張秀蓮，趙卉，許世泉※，張志東，張影

(1．中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，長春130112；2．康美新開河(吉林)藥業(yè)有限公司，吉林集安134000)

自古人參就有“百草之王”的美譽(yù)，人參根中含有大量具有生物活性的多肽和人參蛋白[1]。二維電泳技術(shù)已證明人參根含有300余種人參蛋白[2]，其中，部分水溶性蛋白已被證明具有抗輻射、抗病毒、抗腫瘤、抗休克等多方面的作用[3]。但人參的蘆、體、須各部位的蛋白質(zhì)含量是否有區(qū)別，尚未見報道。本試驗(yàn)測定了人參蘆、體、須各部位中的蛋白質(zhì)含量，并進(jìn)行詳細(xì)分析，以期為它們的實(shí)際應(yīng)用提供理論參考。

1　樣品來源、儀器及試劑

1.1　樣品來源

樣品均采集于吉林省撫松縣榆樹鄉(xiāng)參場，按Z字型分別選取7個樣品采摘點(diǎn)，每個點(diǎn)隨機(jī)抽取15支6年生人參，為保證測試所需的樣品量，實(shí)驗(yàn)將每3支人參分解后所得的蘆、體、須部位分別混合均勻后作為1個實(shí)驗(yàn)樣品，即每個采樣點(diǎn)隨機(jī)分成5個蘆、體、須樣品，共計7個采樣點(diǎn)，35個人參樣品。將上述35個人參樣品經(jīng)洗刷、烘干、粉碎后作為實(shí)驗(yàn)材料，待測。

1.2　試劑

EDTA標(biāo)準(zhǔn)物(意大利VELP公司)。

1.3　儀器

NDA701杜馬斯定氮儀(意大利VELP公司)；Milli-Q Advantage A10型超純水器(美國密理博公司)；MS204S型電子分析天平、S205DU電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；GZX-9240 MBE電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海博訊事業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)。

2　方法

2.1　樣品制備

鮮參樣品經(jīng)洗刷瀝水后置于50℃烘箱內(nèi)干燥，粉碎后過60目篩，密封留存。實(shí)驗(yàn)選取EDTA作為檢測時的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。在測定前，所有樣品均需在50℃烘箱內(nèi)再次干燥72h，置于干燥器內(nèi)，待測。

2.2　儀器工作條件[4]

用天平準(zhǔn)確稱取干粉樣品，用錫箔紙包好，壓縮空氣；樣品制備完成后，置于自動進(jìn)樣盤里，待儀器進(jìn)入工作狀態(tài)時自動進(jìn)樣檢測。每個樣品平行測定3次，結(jié)果取平均值。

2.3　標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系和標(biāo)準(zhǔn)曲線方程

分別稱取EDTA標(biāo)品0mg、12.2mg、22.3mg、32.1mg、43.2mg、51.7mg、62.4mg、74.6mg、84.4mg、91.3mg、101.2mg、113.6mg、122.6mg，用錫箔紙包好，經(jīng)制樣器制樣后檢測，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

以總氮質(zhì)量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。曲線方程：Y=4.363 885E-3+X*2.838 244E-4，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 98。

2.4　儀器精密度測定

以標(biāo)準(zhǔn)品EDTA作為樣品，在“2.2”項測定條件下連續(xù)測定6次，統(tǒng)計分析結(jié)果。

2.5　重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

隨機(jī)選取1個樣品，在“2.2”項條件下重復(fù)測定6次，統(tǒng)計分析結(jié)果。

2.6　加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的人參樣品，稱取5次，分別加入不同質(zhì)量的EDTA制樣后在“2.2”項條件下進(jìn)樣測定，統(tǒng)計結(jié)果。

3　結(jié)果與討論

3.1　結(jié)果

3.1.1精密度實(shí)驗(yàn)(表1)

表1精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Table1Resultsoftheprecisiontesting(%)

由表1可知，以EDTA作為樣品，進(jìn)行6次平行測定，所得結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)值為0.054%(n=6)，表明儀器精密度良好。

3.1.2重復(fù)性實(shí)驗(yàn)(表2)

表2重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Table2Resultsoftherepetitiveexperiments(%)

3.1.3加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)(表3)

表3回收率實(shí)驗(yàn)

Table3Theexperimentationofrecoveryrate(%)

由表3可知，各組樣品加標(biāo)回收率均在98%～101%之間，5組樣品加標(biāo)回收率的平均值為99.54%，RSD值為0.859%，說明此方法可以用作人參蛋白質(zhì)含量測定。

3.1.4蘆、體、須中蛋白質(zhì)含量測定杜馬斯燃燒法[5]分別測定7組35個人參樣品的蘆、體、須中蛋白質(zhì)含量(表4)。

表4人參蘆、體、須的蛋白質(zhì)含量比較

Table4Comparisonofproteincontentinrhizome、middlerootandfibrousrootofGinseng

組　別GroupⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦ平均值A(chǔ)verage蘆Rhizome15016±017713873±026714287±035617740±050513773±040612446±024814080±0342914460體Middleroot13646±037011861±028212001±026016302±043012031±012311126±011313641±018712924須Fibrousroot14294±035913573±022013456±098517700±134113033±052712562±055314534±0363014165

由表4可知，人參蘆的平均蛋白質(zhì)含量最高，須的蛋白質(zhì)含量略低，平均含量均超過14%，人參主體的蛋白質(zhì)含量最低，僅為12.924%。蘆∶體∶須平均蛋白質(zhì)含量的比值為1.12∶1∶1.01。對比7組人參蘆、體、須平均蛋白質(zhì)含量可知，第4組人參蘆的平均蛋白含量為17.740，須的平均含量為17.70%，體的平均含量為16.302%，平均蛋白含量明顯高出其他組蘆、體、須對應(yīng)的數(shù)值，剩余其他各組間蘆、體、須對應(yīng)蛋白含量無明顯差異。

3.2　結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用杜馬斯燃燒法測定了樣品中的全氮含量，人參蘆的蛋白質(zhì)含量最高，人參須次之，人參體中蛋白質(zhì)含量最低。就蛋白質(zhì)含量而言，人參的蘆、須、體部分都含有超過12%的蛋白質(zhì)營養(yǎng)成分，在開發(fā)其深加工產(chǎn)品方面具有廣闊的應(yīng)用前景。對比7組人參蘆、體、須平均蛋白含量后發(fā)現(xiàn)，第4組人參蘆、須、體的平均蛋白含量明顯高出其他組蘆、體、須對應(yīng)的含量，其余各組間蘆、體、須對應(yīng)蛋白含量差異不明顯。綜上所述，人參的蛋白質(zhì)含量跟地塊具有一定相關(guān)性，例如土壤成分、微生物組成、代謝機(jī)制等，有關(guān)人參蘆、體、須各部位蛋白含量的變化機(jī)制研究，蛋白氮和非蛋白氮的深入分析檢測以及蛋白質(zhì)種類和藥理作用還有待進(jìn)一步研究。

[1]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.衛(wèi)生部《關(guān)于進(jìn)一步規(guī)范保健品原料管理的通知》[Z].北京:中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會，2002.

[2]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.關(guān)于批準(zhǔn)人參(人工種植)為新資源食品的公告[Z].北京:中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會，2012.

[3]李霞,孫立偉,申野.水溶性蛋白活性研究進(jìn)展[J].中國實(shí)用醫(yī)學(xué),2010,27(5):243.

[4]張秀蓮,趙卉,張志東，等.杜馬斯燃燒法和凱氏定氮法在人參蛋白質(zhì)含量檢測中的對比研究[J].特產(chǎn)研究,2015,(4):38-40.

[5]王欽權(quán),翁佳妍,黃城,等.凱氏定氮法和杜馬斯燃燒法測定食品中蛋白質(zhì)含量的比較研究[J].輕工科技,2014,1(3):13-14.