王婷，夏大勝，何強(qiáng)，葉緒英，梁景一，王麗

(1天津醫(yī)科大學(xué)一中心臨床學(xué)院，天津 300192；2 天津市第一中心醫(yī)院)

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·論著·

心絞痛患者血清內(nèi)脂素水平變化與激活蛋白-1、基質(zhì)金屬蛋白酶-2的關(guān)系

王婷1，夏大勝2，何強(qiáng)2，葉緒英2，梁景一2，王麗2

(1天津醫(yī)科大學(xué)一中心臨床學(xué)院，天津 300192；2 天津市第一中心醫(yī)院)

摘要：目的探討心絞痛患者血清內(nèi)脂素與激活蛋白-1(AP-1)和基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)的關(guān)系。方法選擇不穩(wěn)定型心絞痛患者(UAP組)75例、穩(wěn)定型心絞痛患者(SAP組)65例和健康對(duì)照組60例，采用ELISA法檢測其血清內(nèi)脂素、磷酸化c-Jun(反映活性AP-1數(shù)量)、MMP-2及組織金屬蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)的水平。結(jié)果UAP組血清內(nèi)脂素、磷酸化c-Jun、MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2均高于SAP組(P均<0.01)；SAP組上述指標(biāo)均高于對(duì)照組(P均<0.01)；Pearson相關(guān)分析顯示心絞痛患者血清內(nèi)脂素水平與磷酸化c-Jun、MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2呈正相關(guān)(r分別為0.662、0.657、0.456、0.273，P均<0.01)；磷酸化c-Jun與MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2呈正相關(guān)(r分別為0.588、0.433、0.184，P均<0.05)。結(jié)論心絞痛患者的血清內(nèi)脂素水平明顯升高，其可能通過促進(jìn)AP-1活化、增加MMP-2分泌而降低冠脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性。

關(guān)鍵詞：心絞痛；內(nèi)脂素；激活蛋白-1；基質(zhì)金屬蛋白酶-2

炎癥反應(yīng)貫穿動(dòng)脈粥樣硬化病變發(fā)展始終，也是造成斑塊不穩(wěn)定的重要因素。內(nèi)脂素是一種由內(nèi)臟脂肪組織合成與分泌的細(xì)胞因子，具有與前B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子相同的結(jié)構(gòu)，與冠心病關(guān)系密切[1]。轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白-1(AP-1)可通過對(duì)多種動(dòng)脈粥樣硬化炎癥因子的調(diào)控，參與調(diào)節(jié)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是一類鈣、鋅依賴的中性蛋白酶家族，通過對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的降解及重構(gòu)參與動(dòng)脈粥樣硬化的病理過程，影響斑塊的穩(wěn)定性[2]。本文旨在探討心絞痛患者血清內(nèi)脂素與磷酸化c-Jun(反映活性AP-1數(shù)量)、MMP-2的關(guān)系及其在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性病變進(jìn)展中的作用。

1資料與方法

1.1臨床資料選取2014年6月~2015年6月因胸悶、胸痛就診于天津市第一中心醫(yī)院并行冠狀動(dòng)脈造影患者200例，其中不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)75例，穩(wěn)定型心絞痛(SAP)65例，均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)2007年冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)。UAP組男64例、女11例，年齡(56.16±5.93)歲，BMI(26.31±2.85)kg/m2，腰臀比0.96±0.10；其中高血壓44例，糖尿病40例，有吸煙史47例。SAP組男50例、女15例，年齡(58.37±7.32)歲，BMI(25.01±2.52)kg/m2，腰臀比0.91±0.07；其中高血壓29例，糖尿病28例，有吸煙史22例。另外冠狀動(dòng)脈造影正常、運(yùn)動(dòng)平板試驗(yàn)陰性者60例為對(duì)照組，男47例、女13例，年齡(55.98±7.46)歲，BMI(24.43±3.24)kg/m2，腰臀比0.96±0.06；其中高血壓20例，糖尿病7例，有吸煙史17例。三組均排除合并嚴(yán)重感染性疾病、急性心肌梗死、重度心力衰竭、惡性腫瘤、慢性肝腎功能不全、結(jié)締組織疾病者，三組年齡、性別比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均>0.05)。

1.2血糖、血脂及胰島素水平檢測三組均隔夜禁食12 h，于次日清晨7：00采集空腹肘靜脈血5 mL送至醫(yī)院檢驗(yàn)中心。使用羅氏P800全自動(dòng)生化儀檢測甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)；采用葡萄糖氧化酶法測量空腹血糖(FPG)，電化學(xué)發(fā)光法測量空腹胰島素(FINS)。

1.3血清內(nèi)脂素、磷酸化c-Jun、MMP-2及組織金屬蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)水平檢測三組均隔夜禁食12 h，于次日清晨7：00采集空腹肘靜脈血5 mL，以3 000 r/min離心15 min后分離血清，存于-80 ℃冰箱中待檢。采用ELISA法檢測內(nèi)脂素、磷酸化c-Jun、MMP-2及TIMP-2，嚴(yán)格按照說明書操作，內(nèi)脂素試劑盒購自美國ADL公司，磷酸化c-Jun試劑盒購自美國CST公司，MMP-2、TIMP-2試劑盒購自美國R&D System 公司。

2結(jié)果

2.1三組FPG、FINS、血脂比較見表1。

表1　三組FPG、FINS、血脂比較

注：與對(duì)照組比較，aP<0.01 ；與SAP組比較，bP<0.01。

2.2三組血清內(nèi)脂素、磷酸化c-Jun、MMP-2、TIMP-2水平比較見表2。

表2　三組血清內(nèi)脂素、磷酸化c-Jun、MMP-2、TIMP-2水平比較

注：與對(duì)照組比較，aP<0.01；與SAP組比較，bP<0.01。

2.3Pearson相關(guān)分析結(jié)果心絞痛患者血清內(nèi)脂素與磷酸化c-Jun、MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2均呈正相關(guān)(r分別為0.662、0.657、0.456、0.273，P均<0.01)；磷酸化c-Jun與MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2均呈正相關(guān)(r分別為0.588、0.433、0.184，P均<0.05)。

3討論

作為一種新的脂肪因子，內(nèi)脂素不僅能促進(jìn)脂肪的積聚和合成，還是一種重要的促炎癥因子，可促進(jìn)IL-6、IL-8及MCP-1等炎癥因子的分泌和釋放，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活化而參與機(jī)體炎癥反應(yīng)[3~5]。此外，內(nèi)脂素可通過促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖與變性，造成血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂以及促進(jìn)斑塊形成和破裂等促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)生、發(fā)展[6]。AP-1是一種重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，參與多種細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，在體內(nèi)主要以c-Jun和c-Fos組成的異源二聚體形式存在，其活化形式主要為c-Jun的磷酸化。研究表明AP-1可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子產(chǎn)生、增加趨化因子表達(dá)，并通過上調(diào)巨噬細(xì)胞表面LOX-1的表達(dá)增加泡沫細(xì)胞生成，進(jìn)而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化形成與發(fā)展[7~9]。本文心絞痛患者血清內(nèi)脂素和AP-1水平均較冠脈造影正常者明顯增高，且UAP組高于SAP組，提示內(nèi)脂素和AP-1參與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成并和斑塊穩(wěn)定性相關(guān)。

MMP-2主要由動(dòng)脈壁中膜和外膜的平滑肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等合成與分泌，是降解細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)骨架蛋白Ⅳ型膠原的主要酶之一。MMPs組織抑制物(TIMPs)是MMPs的天然抑制劑之一，在生理狀態(tài)下，MMPs與TIMPs之間保持著動(dòng)態(tài)平衡，共同協(xié)調(diào)ECM的降解與重建，在維持動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性方面發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)MMP-2主要通過以下方面影響粥樣硬化斑塊的形成和破裂:①通過降解ECM，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的移行和增殖并促進(jìn)其分泌更多的ECM而形成粥樣硬化斑塊；②破壞斑塊纖維帽成分，降低其穩(wěn)定性，導(dǎo)致病變進(jìn)展惡化；③破壞細(xì)胞與基質(zhì)間的相互作用，促進(jìn)可溶性Fas配體和膜結(jié)合型腫瘤壞死因子-α的釋放，誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞凋亡，加速粥樣硬化的發(fā)展[10,11]。本文心絞痛患者血清MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2均較對(duì)照組明顯增高，且UAP組高于SAP組，表明MMP-2和TIMP-2與斑塊穩(wěn)定性密切相關(guān)。

研究表明，內(nèi)脂素可通過激活NF-κB途徑上調(diào)人單核細(xì)胞中MMP-2和MMP-9的表達(dá)及活性[12]。此外，在MMPs家族的許多成員如MMP-2、MMP-3、MMP-9等啟動(dòng)子區(qū)域均含有一個(gè)或多個(gè)AP-1結(jié)合位點(diǎn)，且AP-1的活化是促使其高表達(dá)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。但目前關(guān)于內(nèi)脂素、AP-1及MMPs之間相互作用的研究較少。本文發(fā)現(xiàn)，心絞痛患者血清內(nèi)脂素分別與磷酸化c-Jun、MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2呈正相關(guān)，且磷酸化c-Jun分別與MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2呈正相關(guān)，推測內(nèi)脂素可能通過促進(jìn)AP-1的活化而增加MMP-2的分泌，在MMP-2升高的同時(shí)，TIMP-2也代償性增高，但不足以抵消MMP-2的炎性作用，最終導(dǎo)致MMP-2/TIMP-2的動(dòng)態(tài)平衡被打破，進(jìn)而促進(jìn)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊由穩(wěn)定向不穩(wěn)定方向發(fā)展。其可能機(jī)制為內(nèi)脂素通過誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)，提高內(nèi)皮細(xì)胞活性氧化物水平，從而促進(jìn)c-Jun的活化[13]；其次，內(nèi)脂素通過刺激血管緊張素原生成、增加血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活性而促進(jìn)血管緊張素Ⅱ產(chǎn)生，后者與AT1受體特異性結(jié)合并通過MAPK、JNK等細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路實(shí)現(xiàn)c-Jun磷酸化[14,15]。

綜上所述，心絞痛患者體內(nèi)高水平的內(nèi)脂素可能通過促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子AP-1的活化增加MMP-2的分泌，從而促進(jìn)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊由穩(wěn)定向不穩(wěn)定方向發(fā)展。內(nèi)脂素可作為判斷冠心病患者斑塊穩(wěn)定性的有用指標(biāo)。

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Changes in levels of serum visfatin and the relationships with activator protein-1 and MMP-2 in patients with angina pectoris

WANGTing1,XIADasheng,HEQiang,YEXuying,LIANGJingyi,WANGLi

(1TheFirstCenterClinicalCollegeofTianjinMedicalUniversity,Tianjin300192,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the relationships between serum visfatin and activator protein-1 (AP-1), matrix metalloproteinase 2 (MMP-2) in patients with angina pectoris.MethodsThe serum visfatin, phosphorylated c-Jun, MMP-2 and TIMP-2 were detected in 75 cases of patients with unstable angina pectoris (UAP group), 65 cases of stable angina pectoris (SAP group) and 60 cases of healthy controls (control group) by using ELISA.ResultsThe serum levels of visfatin, phosphorylated c-Jun, MMP-2, TIMP-2 and the ratio of MMP-2/TIMP-2 in the UAP group were significantly higher than those in the SAP group (all P<0.01). All the parameters mentioned above were higher in the SAP group than those of the control group (all P<0.01). Pearson correlation analysis showed that the serum visfatin level was positively correlated with phosphorylated c-Jun, MMP-2, TIMP-2 and MMP-2/TIMP-2 (r=0.662, 0.657, 0.456 and 0.273, respectively; all P<0.01), while phosphorylated c-Jun was positively correlated with MMP-2, TIMP-2 and MMP-2/TIMP-2 (r=0.588, 0.433 and 0.184, respectively; all P<0.05).ConclusionThe serum levels of visfatin in patients with angina pectoris are significantly increased, and it may lead to the unstability of atherosclerotic plaque through the regulation of MMP-2′s secretion by activating AP-1.

Key words:angina pectoris; visfatin; activator protein-1; matrix metalloproteinase 2

(收稿日期：2015-12-01)

中圖分類號(hào)：R541.4

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-266X(2016)05-0001-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.05.001

通信作者簡介：夏大勝(1962-)，男，主任醫(yī)師，教授，博士，主要從事冠心病和高血壓病的基礎(chǔ)研究為與臨床診治。E-mail: xiadasheng@vip.163.com

作者簡介：第一王婷(1988-)，女，在讀碩士，主要研究方向?yàn)楣谛牟〉脑\斷及治療。E-mail:TingW_tjmu@outlook.com

基金項(xiàng)目：天津市衛(wèi)生局科技基金資助項(xiàng)目(2010KY06)。