韓春暉，張春泓，欒 爽

(遼寧省大連市藥品檢驗(yàn)所，遼寧 大連 116021)

高效液相色譜法分離與測(cè)定鹽酸多塞平順?lè)词疆悩?gòu)體的含量

韓春暉，張春泓，欒 爽

(遼寧省大連市藥品檢驗(yàn)所，遼寧 大連 116021)

目的 建立鹽酸多塞平乳膏中鹽酸多塞平順?lè)词疆悩?gòu)體分離與含量測(cè)定的高效液相色譜法。方法 色譜柱采用Kromasil 100A C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm），流動(dòng)相為含0．1%三乙胺的0．2 mol／L磷酸二氫鈉溶液－甲醇（65∶35），流速為1．0 mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，柱溫為50℃。結(jié)果 鹽酸多塞平質(zhì)量濃度在7．90～12．66 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系（r＝0．999 9），平均回收率為98．88%，RSD為1．32%(n＝9)。結(jié)論 該方法能良好地分離鹽酸多塞平順?lè)词疆悩?gòu)體，可作為鹽酸多塞平乳膏中鹽酸多塞平的質(zhì)量控制方法。

高效液相色譜法；鹽酸多塞平；含量測(cè)定；異構(gòu)體

鹽酸多塞平乳膏是非類固醇類藥物，主要是利用鹽酸多塞平的H1阻斷作用治療皮炎、濕疹引起的瘙癢,可避免局部使用皮質(zhì)類固醇制劑所帶來(lái)的副作用?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用紫外分光光度法于296 nm波長(zhǎng)處測(cè)定含量[1]。本研究中發(fā)現(xiàn)，在該波長(zhǎng)處有紫外吸收的雜質(zhì)，方法專屬性不強(qiáng)，且鹽酸多塞平順?lè)词疆悩?gòu)體不能良好分離。為此，筆者建立了鹽酸多塞平順?lè)词疆悩?gòu)體分離的高效液相色譜(HPLC)法，并測(cè)定其在鹽酸多塞平乳膏中的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695／2487／2998型高效液相色譜儀；Agilent 1200型高效液相色譜儀；島津LC－20A型高效液相色譜儀；Sartorius MSA225S－100－DA型分析天平（十萬(wàn)分之一）。鹽酸多塞平對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為100069－201103）；鹽酸多塞平乳膏（市售品，批號(hào)為2010001，2010002，2008012，規(guī)格為每10 g中含鹽酸多塞平0．5 g）；甲醇、磷酸為色譜純，鹽酸、磷酸二氫鈉為分析純，試驗(yàn)用水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Kromasil 100A C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：含0．1%三乙胺的0．2 mol／L磷酸二氫鈉溶液（用 2 mol／L磷酸調(diào) pH至 2．5）－甲醇（65∶35）；流速：1．0 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；柱溫：50℃；進(jìn)樣量：20 μL。色譜圖見(jiàn)圖1。理論板數(shù)按順式異構(gòu)體（Z）計(jì)算不低于1 500，反式異構(gòu)體（E）與順式異構(gòu)體（Z）峰的分離度大于1．5，乳膏空白基質(zhì)溶液對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

2．2 溶液制備

取鹽酸多塞平對(duì)照品適量，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加1%鹽酸甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，制成每1 mL中含0．1 mg的溶液，得對(duì)照品溶液。精密稱取樣品適量（約相當(dāng)于鹽酸多塞平20 mg），加1%鹽酸甲醇溶液20 mL，置水浴中加熱充分?jǐn)嚢枋果}酸多塞平溶解，再置冰浴中冷卻1 h以上，使基質(zhì)凝固，取出后迅速濾過(guò)，用冷1%鹽酸甲醇溶液洗滌殘?jiān)鼣?shù)次，用同一濾器濾過(guò)，合并濾液與洗液，置100 mL容量瓶中，用1%鹽酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置10 mL容量瓶中，加1%鹽酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液。將液態(tài)石蠟、天然脂肪醇、單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、平平加A－20、甘油聚乙二醇－75硬脂酸酯、2，6－二叔丁基對(duì)甲酚、叔丁基－4－羥基茴香醚、甘油、羥苯乙酯、乙二胺四乙酸二鈉、純化水按處方組分比例稱取適量，加熱至75～80℃，油相與水相等溫混合，攪拌均勻，邊冷卻邊攪拌，直至成霜，作為空白基質(zhì)[2]；取約0．4 g空白基質(zhì)，按供試品溶液制備方法，即得乳膏空白基質(zhì)溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密稱取鹽酸多塞平對(duì)照品7．90，9．19，10．48，11．45，12．66 mg，分別置 100 mL容量瓶中，用1%鹽酸甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，作為系列溶液。分別量取上述溶液各20 μL，注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件測(cè)定。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）、反式異構(gòu)體（E）與順式異構(gòu)體（Z）峰面積之和（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到鹽酸多塞平的線性回歸方程 Y＝3．170 6×10－8X－5．803 6×10－5，r＝0．999 9（n＝5）。結(jié)果表明，鹽酸多塞平質(zhì)量濃度在7．90～12．66 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：取同一照品溶液，依法連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果的 RSD為1．0%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，12，16，24，48 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果的 RSD為 0．9%（n＝9），表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)的樣品6份，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測(cè)定。結(jié)果的 RSD為0．6%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

回收率試驗(yàn)：取鹽酸多塞平原料、輔料，按處方組分比例模擬工藝流程分別制成模擬乳膏，其中已知含量的鹽酸多塞平原料藥分別按標(biāo)示量的80%，100%，120%加入到模擬乳膏中。依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 鹽酸多塞平回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2．4 樣品含量測(cè)定

取樣品3批(批號(hào)為2010001，2010002，2008012），依法制備供試品溶液，按外標(biāo)法測(cè)定并計(jì)算含量。結(jié)果3批樣品中含鹽酸多塞平分別為標(biāo)示量的101．3%，100．5%和100．7%。

3 討論

文獻(xiàn)[3－4]報(bào)道，測(cè)定鹽酸多塞平含量采用多塞平的紫外最大吸收波長(zhǎng)為297 nm。本研究中通過(guò)DAD檢測(cè)器3D掃描發(fā)現(xiàn)，297 nm波長(zhǎng)處峰純度不高。通過(guò)分析國(guó)內(nèi)企業(yè)的生產(chǎn)工藝得知，鹽酸多塞平的主要工藝雜質(zhì)為羥基物，該物質(zhì)于297 nm波長(zhǎng)處有較強(qiáng)紫外吸收，嚴(yán)重干擾鹽酸多塞平的測(cè)定。故選擇測(cè)定波長(zhǎng)為鹽酸多塞平吸收較強(qiáng)且雜質(zhì)吸收較弱的254 nm。

鹽酸多塞平原料藥為反式異構(gòu)體（E）與順式異構(gòu)體（Z）的混合物。早期含量測(cè)定中未將順?lè)词疆悩?gòu)體分離[5]，導(dǎo)致色譜峰出現(xiàn)明顯肩峰。有研究報(bào)道，使用HPLC法[6]和毛細(xì)管氣相色譜法[7]測(cè)定順式異構(gòu)體含量。本研究中通過(guò)優(yōu)化色譜條件，將順?lè)词疆悩?gòu)體完全分離，排除了測(cè)定過(guò)程中的相互干擾，相關(guān)研究尚未見(jiàn)有報(bào)道。

流動(dòng)相的水相中加入0．1%的三乙胺，有效地改善了峰拖尾現(xiàn)象。試驗(yàn)表明，在主成分與各雜質(zhì)的分離中順、反式異構(gòu)體峰最難分離，故使用順、反式異構(gòu)體峰的分離度進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。當(dāng)順、反式異構(gòu)體峰的分離度大于1．5時(shí)，其他雜質(zhì)均可獲得良好分離。

本研究中采用了另外3個(gè)品牌的色譜柱，如AMERITECH Accurasil C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm)，Dilkma Platisil C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm），ThermoHyparcil GOLD C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm），分別在Waters 2695／2996型、Agilent 1200型與島津 LC－20A型液相色譜儀上進(jìn)行方法耐用性試驗(yàn)考察。結(jié)果提示，供試品溶液色譜圖中順?lè)词疆悩?gòu)體之間及與相鄰雜質(zhì)峰間分離度均大于1．5，耐用性良好。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)．國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)》新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)第 34冊(cè)[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：193．

[2]唐 芳，丁登峰，周金玉．復(fù)方鹽酸多塞平乳膏的制備與質(zhì)量控制[J]．中國(guó)藥房，2004，15(1):26－28．

[3]周利娟，艾嗚哲，谷亦平．高效液相色譜法測(cè)定鹽酸多塞平乳膏中鹽酸多塞平含量[J]．醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2007，26(8):938．

[4]宋興發(fā)，高 山．高效液相色譜法測(cè)定鹽酸多塞平片含量[J]．醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，28(10):1 359－1 360．

[5]張晨華．反相高效液相色譜法測(cè)定鹽酸多塞平片的含量[J]．中國(guó)藥師，2007，10(12):1 220－1 221．

[6]郝榮華．高效液相色譜法測(cè)定鹽酸多塞平順式異構(gòu)體限度[J]．藥學(xué)與臨床研究，2008，16(3):242－244．

[7]周利娟，艾鳴哲，谷亦平．毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定鹽酸多塞平順式異構(gòu)體含量[J]．醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2006，25(4):344－345．

Separation and Determination of ZE－Doxepin Hydrochloride by HPLC

Han ChunHui,Zhang ChunHong,Luan Shuang
(Dalian Institute for Drug Control,Dalian,Liaoning,China 116021)

Objective To establish a method for the separation and determination of Doxepin Hydrochloride in Doxepin Hydrochloride Cream by HPLC．Methods Chromatography was performed on a Kromasil 100A C18(150 mm×4．6 mm,5 μm)column．The mobile phase was consisted of 0．1% triethylamine in 0．2 mol／L sodium dihydrogen phosohate solution－methanol(65∶35)．The flow rate was 1．0 mL／min．The detection wavelength was 254 nm．The column temperature was 50℃．Results The linear response range was 7．90～12．66 μg／mL for Doxepin Hydrochloride(r＝0．999 9)．The recovery of Doxepin Hydrochloride was 98．88%(RSD＝1．32%，n＝9)．Conclusion The method can separate ZE－doxepin hydrochloride,which was suitable for the determination of Doxepin Hydrochloride in doxepin hydrochloride cream．

HPLC;doxepin hydrochloride;determination;isomer

R927．11；R971＋．43

A

1006－4931(2016)01－0061－03

韓春暉，男，碩士研究生，主管藥師，主要從事藥物分析及藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，（電話）0411－84255311（電子信箱）luanshuangdl＠163．com。

2015－07－28)