主中風(fēng)入腦、頭痛、寒痹、筋攣緩急、金創(chuàng)、婦人血閉無(wú)子、生川谷”。漢朝、晉朝、南北朝、唐代均稱芎穹，晚唐藺道人《仙授理傷續(xù)斷秘方》[1]所載方劑中使用“川芎”為處方用名。

川芎藥材市場(chǎng)歷來(lái)有“蜀川產(chǎn)者為勝”的說(shuō)法，近年來(lái)，川產(chǎn)者占90%以上，此外，云南省、甘肅省、江西省等地也開始大面積種植[2]。《中國(guó)藥典》收載有川芎藥材、川芎片[3]，各地中藥飲片炮制規(guī)范僅收錄了炒川芎、麩炒川芎、酒川芎，未見收載有“川芎粉”。本試驗(yàn)通過(guò)考察不同干燥溫度、不同細(xì)度等對(duì)川芎質(zhì)量的影響，進(jìn)一步明確川芎粉的生產(chǎn)工藝，為川芎粉的生產(chǎn)提供依據(jù)。

1　儀器與試藥

1.1　儀器

LC-20A高效液相色譜儀(日本島津公司)；XS105電子天平(美國(guó)梅特勒公司)；SQW-25超微粉碎振動(dòng)磨(山東三清不銹鋼設(shè)備有限公司)；5401-CC275TL2H智能人工氣候箱(杭州雪中炭恒溫技術(shù)有限公司)。

1.2　試藥

10批川芎藥材[云南七丹藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)與產(chǎn)地分別為：062501、062502(四川省都江堰市)，062503、062504(四川省彭縣)，062505、062506(云南省洱源縣)，062507、062508(云南省鶴慶縣)，062509、062510(云南省麗江市)]；阿魏酸對(duì)照品(批號(hào)：110773-201313，純度99.6%，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，水為重蒸水。

2　實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1　阿魏酸含量測(cè)定方法的建立及方法學(xué)考察

2.1.1色譜條件的選擇進(jìn)行了不同流動(dòng)相(甲醇-水、甲醇-醋酸水)、不同波長(zhǎng)(321nm、322nm)的比較，以分離效果最終確定了最佳色譜條件。

色譜條件：色譜柱：C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動(dòng)相：甲醇-1%醋酸溶液(30∶70，V/V)，恒比例洗脫；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：10μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：321nm；柱溫：35℃；理論板數(shù)以阿魏酸峰面積計(jì)算不低于4000；分離度>1.5。色譜圖見圖1。

2.1.2提取溶劑的選擇精密稱取批號(hào)062501川芎樣品(過(guò)4號(hào)篩)0.5g，共4份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入30%、50%、70%、90%、95%甲醇50mL作為溶劑，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用溶劑補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液用微孔濾膜過(guò)濾，按“2.1.1”項(xiàng)下分析條件測(cè)定(表1)。

表1提取溶劑的比較

Table1Comparisonofextractionsolvents(%)

上述數(shù)據(jù)顯示，阿魏酸以70%甲醇為溶劑時(shí)提取含量最高，故選擇以70%甲醇為提取溶劑。

2.1.3提取方法及時(shí)間的選擇精密稱取批號(hào)062501川芎樣品(過(guò)4號(hào)篩)0.5g，共4份，以70%甲醇為溶劑，分別加熱回流15min、30min、60min、120min。測(cè)定結(jié)果見表2。

表2提取時(shí)間比較

Table2Comparisonofextractiontime

結(jié)果顯示，采用加熱回流30min提取較完全。

2.1.4對(duì)照品溶液的制備取阿魏酸對(duì)照品適量，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成20μg/mL的溶液，即得。

2.1.5供試品溶液的制備取川芎粉末(過(guò)4號(hào)篩)0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.1.6方法學(xué)考察以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(x，μg/mL)為橫坐標(biāo)、峰面積(y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程Y=53 955X-56 290(r=0.9999)，線性范圍5.20μg/mL～83.20μg/mL；精密度試驗(yàn)阿魏酸峰面積的RSD值0.10%(n=6)；供試品溶液中阿魏酸在24h內(nèi)穩(wěn)定，阿魏酸的RSD值為0.13%(n=6)；重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，阿魏酸峰面積的RSD值為1.44%(n=6)，平均加樣回收率為101.77%，RSD值為1.87%(n=6)。表明本方法可用于川芎粉中阿魏酸的含量測(cè)定。

2.2　最佳干燥溫度和粉碎粒徑的篩選

2.2.1不同干燥溫度的選擇稱取川芎藥材(批號(hào)：062501、062503、062507、062509)1kg，經(jīng)凈選、洗凈，采用自然干燥、40℃、50℃、60℃、70℃烘干，干燥至藥材水份約13%，粉碎成粉末(過(guò)四號(hào)篩)，按照“2.1”項(xiàng)下方法制備并測(cè)定含量(表3)。

表3不同干燥溫度對(duì)川芎阿魏酸含量的影響

Table3Differentdryingtemperatureondeterminationofferulicacidinrhizomachuanxiong

結(jié)果表明，自然干燥與不同溫度烘干對(duì)阿魏酸含量沒有明顯影響，但從生產(chǎn)效率上看，建議前處理以50℃～60℃烘干為宜。

2.2.2不同粉碎粒度對(duì)川芎阿魏酸含量的影響取川芎藥材(批號(hào)：062501、062502、062503、062504)適量，經(jīng)清洗、50℃～60℃干燥后，粉碎成粗粉、中粉、細(xì)粉、極細(xì)粉，粉碎粒徑參照2015版《中國(guó)藥典》一部凡例項(xiàng)下計(jì)量粉末分等，考察不同粒度粉末對(duì)阿魏酸含量的影響(表4)。

表4不同粒度川芎中阿魏酸含量

Table4Thecontentofferulicacidindifferentgranularityofrhizomachuanxiong

結(jié)果顯示，隨著粉細(xì)度的改變，阿魏酸含量逐漸增加，從粗粉到極細(xì)粉，增幅在61.5%～154.5%之間，增加趨勢(shì)為極細(xì)粉>細(xì)粉>中粉>粗粉。

2.3　粉末穩(wěn)定性考察

選取批號(hào)為062505、062507、062509的藥材，生產(chǎn)粗粉、中粉、細(xì)粉、極細(xì)粉4個(gè)不同粒度川芎粉樣品，模擬市售包裝(塑料瓶裝)100g/瓶，在人工氣候箱中于溫度40℃±2℃、相對(duì)濕度75%±5%的條件下放置3個(gè)月，考察粉末外觀性狀及阿魏酸含量變化情況。

標(biāo)準(zhǔn)川芎粉為灰褐色至棕褐色、香氣濃郁。試驗(yàn)結(jié)果表明，1個(gè)月時(shí)，細(xì)粉、極細(xì)粉有結(jié)團(tuán)現(xiàn)象，振搖有少許團(tuán)塊不散，瓶壁有少許油霧。2個(gè)月時(shí)，粗粉、中粉瓶壁有少許油霧；細(xì)粉、極細(xì)粉結(jié)團(tuán)嚴(yán)重，振搖有較大團(tuán)塊不散，沾瓶壁較嚴(yán)重。3個(gè)月時(shí)，粗粉、中粉瓶壁有少許油霧；細(xì)粉、極細(xì)粉結(jié)團(tuán)嚴(yán)重，沾瓶壁較嚴(yán)重，壁面油珠較多，顏色偏黃。證明川芎粉越細(xì)，越容易結(jié)團(tuán)，在長(zhǎng)期的保存過(guò)程中，易出現(xiàn)變質(zhì)現(xiàn)象。

表5川芎粉穩(wěn)定性考察表

Table5Chuanxiongpowderonthestabilityofthetable(%)

結(jié)果表明，阿魏酸含量在穩(wěn)定性考察期間無(wú)明顯變化，證明溫度、濕度對(duì)阿魏酸含量無(wú)影響；隨著考察時(shí)間的增加，樣品水分呈上升趨勢(shì)，3個(gè)月時(shí)，水份平均增加約14.79%，建議企業(yè)在進(jìn)行該品種生產(chǎn)時(shí)，水分建議控制在7.0%以下，以便更好地控制產(chǎn)品在銷售過(guò)程中出現(xiàn)水份超標(biāo)的質(zhì)量問(wèn)題。

因此，川芎粉生產(chǎn)，建議生產(chǎn)工藝為取川芎藥材，凈選，用流動(dòng)清水洗凈，50℃～60℃干燥，粉碎成中粉。

2.4　川芎粉生產(chǎn)工藝驗(yàn)證

取不同產(chǎn)地川芎藥材10批，參照“2.3”項(xiàng)下生產(chǎn)工藝進(jìn)行試生產(chǎn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6。

驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果與各工藝步驟優(yōu)化結(jié)果較一致，表明該工藝穩(wěn)定，有效成分含量均較高。通過(guò)上述研究，確定川芎粉生產(chǎn)工藝為：取川芎藥材，凈選，用流動(dòng)清水洗凈，50℃～60℃干燥，粉碎成中粉。

3　討論

3.1　干燥溫度的選擇

溫度變化對(duì)川芎藥材阿魏酸含量的影響不大，綜合考慮，擬定川芎藥材的干燥溫度為50℃～60℃。

3.2　粉碎粒徑對(duì)阿魏酸的影響

隨著粉細(xì)度的改變，阿魏酸含量逐漸增加，從粗粉到極細(xì)粉，增幅在61.5%～154.5%之間，增加趨勢(shì)為極細(xì)粉>細(xì)粉>中粉>粗粉。說(shuō)明粉碎粒度越小越有利于川芎有效成分阿魏酸的溶出，實(shí)驗(yàn)與劉莉等[4]的研究川芎超微粉可以提高有效成分的溶出結(jié)果一致。

表6生產(chǎn)工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Table6Productionprocessvalidationresults(n=3)

3.3　粉碎細(xì)度的選擇

川芎粉越細(xì)，越容量結(jié)團(tuán)，在長(zhǎng)期的保存過(guò)程中，易出現(xiàn)結(jié)團(tuán)、油晰出、水份超標(biāo)等變質(zhì)現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與張琴等[5]研究結(jié)果由于川芎富含揮發(fā)油，且川芎揮發(fā)油對(duì)溫度很敏感，所以過(guò)度粉碎會(huì)因揮發(fā)油的不斷滲出，增加粘連團(tuán)聚現(xiàn)象一致。綜合考慮粉體外觀和生產(chǎn)的可行性，最終建議川芎粉的生產(chǎn)細(xì)度為中粉。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可看出，川芎粉生產(chǎn)，建議生產(chǎn)工藝為取川芎藥材，凈選，用流動(dòng)清水洗凈，50℃～60℃干燥，粉碎成中粉，由于富含揮發(fā)油，建議保存過(guò)程以棕色瓶為宜。

[1]王筠默.神農(nóng)本草經(jīng)[M].長(zhǎng)春:吉林科學(xué)技術(shù)出版社,1985:33.

[2]陳林.川芎道地藥材的形成模式、商品規(guī)格及其行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的研究[D].成都:成都中醫(yī)藥大學(xué),2012:9-13.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部[K].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015.

[4]劉莉,徐新剛,代龍.川芎不同入藥形式的體外溶出與藥效學(xué)比較[J].中成藥,2002,24(4):246-248.

[5]張琴,劉莉.川芎超微粉的粉體學(xué)性質(zhì)研究[J].中草藥,2010,11(44):1796-1799.