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        快速檢測(cè)聯(lián)苯菊酯的膠體金層析試紙條研制

        2016-03-18 16:36:38許穩(wěn)健楊星星李細(xì)清李遠(yuǎn)兵嚴(yán)義勇畢思遠(yuǎn)汪鳳林
        安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年7期
        關(guān)鍵詞:單克隆抗體快速檢測(cè)膠體金

        朱 海,許穩(wěn)健,楊星星,付 輝,李細(xì)清,李遠(yuǎn)兵,嚴(yán)義勇,畢思遠(yuǎn),汪鳳林*

        (1.深圳市易瑞生物技術(shù)有限公司,廣東深圳 518101;2.深圳市博英菲生物科技有限公司,廣東深圳 518102)

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        快速檢測(cè)聯(lián)苯菊酯的膠體金層析試紙條研制

        朱 海1,許穩(wěn)健1,楊星星1,付 輝1,李細(xì)清1,李遠(yuǎn)兵1,嚴(yán)義勇1,畢思遠(yuǎn)2,汪鳳林1*

        (1.深圳市易瑞生物技術(shù)有限公司,廣東深圳 518101;2.深圳市博英菲生物科技有限公司,廣東深圳 518102)

        摘要[目的]采用免疫膠體金技術(shù),建立一種快速檢測(cè)聯(lián)苯菊酯的試紙條方法。[方法]利用有機(jī)合成方法制備了聯(lián)苯菊酯半抗原,并與載體蛋白偶聯(lián)得到免疫抗原,利用人工免疫的方法獲得其單克隆抗體,通過(guò)酶聯(lián)免疫法對(duì)制備的單克隆抗體的性能進(jìn)行了驗(yàn)證。聯(lián)苯菊酯膠體金層析試紙條是利用單克隆抗體標(biāo)記膠體金,并將聯(lián)苯菊酯抗原與羊抗鼠IgG分別噴制到硝酸纖維膜上,與樣品墊、吸水墊組裝在PVC襯板上制備而成。[結(jié)果] 聯(lián)苯菊酯膠體金層析試紙條檢測(cè)限為500 ~800 μg/kg,具有速度快、簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。此外,該試紙條與大部分的擬除蟲(chóng)菊酯沒(méi)有明顯的交叉反應(yīng),利用該試紙條可實(shí)現(xiàn)對(duì)莧菜中聯(lián)苯菊酯添加試驗(yàn)的準(zhǔn)確判定。[結(jié)論] 膠體金試紙條方法具有前處理簡(jiǎn)單、檢測(cè)速度快、可以肉眼判斷結(jié)果等優(yōu)點(diǎn),該試紙條有望實(shí)現(xiàn)對(duì)果蔬中聯(lián)苯菊酯殘留的快速篩查。

        關(guān)鍵詞聯(lián)苯菊酯;單克隆抗體;膠體金;快速檢測(cè);免疫層析

        聯(lián)苯菊酯(Bifenthrin,BF)是一種人工合成的擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥,具有殺蟲(chóng)譜廣,擊倒作用快,持效期長(zhǎng),強(qiáng)大的胃毒和觸殺作用等特點(diǎn)[1-2]。聯(lián)苯菊酯已被廣泛用于棉花、茶樹(shù)、果樹(shù)、蔬菜等農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)及白蟻、螨蟲(chóng)等衛(wèi)生害蟲(chóng)的防治[1]。聯(lián)苯菊酯化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,進(jìn)入環(huán)境后不易被分解,其廣泛使用容易導(dǎo)致較大殘留。雖然聯(lián)苯菊酯在人體內(nèi)代謝快,不具有積累的危險(xiǎn),但研究表明,它具有神經(jīng)毒害作用,通過(guò)影響動(dòng)物的神經(jīng)系統(tǒng)和離子通道活性,干擾神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能[3-5]。因而,長(zhǎng)期低劑量飲食含有聯(lián)苯菊酯殘留的初級(jí)農(nóng)產(chǎn)品會(huì)對(duì)人類(lèi)健康造成嚴(yán)重危害。世界衛(wèi)生組織已將聯(lián)苯菊酯歸類(lèi)為中等毒性/中度危害的類(lèi)別。世界上多個(gè)國(guó)家包括中國(guó)、美國(guó)、加拿大等先后對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中聯(lián)苯菊酯殘留做了限量規(guī)定,其中,歐盟規(guī)定食品中聯(lián)苯菊酯限量為5.0 mg/kg,而我國(guó)規(guī)定了果蔬中聯(lián)苯菊酯的殘留限量為5.0~10.0 mg/kg。聯(lián)苯菊酯殘留是我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品順利出口的瓶頸,因而,發(fā)展快速檢測(cè)聯(lián)苯菊酯殘留的方法對(duì)保證食品安全,確保我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品順利出口具有重要意義。

        目前對(duì)聯(lián)苯菊酯的殘留分析主要采用氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用-負(fù)化學(xué)離子源法、高效液相色譜法、高效薄層色譜法等[6-11]。儀器檢測(cè)方法具有結(jié)果可靠準(zhǔn)確、檢測(cè)限低等優(yōu)點(diǎn),然而,儀器檢測(cè)的方法,樣品前處理繁瑣、時(shí)間長(zhǎng),對(duì)于一些脂溶性含量較高的樣品,提取之后,為了盡量減少其他雜質(zhì)的干擾,一般需要經(jīng)過(guò)固相萃取柱凈化。王麗婷等利用超高效液相色譜及氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定茶葉中的聯(lián)苯菊酯殘留時(shí),提取液先后經(jīng)過(guò)了2種不同的氨基固相萃取柱的凈化[10]。另外,儀器檢測(cè)的方法需要經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)、有豐富經(jīng)驗(yàn)的人員操作,儀器昂貴龐大,檢測(cè)費(fèi)用高,不適合批量樣品的快速檢測(cè)與現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。與儀器檢測(cè)相比,酶聯(lián)免疫分析方法是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種快速定量檢測(cè)方法,它具有檢測(cè)成本低,可同時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)多個(gè)樣品檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)。李波等利用間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附的方法建立了定量測(cè)定方法用于快速測(cè)定[9]。然而,酶聯(lián)免疫方法依然需要有一定經(jīng)驗(yàn)的專(zhuān)業(yè)人員操作,試驗(yàn)結(jié)果受外界因素(溫度、離子強(qiáng)度等)及樣品基質(zhì)影響較大。與酶聯(lián)免疫吸附的方法相比,膠體金免疫層析方法是一種更為簡(jiǎn)便、快速的檢測(cè)方法[12]。膠體金試紙條方法具有前處理簡(jiǎn)單、檢測(cè)速度快、可以肉眼判斷結(jié)果等優(yōu)點(diǎn)。筆者利用膠體金層析的方法,通過(guò)抗原抗體的競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng),研制了一種快速檢測(cè)果蔬中聯(lián)苯菊酯殘留的方法。

        1材料與方法

        1.1材料主要儀器:IKA RV8 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,德國(guó)IKA;加熱攪拌器,河南愛(ài)博特科技發(fā)展公司;LC-MSQDESI液質(zhì)聯(lián)用儀,Applied Biosystems。主要試劑:功夫酸、聯(lián)苯硝基醇、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC)等,安耐吉公司;牛血清蛋白(BSA)、弗氏完全佐劑與弗氏不完全佐劑,美國(guó)Sigma公司;吡啶、二氯甲烷、三氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、氯化亞砜(SOCl2)等有機(jī)試劑,購(gòu)自阿拉丁試劑有限公司。

        1.2聯(lián)苯菊酯半抗原及抗原的合成半抗原的合成路線如圖1所示。稱(chēng)取1.2 g功夫酸(反應(yīng)物1),加入8 mL SOCl280 ℃回流3.0 h,反應(yīng)結(jié)束后將溶劑旋轉(zhuǎn)蒸干,得到中間產(chǎn)物1。在冰浴下,將溶有中間產(chǎn)物1的二氯甲烷溶液緩慢滴加至20 mL含有1.0 g反應(yīng)物2(聯(lián)苯硝基化合物)的氯仿-吡啶(20∶1,V/V)混合溶液中,室溫反應(yīng)4 h,將溶劑蒸干,以正己烷-乙酸乙酯(6∶1,V/V)為展開(kāi)劑,過(guò)硅膠柱純化,得到中間產(chǎn)物2。

        稱(chēng)取1.2 g中間產(chǎn)物2,溶于無(wú)水乙醇中,加入0.5 g 氯化亞錫,75 ℃回流1.5 h后,將蒸干溶劑用稀NaOH溶液將體系調(diào)成微堿性后用乙酸乙酯萃取,之后將有機(jī)相蒸干,以正己烷-乙酸乙酯(5∶1,V/V)為展開(kāi)劑,通過(guò)硅膠柱過(guò)柱純化,得到中間產(chǎn)物3。

        將上述純化好的中間產(chǎn)物3用無(wú)水吡啶溶解后,加入1.0 g丁二酸酐,室溫?cái)嚢?.0 h,溶劑蒸干,萃取、過(guò)柱純化后得到聯(lián)苯菊酯的半抗原。

        稱(chēng)取20 mg聯(lián)苯菊酯半抗原用2.5 mL DMF溶解加入到溶有100 mg BSA的5 mL碳酸緩沖液(0.1 mol/L,pH 9.0),之后加入50 mg EDC,攪拌過(guò)夜后,將反應(yīng)液在0.01 mol/L PBS(pH 7.4)中4 ℃透析24 h,去除未偶聯(lián)的小分子化合物,得到聯(lián)苯菊酯人工抗原,于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

        1.3單克隆抗體的制備及酶聯(lián)免疫(ELISA)表征利用人工抗原免疫方法,免疫6~8周的健康雌性BALB/c小鼠[13]。簡(jiǎn)單介紹如下:首次免疫時(shí),將50 μg人工抗原用弗氏完全佐劑乳化,第2次、3次及第4次免疫時(shí)用不完全佐劑乳化。每次間隔為2~3周。最后一次免疫3 d后,在無(wú)菌的條件下取出小鼠脾細(xì)胞,將其與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0以5∶1的數(shù)量比用聚乙二醇介導(dǎo)方法融合。將融合的細(xì)胞培養(yǎng)后利用有限稀釋法通過(guò)間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA 法選擇單克隆抗體細(xì)胞株,并利用獲得的細(xì)胞誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生腹水,通過(guò)飽和硫酸銨沉淀法純化制得抗聯(lián)苯菊酯的單克隆抗體。將純化的單克隆抗體包被在酶聯(lián)免疫底板上,利用酶聯(lián)免疫的方法測(cè)定單克隆抗體的性能。

        1.4膠體金的制備膠體金是利用檸檬酸鈉還原氯金酸的方法制備而成[14]。具體條件如下:在冷凝回流裝置中的圓底燒瓶中加入100 mL超純水和1 mL 1%的氯金酸溶液,加熱至沸騰后加入1 mL 1%濃度的檸檬酸三鈉溶液,煮沸15 min后,室溫冷卻即可。

        1.5膠體金標(biāo)記抗體分別向4個(gè)離心管里加入0.9 mL上述膠體金溶液,然后,分別加入0.1 mL pH為7.5、8.0、8.4與9.0的Tris緩沖溶液(1 mol/L),混勻后,加入5 μL 0.1 mg/mL聯(lián)苯菊酯單克隆抗體。振蕩均勻后,靜置10 min,觀察膠體金是否團(tuán)聚,選擇標(biāo)記抗體的最佳pH。在最佳pH下,另向4個(gè)含有1 mL膠體金緩沖溶液的離心管中分別加入3、6、9與12 μL聯(lián)苯菊酯單克隆抗體,考察檢測(cè)限處的最佳抗體標(biāo)記量。然后,進(jìn)行放大標(biāo)記。取50 mL膠體金,在合適的pH緩沖溶液里,加入合適體積的聯(lián)苯菊酯單克隆抗體,混勻后,靜置30 min,然后加入1%BSA溶液,封閉4.0 h,離心,復(fù)溶后得到膠體金標(biāo)記聯(lián)苯菊酯單克隆抗體,將其分裝至反應(yīng)杯里,凍干干燥保存?zhèn)溆谩?/p>

        1.6聯(lián)苯菊酯膠體金試紙條的制備將聯(lián)苯菊酯抗原用0.01 mol/L PBS稀釋成1.5 mg/mL。將羊抗鼠IgG用0.01 mol/L PBS稀釋成1 mg/mL。用Biodot噴膜機(jī)將二者以1 μL/cm的速度噴于硝酸纖維膜上,分別形成檢測(cè)線(T)和控制線(C),將噴制好的硝酸纖維膜置37 ℃烤箱中干燥16 h。然后,分別將干燥好的硝酸纖維素膜、吸水墊、樣品墊依次粘貼在PVC襯板上,然后將其切割成4 mm等寬的試紙條備用。

        1.7試紙條檢測(cè)限、交叉反應(yīng)及實(shí)際樣品的加標(biāo)試驗(yàn)試紙條檢測(cè)限測(cè)試過(guò)程大致如下:首先用0.1 mol/L Tris(pH 9.0)緩沖液配制0、500、800、1 000 μg/kg標(biāo)準(zhǔn)品聯(lián)苯菊酯溶液。取3批試紙條進(jìn)行測(cè)試,每個(gè)濃度重復(fù)測(cè)定5次,以驗(yàn)證該試紙條的檢測(cè)限。往反應(yīng)杯中加入200 μL不同溶度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,混勻,室溫孵育6 min后,插入試紙條,繼續(xù)孵育3 min,將試紙條移出微孔,除去下端樣品墊,根據(jù)T線、C線顏色強(qiáng)度差異判斷試驗(yàn)結(jié)果。

        對(duì)于交叉試驗(yàn),分別考察常見(jiàn)類(lèi)似農(nóng)藥順-氯菊酯、胺菊酯、反-氯菊酯、氟氯氰菊酯、醚菊酯、溴氰菊酯、S-氰戊菊酯、氰戊菊酯,配制5 mg/kg上述相關(guān)溶液,加入反應(yīng)杯,按照檢測(cè)限測(cè)試相關(guān)步驟,考察試紙條與上述8種不同的農(nóng)藥的交叉反應(yīng)情況,每種農(nóng)藥重復(fù)測(cè)定5次,判斷試紙條的特異性。

        對(duì)于實(shí)際樣品的標(biāo)準(zhǔn)品加標(biāo)試驗(yàn),以莧菜為例進(jìn)行測(cè)試。首先,稱(chēng)取2份2.0 g新鮮莧菜,用食物攪拌器粉碎,分別加入100 μL 0 mg/kg聯(lián)苯菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液或8 mg/kg聯(lián)苯菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液,混勻,加入9.9 mL 0.1 mol/L Tris(pH 9.0)與10%甲醇溶液,高速勻質(zhì)2 min提取,靜置5 min后,取200 μL上清至反應(yīng)杯,混勻,按上述檢測(cè)限試驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定與判斷,對(duì)照試驗(yàn)與加標(biāo)試驗(yàn)分別重復(fù)20次。

        2結(jié)果與分析

        2.1半抗原及抗原的合成聯(lián)苯菊酯的合成路線如圖1所示,反應(yīng)物1與氯化亞砜反應(yīng)得到其酰氯中間產(chǎn)物1,通過(guò)與聯(lián)苯醇硝基化合物(反應(yīng)物2)反應(yīng)獲得淡黃色結(jié)晶化合物,中間產(chǎn)物2,將其硝基還原后獲得氨基化合物中間產(chǎn)物3,然后通過(guò)與丁二酸酐反應(yīng)獲得聯(lián)苯菊酯半抗原。圖2為聯(lián)苯菊酯半抗原的質(zhì)譜圖,質(zhì)荷比522處的母離子峰可判斷所制備的產(chǎn)物為聯(lián)苯菊酯的衍生物(半抗原)。半抗原與載體蛋白BSA的偶聯(lián)是利用碳二亞胺法[15-16]。

        2.2聯(lián)苯菊酯抗體的ELISA驗(yàn)證為了驗(yàn)證純化后抗體與聯(lián)苯菊酯結(jié)合的能力,利用酶聯(lián)免疫的方法進(jìn)行了驗(yàn)證。圖3是獲得的聯(lián)苯菊酯ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,從圖3中可以得出,聯(lián)苯菊酯抗體對(duì)聯(lián)苯菊酯從10~810 μg/kg具有良好的線性范圍。試驗(yàn)結(jié)果表明,通過(guò)該方法制備的聯(lián)苯菊酯單克隆抗體對(duì)聯(lián)苯菊酯具有高靈敏性,因而,利用該單克隆抗體制備的快速檢測(cè)試紙條,有望實(shí)現(xiàn)對(duì)聯(lián)苯菊酯的快速高靈敏檢測(cè)。

        2.3膠體金標(biāo)記聯(lián)苯菊酯單克隆抗體膠體金是利用檸檬酸鈉還原氯金酸的方法制備而成[14,17]。此方法制備的膠體金為酒紅色溶液,粒徑約為40 nm,最大吸收峰在526 nm處。對(duì)于標(biāo)記的最優(yōu)pH的確定,按照“1.5”中介紹的方法,獲得標(biāo)記的最優(yōu)條件為pH 9.0 Tris緩沖溶液(0.1 mol/L),抗體與膠體金的最佳比例為6 μg抗體/mL膠體金。在此條件下,相同量的抗體所獲得的膠體金聯(lián)苯菊酯單克隆抗體復(fù)合物最穩(wěn)定,沒(méi)有出現(xiàn)團(tuán)聚現(xiàn)象。因而,該試驗(yàn)采用pH 9.0 Tris緩沖溶液(0.1 mol/L),6 μg抗體/mL膠體金進(jìn)行標(biāo)記。

        2.4聯(lián)苯菊酯試紙條的檢測(cè)限圖4是利用制備的聯(lián)苯菊酯試紙條,對(duì)不同濃度的聯(lián)苯菊酯重復(fù)5次檢測(cè)的一組代表性結(jié)果。從圖4中可以看出,當(dāng)聯(lián)苯菊酯的濃度分別為0、500、800以及1 000 μg/kg時(shí),試紙條中T線的顏色逐漸變?nèi)?,而C線的顏色逐漸增加。當(dāng)聯(lián)苯菊酯的濃度為0 μg/kg時(shí),T線強(qiáng)度明顯強(qiáng)于C線強(qiáng)度,檢測(cè)結(jié)果為陰性;當(dāng)聯(lián)苯菊酯的濃度為500 μg/kg時(shí),T線強(qiáng)度與C線強(qiáng)度相當(dāng),結(jié)果為弱陽(yáng)性;當(dāng)聯(lián)苯菊酯的濃度為800 μg/kg時(shí),T線強(qiáng)度比C線強(qiáng)度弱,結(jié)果為陽(yáng)性;當(dāng)聯(lián)苯菊酯的濃度為1 000 μg/kg時(shí),T線基本消失,結(jié)果為強(qiáng)陽(yáng)性。該結(jié)果表明,試驗(yàn)研制的試紙條對(duì)聯(lián)苯菊酯的檢測(cè)限為500~800 μg/kg,試驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性好。

        2.5交叉反應(yīng)表1是試紙條分別對(duì)5 mg/kg的8種農(nóng)藥重復(fù)5次測(cè)試的結(jié)果。從表1中可以看出,試紙條對(duì)8種農(nóng)藥重復(fù)5次試驗(yàn)的結(jié)果均為陰性。該結(jié)果表明,試紙條對(duì)8種不同的農(nóng)藥(5 mg/kg)沒(méi)有交叉反應(yīng)。這8種農(nóng)藥的結(jié)構(gòu)與聯(lián)苯菊酯非常類(lèi)似,因而證明該試紙條具有良好的特異性。

        2.6實(shí)際樣品的加標(biāo)試驗(yàn)表2為將新鮮莧菜粉碎后,加入聯(lián)苯菊酯標(biāo)準(zhǔn)品,利用提取液提取后,直接用試紙條進(jìn)行重復(fù)20次檢測(cè)的試驗(yàn)結(jié)果。從表2中可以得出,沒(méi)有加入聯(lián)苯菊酯的對(duì)照試驗(yàn)中,20次的檢測(cè)結(jié)果均為陰性,而當(dāng)提取液中濃度為800 μg/kg的聯(lián)苯菊酯時(shí),20次檢測(cè)的結(jié)果均為陽(yáng)性。該結(jié)果表明,該試紙條能夠?qū)舛葹?00 μg/kg的聯(lián)苯菊酯進(jìn)行準(zhǔn)確報(bào)陽(yáng),檢測(cè)結(jié)果可靠,重現(xiàn)性好。因而,該試紙條有望對(duì)果蔬中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行快速篩查。

        表2莧菜加標(biāo)試驗(yàn)結(jié)果

        Table 2Detection results of standard addition of bifenthrin into edible amaranth

        3結(jié)論

        該研究利用有機(jī)合成的方法制備了聯(lián)苯菊酯的半抗原,通過(guò)人工免疫小鼠的方法制備了對(duì)聯(lián)苯菊酯具有高特異性識(shí)別能力的單克隆抗體。試驗(yàn)將制備的單克隆抗體標(biāo)記到膠體金表面,分裝至微孔反應(yīng)杯凍干。將聯(lián)苯菊酯抗原與羊抗鼠二抗噴涂在硝酸纖維素膜后,將樣品墊、硝酸纖維素膜、吸水墊依次黏附在PVC地板制備了聯(lián)苯菊酯快速檢測(cè)試紙條。該試紙條的檢測(cè)限為500~800 μg/kg,能滿足歐盟及我國(guó)對(duì)聯(lián)苯菊酯限量的規(guī)定。該方法快速,操作簡(jiǎn)單,無(wú)需復(fù)雜前處理過(guò)程,有望對(duì)果蔬中聯(lián)苯菊酯殘留進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速篩查。

        參考文獻(xiàn)

        [1] 鄧明學(xué),譚有龍,唐美欣,等.聯(lián)苯菊酯等6種農(nóng)藥對(duì)柑桔木虱成蟲(chóng)室內(nèi)毒力測(cè)定及田間藥效試驗(yàn)[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2009(15):169-173.

        [2] 王愛(ài)芬,李小鷹.聯(lián)苯菊酯的應(yīng)用開(kāi)發(fā)研究綜述[J].白蟻科技,2000(2):3-10.

        [3] WOLANSKY M J,MCDANIEL K L,MOSER V C,et al.Influence of dosing volume on the neurotoxicity of bifenthrin[J].Neurotoxicology and teratology,2007,29(3):377-384.

        [4] 呂曉靜,于維森,崔靜.茶葉中聯(lián)苯菊酯氣相色譜質(zhì)譜法的測(cè)定及其對(duì)小鼠毒性試驗(yàn)的結(jié)果[J].職業(yè)與健康,2014(4):456-458.

        [5] CAO Z,CUI Y,NGUYEN H M,et al.Nanomolar bifenthrin alters synchronous Ca2+oscillations and cortical neuron development independent of sodium channel activity[J].Molecular pharmacology,2014,85(4):630-639.

        [6] BELTRAN J,PERUGA A,PITARCH E,et al.Application of solid-phase microextraction for the determination of pyrethroid residues in vegetable samples by GC-MS[J].Analytical and bioanalytical chemistry,2003,376(4):502-511.

        [7] HUA X,LIU X,YIN W,et al.A sensitive monoclonal antibody-based enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of bifenthrin in a chemical soil barrier[J].Science of the total environment,2015,502:246-251.

        [8] 樊瑋,湯鋒,岳永德.高效薄層色譜法分析茶葉中高效氯氟氰菊酯和聯(lián)苯菊酯農(nóng)藥殘留[J].分析儀器,2010(2):36-39.

        [9] 李波,施海燕,王鳴華.聯(lián)苯菊酯酶聯(lián)免疫吸附分析方法研究[J].分析化學(xué),2008(1):34-38.

        [10] 王麗婷,王波,周?chē)?,?超高效合相色譜及氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定茶葉中聯(lián)苯菊酯[J].分析化學(xué),2015(7):1047-1052.

        [11] 董振霖,楊春光,薛大方,等.氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定植物源性食品中殘留的聯(lián)苯菊酯[J].色譜,2009(1):82-85.

        [12] 李月明.雙酚A單克隆抗體制備及膠體金免疫層析試紙條的研制[D].廣州:廣東工業(yè)大學(xué),2012.

        [13] CARROLL F I,ABRAHAM P,GONG P K,et al.The synthesis of haptens and their use for the development of monoclonal antibodies for treating methamphetamine abuse[J].Journal of medicinal chemistry,2009,52(22):7301-7309.

        [14] TURKEVICH J,STEVENSON P C,HILLIER J.A study of the nucleation and growth processes in the synthesis of colloidal gold[J].Discussions of the faraday society,1951,11:55-75.

        [15] LIU W,HOWARTH M,GREYTAK A B,et al.Compact biocompatible quantum dots functionalized for cellular imaging[J].Journal of the American chemical society,2008,130(4):1274-1284.

        [16] BARTCZAK D A G.Kanaras,preparation of peptide-functionalized gold nanoparticles using one pot EDC/Sulfo-NHS coupling[J].Langmuir,2011,27(16):10119-10123.

        [17] MIESZAWSKA A J,MULDER W J M,F(xiàn)AYAD Z A,et al.Multifunctional gold nanoparticles for diagnosis and therapy of disease[J].Molecular pharmaceutics,2013,10(3):831-847.

        Development of Colloidal Gold Immunochromatograhic Strip for Rapid Detection of Bifenthrin

        ZHU Hai, XU Wen-jian, YANG Xing-xing, WANG Feng-lin*et al

        (Shenzhen Yirui Biological Technology Co. Ltd., Shenzhen, Guangdong 518101)

        Key wordsBifenthrin; Monoclonal antibody; Colloidal gold; Rapid detection; Immunochromatography

        Abstract[Objective] A rapid strip detection method for bifenthrinis was established based on immune colloidal gold technology. [Method] The hapten of bifenthrin was prepared via organic synthesis method, and was conjugated with the carrier protein to obtain the antigen. Monoclonal antibody was obtained with the artificial immune method and its affinity was verified with the enzyme immunoassay. The colloidal gold immunochromatographic strip was prepared with monoclonal antibody conjugated gold colloid which is stored in microwells, and a PVC liner which is assembled with nitrocellulose membrane sprayed with bifenthrin antigen and goat anti-mouse IgG, sample pad and absorbent pad.[Result] The strip had a detection limit in the range of 500-800 μg/kg with the advantages of fastness, easiness, etc. In addition, the strip did not cross-react with most of the pyrethroid pesticides. With the strip, the detection of bifenthrin in edible amaranth was accurately reported. [Conclusion] The colloidal gold strip method has advantages of simple pre-treatment, rapid detection and has potential of fast screening bifenthrin residues in fruits and vegetables.

        基金項(xiàng)目廣東省科學(xué)技術(shù)廳項(xiàng)目“食品安全快速檢測(cè)技術(shù)工程中心”(GCZX20140509163151273);深圳市科技創(chuàng)新委員會(huì)項(xiàng)目“食源性致病菌磁性熒光納米材料快速檢測(cè)試劑盒和現(xiàn)場(chǎng)便攜式手持檢測(cè)儀研發(fā)”(2013B040402001)。

        作者簡(jiǎn)介朱海(1973- ),男,廣東深圳人,副研究員,博士,從事食品安全快速檢測(cè)研究。*通訊作者,博士,從事農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)研究。

        收稿日期2015-12-03

        中圖分類(lèi)號(hào)TS 207.5+3

        文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

        文章編號(hào)0517-6611(2016)07-059-04

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