蓮 花，麻春杰，呼日樂巴根，李 超，田海廣，肖志彬

（1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院 呼和浩特 010110；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院 呼和浩特 010110；3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)圖書館 呼和浩特 010110）

額爾敦-烏日勒對MCAO/R大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF及NGF表達(dá)的影響＊

蓮 花1，麻春杰2＊＊，呼日樂巴根1，李 超2，田海廣2，肖志彬3

（1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院 呼和浩特 010110；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院 呼和浩特 010110；3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)圖書館 呼和浩特 010110）

目的：探討額爾敦-烏日勒對大腦中動脈阻塞/再灌注損傷（Middle Cerebral Artery Occlusion /Reperfusion，MCAO/R）大鼠皮質(zhì)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（Brain-Derived Neurotrophic Factor，BDNF）及神經(jīng)生長因子（Nerve Growth Factor，NGF）的影響。方法：取清潔級健康SD大鼠60只，隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、尼莫地平片組、額爾頓-烏日勒組，采用改良Zea-Longa法，制備MCAO/R模型。實驗結(jié)束后，各組大鼠麻醉、取腦，采用HE染色、SP等免疫組化方法評價腦組織病理形態(tài)學(xué)的改變情況，并且采用雙抗夾心ELISA 法和熒光定量RT-PCR法檢測大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF mRNA、NGF mRNA相對表達(dá)量及其蛋白含量。結(jié)果：與模型組相比，額爾敦-烏日勒組大鼠腦前額葉皮質(zhì)壞死細(xì)胞數(shù)顯著減少（P＜0.05），BDNF、NGF蛋白含量及mRNA表達(dá)明顯增加（P＜0.05）。結(jié)論：額爾敦-烏日勒可上調(diào)MCAO/R大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF、NGF表達(dá)，促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化，從而保護(hù)神經(jīng)元，進(jìn)而起到腦保護(hù)作用，這可能是額爾敦-烏日勒治療“白脈”病的傳統(tǒng)功效機(jī)制之一。

額爾敦-烏日勒 MCAO/R模型大鼠 腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子 神經(jīng)生長因子

缺血性腦卒中（Ischemic Cerebral Stroke，ICS）是卒中最常見的疾病類型。近年來研究證實，發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢，致殘率、致死率大約為80%，是一種突然起病的腦部血液循環(huán)障礙性疾病，給患者家庭及社會都帶來巨大的精神與經(jīng)濟(jì)壓力。目前以溶栓法治療恢復(fù)缺血腦細(xì)胞、組織血液灌流，可挽救瀕臨死亡的腦細(xì)胞，但血流再灌注在某些情況下會進(jìn)一步導(dǎo)致細(xì)胞、組織損傷和功能障礙，造成腦缺血再灌注損傷（Cerebral Ischemia Reperfusion Injury，CIRI）。CIRI是由于血流再灌注后引起的繼發(fā)性損傷，是目前最受關(guān)注的問題之一。本課題組前期研究[1]發(fā)現(xiàn)：額爾敦-烏日勒能顯著改善缺血性腦損傷大鼠的神經(jīng)行為學(xué)功能，并減輕腦水腫，減小缺血再灌注腦梗塞范圍，表明額爾敦-烏日勒對局灶性腦缺血再灌注損傷有較好的保護(hù)作用。本研究探討額爾敦-烏日勒對MCAO/R大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF及NGF表達(dá)的影響，闡明額爾敦-烏日勒發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的可能機(jī)制。

1 材料

1.1 動物

SPF級健康SD大鼠60只，雄性，約10周齡，體質(zhì)量250-300 g，由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供許可證號：SCXK（軍）2012-0004。普通飼料由內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。

1.2 藥物與試劑

額爾敦-烏日勒（內(nèi)蒙古蒙藥股份有限公司，批號：100336）蒸餾水溶解；銀杏葉片（涿州動樂制藥有限公司，批號：Z20028025）蒸餾水溶解；尼莫地平片（山西亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號：H1402282）蒸餾水溶解；水合氯醛（天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號：MB1699）；腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）、神經(jīng)生長因子（NGF）一抗、二抗試劑盒（北京博奧森生物技術(shù)有限公司，型號：SP0022）；DAB顯色劑、枸櫞酸鹽H6.0及PBS緩沖液pH7.2-7.6（武漢博士德有限公司，型號分別為：AR1022、AR0024及AR0030）；ELISA試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）；Trizol試劑盒（美國 invitrogen，貨號：15596026，批號：47303）；M-MLV反轉(zhuǎn)錄（日本Takara公司，貨號：D2639A，批號：CK3401A）；Oligd（T）（日本Takara公司，貨號：D511，批號：CT2901F）；dNTP（日本Takara公司，貨號：D4030RA，批號：CB3301A）；DNA Marker（日本Takara公司，貨號：D525S，批號：B501A）；SYBR mix（美國ABI，貨號：4472908，批號：1209004）；Agarose（美國Promega公司）；DEPC（美國Sigma公司）；100bp DNA Ladder（北京全式金生物技術(shù)有限公司）；Real-time PCR擴(kuò)增試劑盒（北京中原領(lǐng)先科技有限公司）。

1.3 實驗儀器

栓線（北京沙東生物技術(shù)有限公司），CV-2000型高頻電凝刀（北京康威電子技術(shù)有限公司）；ASP200S型脫水機(jī)、EG1150H型包埋機(jī)（德國LEICA公司）；B1SERIES型生物顯微鏡（德國Motic廠家）；MR23i型臺式高速低溫離心機(jī)、FINESSE325型切片機(jī)（美國Thermo公司）；ABI7500型實時熒光定量PCR儀（美國ABI公司）；Biophotometer型紫外分光光度儀、5417C型臺式高速常溫離心機(jī)、Reference型微量加樣器（德國eppendorf公司）；HB-202型恒溫金屬?。ū本┲形鬟h(yuǎn)大有限公司）；SIM-F124型制冰機(jī)（日本SANYO電機(jī)公司）；GelDoc2000型凝膠成像系統(tǒng)、穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀（美國伯樂Bio-rad公司）；BINTA2020D型全自動凝膠成像系統(tǒng)（北京賓達(dá)英創(chuàng)科技有限公司）。

2 方法

2.1 動物分組與處理

取清潔級健康SD大鼠60只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為假手術(shù)組（I組）、模型組（II組）、尼莫地平片組（III組）、額爾頓-烏日勒組（IV組），每組15只，采用改良Zea-Longa法，制備MCAO/R模型。假手術(shù)組與模型組分別灌胃蒸餾水，陽性對照組每日給予尼莫地平片0.62 mg·kg-1，治療組每日給予額爾敦-烏日勒6.2 mg·kg-1，連續(xù)給藥14 d。所有實驗大鼠均單籠飼養(yǎng)，限食量，每大鼠每日30 g，自由飲水。實驗結(jié)束后，每組隨機(jī)選取5只大鼠用10%水合氯醛麻醉，快速取腦，稱重，將與腦組織相連的硬腦膜剝離切斷延髓，棄去奧球、小腦和低位腦干后，將視交叉平面前后2-5 mm處冠狀切開大腦，留取中間部分置4 ℃ 4%多聚甲醛溶液中固定24 h，剃度酒精常規(guī)脫水，二甲苯透明，浸石蠟包埋，切片。HE染色切片3 μm厚，隔5取1貼于載玻片上，進(jìn)行HE和SP染色，光鏡下觀察大鼠腦組織形態(tài)。每組剩余10只大鼠用10 %水合氯醛0.35 mL/100g麻醉，快速取腦，稱重，剝離硬腦膜，切斷延髓，棄去嗅球、小腦和低位腦干后，用冰生理鹽水沖凈腦組織表面的血液，在冰盤上快速剝離缺血側(cè)腦皮質(zhì)，稱重，并將缺血側(cè)半球腦皮質(zhì)分為兩部分，分別迅速精確稱量，用液氮迅速冷凍，然后轉(zhuǎn)移到-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 實驗指標(biāo)

2.2.1 各組大鼠腦組織病理學(xué)

取各組鼠腦切片行常規(guī)HE染色。石蠟切片（3 μm）→常規(guī)脫蠟至水→去氧化層→上行逐級脫水→中性樹膠封片→光學(xué)顯微鏡觀察。

2.2.2 各組大鼠腦組織BDNF、NGF免疫組化染色

操作步驟：石蠟切片（3 μm）→常規(guī)脫蠟至水→0.01 mol·L-1PBS浸泡5 min→抗原修復(fù)→3 % H2O215 min→滴加A室溫15 min→傾去液體，吸去切片和組織周圍液體，勿洗→稀釋后的兔抗大鼠一抗（1:150）4 ℃ 1 h→0.01 mol·L-1PBS浸泡3×3 min→滴加B室溫孵育15 min→0.01 mol·L-1PBS浸泡3× 3 min→滴加C室溫孵育15 min→0.01 mol·L-1PBS浸泡3×3 min→DAB顯色→自來水沖3 min，終止顯色→蘇木素復(fù)染3 min→水洗3 min→鹽酸乙醇分化10 s →水洗3 min→1%伊紅染液浸染2 s→上行逐級脫水→中性樹膠封片→光學(xué)顯微鏡觀察。

細(xì)胞計數(shù)及統(tǒng)計：在相同的光亮強(qiáng)度，分別于10倍目鏡×4、20、40倍物鏡下，用圖像分析儀對免疫陽性細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。每只大鼠取6張腦片，每張大鼠腦缺血部位切片隨機(jī)取6個視野，求其算術(shù)平均值，結(jié)果±S表示，并用分組t檢驗法進(jìn)行檢驗各組細(xì)胞數(shù)量差異。

2.2.3 腦前額葉皮質(zhì)BDNF及NGF的含量

取凍存的腦前額葉皮質(zhì)，保持2-8℃的溫度融化，加入一定量的PBS（pH7.4），手工法將組織充分勻漿化，3 000-4 000 r·min-1離心15 min左右，輕輕吸取上清液分裝后，按BDNF及NGF試劑盒說明書，采用雙抗夾心ELISA法檢測各組大鼠皮質(zhì)BDNF及NGF的含量，其余冷凍備用。

2.2.4 腦前額葉皮質(zhì)BDNF mRNA及NGF mRNA的表達(dá)

取凍存的腦前額葉皮質(zhì)，放入預(yù)冷的研缽中加入液氮進(jìn)行快速研磨，采用RNA提取試劑盒常規(guī)提取出總RNA，于-80 ℃保存。用核酸紫外分光光度計測定經(jīng)稀釋的RNA提取物的OD值和濃度，判斷RNA純度，計算RNA濃度。采用25 μL反轉(zhuǎn)錄體系合成cDNA。反應(yīng)條件：42 ℃反應(yīng)60 min，70 ℃滅活 10 min。取反轉(zhuǎn)錄后產(chǎn)物cDNA作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增以磷酸甘油醛脫氫酶（Glyceraldehydephosphate Dehydrogenase，GAPDH）基因mRNA作為內(nèi)參照，引物序列由上海生工生物工程有限公司合成。BDNF的上游引物序列為5'-CTGGATGAGGACCAGAAGGT-3’，下游引物序列為5'-CAGAAAGAGCAGAGGAGGCT-3’，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為117 bp；NGF的上游引物序列為5'-CACTCTGAGGTGCATAGCGT-3’，下游引物序列為5'-GCTTCAGGGACAGAGTCTCC-3’，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為125 bp；GAPDH的上游引物序列為5'-GGCATGGACTGTGGTCATGA-3'，下游引物序列為5'-GAGCCAAGACACCTCAAACTC-3'，擴(kuò)增產(chǎn)物長度為128 bp。Real-Time PCR反應(yīng)體系為20 μL，含SYBR Premix Ex TaqTM （2×）10 μL，PCR Forward primer（10 pmoL·μL-1）0.5 μL，PCR Reverse primer（10 pmoL·μL-1）0.5 μL，cDNA模板2.0 μL，ddH2O 8.0 μL反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性2 min，然后45次循環(huán)，每次循環(huán)條件為94 ℃變性15 s，60 ℃退火，延伸60 s。每個樣本重復(fù)3次。利用RT-PCR 儀數(shù)據(jù)分析軟件（7500 System SDS Software）得出BDNF及NGF的CT值。

2.3 統(tǒng)計學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 大鼠腦組織形態(tài)學(xué)變化

假手術(shù)組腦前額葉皮質(zhì)細(xì)胞層次清晰，排列緊密而有序，細(xì)胞結(jié)構(gòu)、形態(tài)正常，神經(jīng)細(xì)胞胞漿、核染色均勻，核仁清楚，核膜完整，間質(zhì)內(nèi)未見出血、壞死、水腫；模型組：左側(cè)大腦缺血范圍內(nèi)可見皮質(zhì)及紋狀體有片狀壞死，細(xì)胞排列松散，形態(tài)不規(guī)則，少量神經(jīng)元殘存，神經(jīng)細(xì)胞與細(xì)胞周圍間質(zhì)分離，細(xì)胞深染固縮，胞漿尼氏體消失，胞核固縮，核仁消失。額爾敦-烏日勒組及陽性對照組大鼠腦組織病理改變減輕，有所減輕細(xì)胞水腫情況，但可見細(xì)胞變性、壞死，細(xì)胞排列較紊亂，胞核模糊或不可見。結(jié)果參見圖1。

3.2 大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF、NGF免疫組化染色

實驗結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠皮質(zhì)BDNF、NGF陽性細(xì)胞數(shù)較多，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組相比，尼莫地平片組大鼠皮質(zhì)BDNF陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多，額爾敦-烏日勒組大鼠皮質(zhì)BDNF、NGF陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其作用與尼莫地平片組相當(dāng)。結(jié)果見表1、圖2-圖4。

圖1 各組大鼠腦切片HE染色(×400倍)

表1 各組大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF、NGF陽性細(xì)胞數(shù)的比較(±s， n=10)

表1 各組大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF、NGF陽性細(xì)胞數(shù)的比較(±s， n=10)

注：與假手術(shù)組相比，*P＜0.05；與模型組相比，#P＜0.05。

50.66±3.93 65.66±6.91組別劑量/mg·kg-1BDNF NGF I -II -58.50±5.85*71.50±4.08*III 0.62 66.33±5.64*#77.50±5.08*IV 6.20 75.16±4.35*#95.16±4.95*#

圖2 各組大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF、NGF陽性細(xì)胞數(shù)的比較

3.3 大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF、NGF的含量情況

采用雙抗夾心ELISA法檢測大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF、NGF含量的影響。實驗結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠皮質(zhì)BDNF、NGF蛋白含量較高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組相比，尼莫地平片組與額爾敦-烏日勒組大鼠皮質(zhì)BDNF、NGF蛋白含量明顯增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果見表2、圖5。

3.4 大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF mRNA、NGF mRNA的表達(dá)情況

采用RT-PCR法檢測大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF mRNA、NGF mRNA表達(dá)的影響，RT-PCR結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，其他組大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF mRNA、NGF mRNA表達(dá)普遍增高（P＜0.05），額爾敦-烏日勒組的分別是假手術(shù)組的3.43、2.49倍，尼莫地平片組的是假手術(shù)組的1.44、1.42倍，模型組是假手術(shù)組的1.27、1.30倍，額爾敦-烏日勒組明顯高于模型組（P＜0.05）。結(jié)果見表3、圖6。

4 討論

圖3 各組大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF免疫組化染色(×400倍)

圖4 各組大鼠腦前額葉皮質(zhì)NGF免疫組化染色(×400倍)

據(jù)文獻(xiàn)報道，局灶性缺血損傷后，BDNF、NGF表達(dá)都開始上調(diào)，在不同的過程參與調(diào)節(jié)神經(jīng)再生。并明顯促進(jìn)缺血后神經(jīng)元的存活和生長發(fā)育并能夠防止他們受損死亡，改善神經(jīng)元的病理狀態(tài)，促進(jìn)受損神經(jīng)元再生及分化成熟，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)（Central Nervous System，CNS）損傷修復(fù)中具有重要作用。但由于神經(jīng)營養(yǎng)因子（Neurotrophic Factor，NTFS）多為大分子肽，難以通過血腦屏障，因此外周給藥難以達(dá)到作用部位。而腦內(nèi)給藥又會加重缺血損傷，且操作復(fù)雜。所以，充分誘導(dǎo)內(nèi)源性NTFs 的表達(dá)，可能是治療缺血神經(jīng)元損傷的重要途徑。BDNF和NGF由神經(jīng)元和神經(jīng)元支配的靶器官或星形膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，具有多種生物活性。腦缺血后，腦神經(jīng)細(xì)胞的損傷程度與BDNF和NGF的表達(dá)含量密切相關(guān)[3,4]。由靶區(qū)（海馬及皮質(zhì)）產(chǎn)生的NGF 可經(jīng)逆行運輸?shù)街袠猩窠?jīng)系統(tǒng)基底前腦膽堿能神經(jīng)元胞體，發(fā)揮其靶源性營養(yǎng)作用。缺血再灌注損傷的輕重與BDNF mRNA 表達(dá)的含量有相關(guān)性，損傷過重反而抑制其表達(dá)。Lee等[5]發(fā)現(xiàn)缺血1周后可見年輕大鼠海馬CA 區(qū)和皮層內(nèi)BDNF蛋白的免疫活性明顯增加，但mRNA 變化不明顯。這種蛋白含量和mRNA含量不一致的現(xiàn)象，出現(xiàn)在海馬的CA1 區(qū)和齒狀回之間。缺血再灌注過程可明顯提高大鼠海馬部位BDNF mRNA表達(dá)含量。小強(qiáng)度跑臺運動可在缺血再灌注作用的基礎(chǔ)上進(jìn)一步提高海馬部位BDNF mRNA含量[6]。李娜等[7]發(fā)現(xiàn)缺血組隨著腦缺血再灌注時間的延長，在大腦梗死周邊區(qū)皮質(zhì)中BDNF陽性神經(jīng)元表達(dá)呈規(guī)律性變化，于腦缺血再灌注3 h表達(dá)開始增加，至24 h達(dá)高峰，之后開始下降，但直至7 d，其表達(dá)仍高于假手術(shù)組。成體大鼠短暫局灶性腦缺血后，BDNF和GDNF的表達(dá)都開始增加。Liu Xing-Long等[8]發(fā)現(xiàn)ADSCs（脂肪間充質(zhì)干細(xì)）通過提升NTFs的表達(dá)，促進(jìn)損傷后神經(jīng)修復(fù)，而抑制神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。Srinivas Madduri等[9]發(fā)現(xiàn)在前3天，膠原蛋白神經(jīng)導(dǎo)管釋放2%的NGF，在第14天顯著增強(qiáng)早期神經(jīng)再生的軸突和施旺細(xì)胞遷移產(chǎn)物；與靶向器官有關(guān)的許多協(xié)同作用的NTFs具有增強(qiáng)早期軸突再生作用。Yang Ke-hong等[10]發(fā)現(xiàn)三七皂苷-Rg1可以上調(diào)大鼠大腦皮層BDNF mRNA表達(dá)，促進(jìn)腦內(nèi)BDNF蛋白。三七皂苷-Rg1可以治療腦缺血損傷。Hamed Fanaei等[11]發(fā)現(xiàn)在10天內(nèi)，睪酮明顯增強(qiáng)腦缺血大鼠抗氧化，提高BDNF水平和和細(xì)胞增殖，并恢復(fù)感覺運動。Phatcharida Kaengkan等[12]發(fā)現(xiàn)齊拉西酮、齊拉西酮+NPCs（神經(jīng)祖細(xì)胞）能誘導(dǎo)BDNF mRNA、NGF mRNA表達(dá)。齊拉西酮和NPCs聯(lián)合治療局灶性腦缺血具有增強(qiáng)缺血性腦損傷的神經(jīng)保護(hù)作用。Zhang等[13]發(fā)現(xiàn)川陳皮苷可能通過激活BDNF活性，而保護(hù)大腦缺血性損傷。Gyeyeop等[14]發(fā)現(xiàn)先前跑步機(jī)鍛煉能加強(qiáng)運動能力和BDNF表達(dá)水平，并達(dá)到腦缺血損傷具有保護(hù)神經(jīng)作用。前期適當(dāng)強(qiáng)度的跑步機(jī)鍛煉對中風(fēng)后期康復(fù)至關(guān)重要。Shih等[15]發(fā)現(xiàn)低強(qiáng)度的運動能增強(qiáng)腦缺血大鼠海馬BDNF表達(dá)水平，改善突觸可塑性。其本實驗結(jié)果表明，額爾敦-烏日勒可能通過上調(diào)BDNF、NGF蛋白含量及mRNA相對表達(dá)量，發(fā)揮其靶源性神經(jīng)營養(yǎng)作用和保護(hù)作用，進(jìn)而達(dá)到保護(hù)或修復(fù)受損神經(jīng)元，抑制腦缺血損傷的作用。額爾敦-烏日勒可上調(diào)MCAO/R大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF、NG表達(dá)，促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化，從而保護(hù)神經(jīng)元，進(jìn)而起到腦保護(hù)作用，這可能是額爾敦-烏日勒治療“白脈”病的傳統(tǒng)功效機(jī)制之一。

表2 各組大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF、NGF含量的影響(±s，n=10)

表2 各組大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF、NGF含量的影響(±s，n=10)

注：與假手術(shù)組相比，*P＜0.05；與模型組相比，#P＜0.05。

組別BDNF/pg·mL-1NGF/pg·mL-1I 11.611 0±0.537 7 25.360 8±0.164 7 II 12.726 9±0.284 9*27.385 7±0.933 3*III 13.700 2±0.605 0*#28.740 9±1.144 5*#IV15.1196±0.9089*#40.1986±2.3363*#

圖5 各組大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF、NGF含量的影響

表3 各組大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF mRNA、NGF mRNA表達(dá)的影響(±s，n=10)

表3 各組大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF mRNA、NGF mRNA表達(dá)的影響(±s，n=10)

注：與假手術(shù)組相比，*P＜0.05；與模型組相比，#P＜0.05。

組別BDNF NGF I 0.812 1±0.115 0 0.712 0±0.101 3 II 1.035 3±0.131 3*0.925 6±0.142 0*III 1.168 5±0.153 0*1.008 4±0.033 9*IV 2.784 8±0.537 2*#1.773 1±0.169 7*#

圖6 各組大鼠腦前額葉皮質(zhì)BDNF mRNA、NGF mRNA表達(dá)的影響

1 蓮花,那生桑,麻春杰,等.額爾敦-烏日勒對大腦中動脈阻塞再灌注損傷大鼠的治療作用研究.中國中醫(yī)急癥. 2014, 23(3): 394-396.

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Effects of Eerdun-Wurile on the Expressions of BDNF and NGF in the Prefrontal Cortex in Middle Cerebral Artery Occlusion / Reperfusion (MCAO / R) Injured Rats

Lian Hua1, Ma Chunjie2, Hu Relebagen1, Li Chao2, Tian Haiguang2, Xiao Zhibin3
(1. College of Mongolian Medicine, Inner Mongolia Medical University, Hohhot 010110, China;
2. College of Traditional Chinese Medicine, Inner Mongolia Medical University, Hohhot 010110, China;
3. Library of Inner Mongolia Medical University, Hohhot 010110, China)

The present study aimed to explore the effects of Eerdun-Wurile on brain-derived neurotrophic factor(BDNF) and nerve growth factor (NGF) expressions in the prefrontal cortex of MCAO / R injury rats. Sixty SD male rats of SPF grade were selected to establish the model of MCAO / R with Zea-Longa thread occlusion, and divided into five groups at random: the sham operation group, the model group, the nimodipine group and the Eerdun-Wurile group. After modeling, rats were anesthetized for preparing the brains. The pathomorphological changes of the brains were evaluated by immunohistochemical techniques, such as HE staining and SP. The protein and mRNA expressions of BDNF and NGF in the prefrontal cortex of rats were detected by ELISA and RT-PCR, respectively. As a result, compared with the model group, it was found that the number of necrotic cells in the prefrontal cortex were significantly reduced in the Eerdun-Wurile group (P ＜ 0.05), while the mRNA and protein expressions of BDNF and NGF were significantly increased (P ＜ 0.05). In conclusion, the BDNF and NGF expressions in the prefrontal cortex were up-regulated for stimulating the activation of astrocytes and protecting the neurons with the treatment of Eerdun-Wurile in MCAO / R injured rats, which may be the mechanism of the treatment of Eerdun-Wurile for “white vein” disease.

Eerdun-Wurile, middle cerebral artery occlusion / reperfusion model, brain-derived neurotrophic factor, nerve growth factor

（責(zé)任編輯：姜月瀅，責(zé)任譯審：朱黎婷）

10.11842/wst.2016.07.022

R2-031

A

2015-12-23

修回日期：2016-02-03

＊ 國家自然科學(xué)基金委面上項目（81560700）：額爾敦-烏日勒預(yù)處理對心肌缺血再灌注損傷的作用及其復(fù)雜機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：麻春杰；內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)博士啟動基金項目（2014YKDXBSJJ15）：額爾敦-烏日勒中揮發(fā)性成分的定性研究，負(fù)責(zé)人：蓮花；內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)青年創(chuàng)新基金項目（YKDX2014QNCX018）：額爾敦-烏日勒血清藥物化學(xué)的初步研究，負(fù)責(zé)人：蓮花。

＊＊ 通訊作者：麻春杰，教授，博士，主要研究方向：中蒙醫(yī)藥防治心腦血管疾病的研究。