牛明了,甄歡歡,周曉麗

(1河南省中醫(yī)院，鄭州450002；2 河南中醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院)

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秦艽提取物對(duì)便秘大鼠血清及結(jié)腸組織NO、SOD、MDA、GSH水平的影響

牛明了1,甄歡歡1,周曉麗2

(1河南省中醫(yī)院，鄭州450002；2 河南中醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院)

摘要：目的探討秦艽提取物對(duì)便秘大鼠血清及結(jié)腸組織中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)水平的影響。方法選擇SPF級(jí)SD大鼠60只，隨機(jī)均分為正常組、模型組、陽(yáng)性組、秦艽高劑量組、秦艽低劑量組。制造大鼠便秘模型。造模成功后正常組、模型組生理鹽水灌胃，陽(yáng)性組麻仁軟膠囊灌胃，秦艽低劑量組秦艽提取物0.9 g/kg灌胃，秦艽高劑量組秦艽提取物1.8 g/kg灌胃。給藥治療4周后，眼底靜脈叢采血，分離血清備用。3 d后采用活性炭推進(jìn)法測(cè)定腸道傳輸率的變化。脫頸椎處死大鼠，制作結(jié)腸組織勻漿，分別按試劑盒方法測(cè)定大鼠血清和結(jié)腸組織勻漿液中NO、MDA、SOD、GSH水平。結(jié)果模型組大鼠血清及結(jié)腸中NO、MDA水平與正常組相比上升，SOD、GSH水平下降(P均<0.05)；與模型組大鼠相比，秦艽高劑量組、低劑量組結(jié)腸組織中NO水平降低，且秦艽低劑量組結(jié)腸組織中GSH水平升高(P均<0.05)。結(jié)論秦艽提取物可能通過(guò)調(diào)控便秘大鼠模型的NO、MDA、SOD、GSH表達(dá)水平起到治療便秘的作用。

關(guān)鍵詞：便秘；秦艽提取物；丙二醛；谷胱甘肽；一氧化氮；超氧化物歧化酶；大鼠

大葉秦艽為龍膽科植物，其主要化學(xué)成分為生物堿類、環(huán)烯醚萜苷類、甾醇類等，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、解熱、保肝等作用，可以祛風(fēng)濕、止痹痛、退虛熱、清濕熱，主要用于風(fēng)濕痹痛、筋脈拘攣、骨節(jié)酸痛等病癥[1]。目前，便秘的發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，臨床亦無(wú)特效治療藥物。2014年8～12月，我們建立大鼠便秘模型，探討秦艽提取物對(duì)便秘大鼠模型血清及結(jié)腸組織中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)水平的影響。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物7周齡SD大鼠60只，SPF級(jí)，雌雄各半，購(gòu)自北京實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。飼養(yǎng)條件：雌雄分開(kāi)飼養(yǎng)，每籠6只，室溫(20±2)℃，相對(duì)濕度(60±10)%。所有大鼠自由進(jìn)食進(jìn)水。

1.2實(shí)驗(yàn)藥物NO、SOD、MDA、GSH試劑盒均購(gòu)自由上海榮盛生物制品研究所；鹽酸嗎啡購(gòu)自東北制藥有限公司；麻仁軟膠囊、粉末活性炭購(gòu)自天津藥業(yè)有限公司。根據(jù)參考文獻(xiàn)[2]制備大葉秦艽提取物，制備成每1 mL含秦艽0.5 g，根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物換算方法，確定大鼠每日灌胃量低劑量為0.9 g/kg，高劑量為1.8 g/kg。

1.3動(dòng)物分組及處理60只大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、陽(yáng)性(麻仁軟膠囊)組、秦艽高劑量組、秦艽低劑量組，每組12只，雌雄各半。適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，除正常組每天皮下注射3.0 mg/kg蒸餾水外，其余組每天皮下注射鹽酸嗎啡3.0 mg/kg，連續(xù)注射40 d，1次/d，制作大鼠便秘模型。造模成功后，正常組、模型組蒸餾水10 mL/kg灌胃，麻仁軟膠囊組麻仁軟膠囊0.6 g/kg灌胃，秦艽低劑量組秦艽提取物0.9 g/kg灌胃，秦艽高劑量組秦艽提取物1.8 g/kg灌胃，給藥體積10 mL/kg，1次/d。

1.4血清NO、MDA、SOD、GSH水平檢測(cè)大鼠灌胃4周，禁食不禁水12 h，乙醚麻醉，毛細(xì)玻璃管從眼底靜脈叢采血，分離血清，4 ℃保存。根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)上的方法，對(duì)大鼠血清中NO、MDA、SOD、GSH水平進(jìn)行測(cè)定。

1.5腸道傳輸功能測(cè)定大鼠灌胃4周，禁食不禁水采血后，適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d(期間大鼠不給藥，正常喂養(yǎng))。禁食不禁水1 d，使大鼠腸內(nèi)容物充分排空，給以活性炭末懸浮液10 mL/kg灌胃，制備的懸浮液濃度為100 g/L，30 min后脫頸椎處死動(dòng)物。立即解剖取出腸道，測(cè)量腸道全長(zhǎng)及活性炭懸浮液在腸道內(nèi)的推進(jìn)長(zhǎng)度。

1.6結(jié)腸組織NO、MDA、SOD、GSH水平檢測(cè) 處死大鼠后，解剖分離出大腸，生理鹽水沖洗干凈，稱取結(jié)腸組織0.3 g，以生理鹽水研磨成10%的勻漿液。離心后提取上清液，-20 ℃保存。根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)中的方法對(duì)大鼠結(jié)腸組織勻漿液中NO、MDA、SOD、GSH水平進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果

2.1各組大鼠血清NO、MDA、SOD、GSH水平 大鼠灌胃4周后，每組各有2只死亡。與正常組相比，模型組大鼠血清中NO、MDA水平上升，SOD、GSH水平下降(P均<0.05)，表明大鼠便秘模型造模成功。與模型組相比，秦艽高劑量組NO水平降低，SOD、GSH水平升高(P均<0.05)。秦艽高劑量組、低劑量組比較，血清NO、MDA、SOD、GSH水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均>0.05)。見(jiàn)表1。

表1　各組大鼠血清NO、MDA、SOD、

注：與正常組相比，aP<0.05；與模型組相比，bP<0.05。

2.2各組大鼠腸道傳輸功能變化與正常組相比，模型組腸道傳輸功能減慢(P<0.05)；秦艽高劑量組與模型組相比，腸道傳輸功能加快(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2　各組大鼠腸道傳輸功能的變化±s)

注：與正常組相比，aP<0.05；與模型組相比，bP<0.05。

2.3各組大鼠結(jié)腸組織NO、MDA、SOD、GSH水平與正常組相比，模型組血清中NO、MDA水平上升，SOD、GSH水平下降(P均<0.05)。與模型組相比，秦艽高劑量組、低劑量組均能降低NO水平，升高GSH谷胱甘肽水平(P均<0.05)。秦艽高劑量組、低劑量組比較，大鼠結(jié)腸組織NO、MDA、SOD、GSH水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均>0.05)。見(jiàn)表3。

表3　各組大鼠結(jié)腸組織中NO、MDA、SOD、

注：與正常組相比，aP<0.05；與模型組相比，bP<0.05。

3討論

秦艽具有抗炎、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、解熱等作用，在臨床上廣泛應(yīng)用于治療肛腸疾病[3,4]、風(fēng)濕疾病、心腦血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病等。胡海華等[3]研究用防風(fēng)秦艽湯加乳香、沒(méi)藥、大黃、桃仁、皂刺、穿山甲，以水煎服治療肛裂，并用其藥渣加水煮開(kāi)坐浴，配以太寧膏涂抹，連續(xù)用藥3 d后，對(duì)肛裂Ⅱ度患者有明顯的減輕疼痛作用；楊風(fēng)利等[4]研究防風(fēng)秦艽湯對(duì)痔瘡患者的影響，發(fā)現(xiàn)服用本方后，90%的患者便血癥狀消失，95%的患者癥狀有所改善。

便秘是臨床上以排便次數(shù)減少、排便困難、糞便過(guò)硬等為主要表現(xiàn)的一種常見(jiàn)慢性消化道癥狀。由于硬糞的長(zhǎng)期滯留和刺激，結(jié)腸黏膜常有不同程度的炎性改變，從而引發(fā)一系列的氧自由基反應(yīng)和脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)[5]；便秘引起的炎癥反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生大量的氧自由基，從而導(dǎo)致細(xì)胞膜不飽和脂肪酸脂質(zhì)過(guò)氧化程度的加重[6,7]。

SOD、GSH能有效地清除細(xì)胞代謝過(guò)程中產(chǎn)生的氧自由基,終止自由基連鎖反應(yīng)[9]。SOD活性隨著機(jī)體的老化而降低，故測(cè)定該酶活性可作為檢測(cè)機(jī)體抗氧化能力和衰老的一個(gè)定量指標(biāo)。機(jī)體內(nèi)另一類具有清除氧自由基抗衰老作用的酶系是GSH，它對(duì)防止機(jī)體內(nèi)氧自由基引起脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)特別重要。SOD、GSH等酶系在機(jī)體內(nèi)發(fā)揮協(xié)同作用，具有減輕和阻斷脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)、保護(hù)機(jī)體免受各類氧自由基的侵害、延緩衰老等作用，是評(píng)價(jià)細(xì)胞受損與否的重要指標(biāo)[10]。所以，測(cè)定SOD、GSH等酶系是衡量藥物抗氧化作用的重要方法之一。

本實(shí)驗(yàn)便秘模型組大鼠血清與結(jié)腸組織中NO、MDA水平高于正常組，SOD、GSH水平低于正常組，表明過(guò)氧化反應(yīng)是便秘產(chǎn)生的重要機(jī)制之一。而秦艽高、低劑量組均能不同程度降低血清與結(jié)腸組織中NO、MDA水平，增加SOD、GSH水平，說(shuō)明秦艽提取物能降低便秘模型大鼠的過(guò)氧化反應(yīng)，減輕氧自由基的損害，緩解便秘癥狀。至于秦艽提取物不同劑量對(duì)大鼠血清和結(jié)腸組織NO、MDA、SOD、GSH水平影響是否存在差異還需要進(jìn)一步研究。

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(收稿日期：2015-09-12)

中圖分類號(hào)：R256.35

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-266X(2016)05-0027-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.05.010

基金項(xiàng)目：國(guó)家中醫(yī)藥管理局全國(guó)名老中醫(yī)傳承工作室項(xiàng)目(201347)。