鄭昱鄭建芳(.河南省人民醫(yī)院 河南鄭州 450003;.新鄉(xiāng)市常樂制藥有限責(zé)任公司 河南新鄉(xiāng) 45363)

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大蒜油對小鼠免疫功能影響的研究

鄭昱1鄭建芳2
(1.河南省人民醫(yī)院 河南鄭州 450003;2.新鄉(xiāng)市常樂制藥有限責(zé)任公司 河南新鄉(xiāng) 453613)

【摘要】目的 探討不同劑量大蒜油對正常小鼠免疫功能的影響?方法 160只健康雌小鼠隨機分為4批,每批分為4籠,分別編號1～4號,每籠10只;4批小鼠中每批1號籠為空白對照,2?3?4號籠分別按照2.0 mg/kg?4.0 mg/kg?8.0 mg/kg低?中?高3個劑量大蒜油進行喂養(yǎng)31 d,第1批4籠小鼠進行臟器/體質(zhì)量比值測定;第2批實驗小鼠進行碳廓清實驗;第3批實驗小鼠進行小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗;第4批小鼠進行小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗?結(jié)果2?3?4號籠小鼠臟器/體質(zhì)量比值與1號籠比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);高劑量大蒜油組小鼠的吞噬指數(shù)明顯高于其他兩組,碳廓清能力提高(P＜0.05);食用大蒜油小鼠吞噬率均高于未食用的1號籠(P＜0.05),并且隨著食用劑量的增加,吞噬率也成正比增高;食用大蒜油小鼠光密度差值均高于對照1籠小鼠(P＜0.05)?結(jié)論 大蒜油具有提高小鼠免疫功能的效果?

【關(guān)鍵詞】大蒜油;碳廓清能力;巨噬細胞;淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗

大蒜油,又叫大蒜素,是從大蒜中提取的一類與水不相混溶的油狀成分的總稱,具有大蒜特有的辛辣味?大蒜油是大蒜的主要活性成分,具有抗菌消炎?提高機體免疫能力?預(yù)防和治療心血管系統(tǒng)疾病?降血脂?保護肝臟?防癌抗癌和抗衰老等多種作用[1-4]?本研究旨在探討大蒜油對小鼠免疫功能的影響作用,為大蒜保健功能的開發(fā)利用提供參考?

1 材料與方法

1.1 實驗藥物 大蒜油,由許昌元化生物科技有限公司生產(chǎn),批號20141120,避光,置陰涼干燥處保存?實驗時使用大豆油配制成相應(yīng)劑量?

1.2 實驗動物 選擇清潔級健康昆明種雌性小鼠160只[北京華阜康生物科技股份有限公司,許可證號:SCXK(京2014-0004)],體質(zhì)量為(20±2)g,隨機分為4批,每批40只小鼠,隨機分為4籠,分別編號1?2?3?4,每籠10只,所有小鼠統(tǒng)一進行基礎(chǔ)標準喂養(yǎng)?

1.3 實驗儀器 電子天平?UV1700紫外分光光度計?二氧化碳培養(yǎng)箱?低速離心機?顯微鏡?無菌手術(shù)器械?微量注射器(25μl)?細胞計數(shù)器?24孔細胞培養(yǎng)板?玻璃平皿?200目篩網(wǎng)?計時器?血色素吸管?載玻片?紗布?試管等?生理鹽水?Hank's液?RPMⅠ1640培養(yǎng)液?小牛血清?酸性異丙酮?MTT?PBS緩沖液?印度墨汁?0.1%Na2CO3溶液?雞紅細胞?甲醇?Giemsa染液等?

1.4 給藥劑量 4批小鼠中每批1號籠為空白對照,2?3?4號籠分別按照2.0 mg/kg?4.0 mg/kg?8.0 mg/kg低?中?高3個劑量進行喂養(yǎng),連續(xù)喂養(yǎng)31 d?

1.5 實驗方法

1.5.1 臟器/體質(zhì)量比值測定 喂養(yǎng)31 d后將第1 批4籠小鼠稱重,脫頸椎處死,取小鼠胸腺及脾臟,用濾紙將臟器表面血污吸干,去除筋膜,稱重,計算胸腺/體質(zhì)量?脾臟/體質(zhì)量比值,統(tǒng)計胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)?

1.5.2 碳廓清實驗 第2批實驗小鼠喂養(yǎng)31 d后稱重,印度墨汁以生理鹽水稀釋4倍,按照小鼠每10 g體質(zhì)量0.1 ml計算,進行小鼠尾靜脈注射,立即計時,在注射2?10 min分別小鼠內(nèi)眥靜脈叢取血20μl,迅速注入2 ml的0.1%Na2CO3溶液內(nèi),搖勻,以0.1% Na2CO3溶液為空白對照,于紫外分光光度計(酶標儀)中在600 nm波長處測量光密度值(OD)?脫頸椎處死小鼠,取肝臟和脾臟,吸凈臟器表面污血,稱重,以吞噬指數(shù)(a)表示小鼠碳廓清的能力,計算公式:

K=(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1)

a=體質(zhì)量/(肝重+脾重)×K1/3

注:K:廓清指數(shù);t1:注射墨汁第1次取血時間;t2:注射墨汁第2次取血時間;OD1:t1時的血液標本的吸光光度值;OD2:t2時的血液標本的吸光光度值?

1.5.3 小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗 第3批實驗小鼠喂養(yǎng)31 d,小鼠腹腔注射20%的雞紅細胞懸濁液1 ml,輕揉小鼠腹部,加速懸濁液分散,計時30 min,脫頸椎處死,將小鼠仰位置于鼠板上,腹腔注射生理鹽水2 ml,繼續(xù)輕揉腹部20次,吸取腹腔巨噬細胞洗液1 ml,滴于2片載玻片上,放入墊有濕紗布的搪瓷盒內(nèi),放入37℃孵箱內(nèi)溫育30 min,用生理鹽水沖洗,除去未貼片細胞,自然晾干,加入1∶1的丙酮-甲醇溶液固定,10 min后,再使用Giemsa-磷酸緩沖染色10 min,用蒸餾水漂洗后,吹干,進行鏡檢?油鏡下計數(shù),每片計數(shù)100個巨噬細胞,計算100個腹腔巨噬細胞中吞有雞紅細胞的吞噬數(shù),計算吞噬率和吞噬指數(shù),計算公式:

吞噬百分率(P%)=吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數(shù)/計數(shù)的吞噬細胞數(shù)×100%

吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細胞總數(shù)/計數(shù)的巨噬細胞數(shù)

X=sin-1√p

1.5.4 小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗 第4批小鼠喂養(yǎng)31 d,脫頸椎處死,無菌環(huán)境下取脾臟,置于含有Hank's液的無菌培養(yǎng)皿中,用鑷子將脾臟磨碎,制成單個細胞懸液,過200目篩過濾,制成細胞懸液,繼續(xù)使用Hank's液洗2次,每次使用離心機以1 000 r/min離心5 min,將細胞懸浮于1 ml的完全培養(yǎng)液中,鏡檢計數(shù),調(diào)整細胞濃度到3×106個/ml,然后將脾細胞懸液分2孔加入24孔培養(yǎng)板中,每孔1 ml,其中1孔中加入75μl的ConA液,另1孔不做處理,為空白對照,將培養(yǎng)板置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h,箱中二氧化碳濃度為5%,恒溫37℃,培養(yǎng)到68 h時,吸取兩孔中的上清液0.7 ml,加入0.7 ml不含小牛血清的RPMⅠ1640培養(yǎng)液,以及50μl的MTT,繼續(xù)培養(yǎng)至72 h?從培養(yǎng)箱中拿出,兩孔均加入1ml酸性異丙酮,進行吹打混勻,至紫色結(jié)晶完全溶解,將溶液移入比色杯中,用紫外-可見分光光度計進行比色測定,測定波長為570 nm,光密度差值越大,淋巴細胞增殖能力越強,計算方法:

光密度差值=ODConA-OD無ConA

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 所有實驗資料使用SPSS 18.0軟件進行數(shù)據(jù)處理,定量資料以(±s)表示,P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義?

2 結(jié)果

2.1 大蒜油對小鼠臟器/體質(zhì)量比值的影響 3籠小鼠以不同劑量大蒜油喂養(yǎng)31 d后,與未食用大蒜油的1號籠小鼠相比,臟器/體質(zhì)量比值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)?見表1?

表1 大蒜油對小鼠臟器/體質(zhì)量比值的比較(n=10,±s)

表1 大蒜油對小鼠臟器/體質(zhì)量比值的比較(n=10,±s)

組別 1號籠 2號籠 3號籠 4號籠P大蒜油劑量/(mg/kg)2.0 4.0 8.0胸腺指數(shù) 3.61±0.30 3.45±0.47 3.44±0.38 3.52±0.51 >0.05脾臟指數(shù) 4.25±0.64 4.50±0.22 4.52±0.43 4.40±0.48 >0.05 0

2.2 大蒜油對小鼠碳廓清能力的影響 喂食大蒜油的3籠小鼠吞噬指數(shù)均高于1號籠,并且高劑量組小鼠的吞噬指數(shù)明顯高于其他兩組(P＜0.05)?見表2?

2.3 大蒜油對小鼠巨噬細胞吞噬雞紅細胞的影響

食用大蒜油小鼠吞噬率均高于未食用的1號籠(P＜0.05),并且隨著食用劑量的增加,吞噬率也成正比增高?見表3?

表2 大蒜油對小鼠碳廓清能力吞噬指數(shù)的比較(n=10,±s)

表2 大蒜油對小鼠碳廓清能力吞噬指數(shù)的比較(n=10,±s)

組別 大蒜油劑量/(mg/kg) 吞噬指數(shù)/aP 1號籠6.08±0.71 2號籠 2.0 6.32±0.51 >0.05 3號籠 4.0 6.44±0.48 >0.05 4號籠0 8.0 7.15±0.39 ＜0.05

表3 大蒜油對小鼠巨噬細胞吞噬雞紅細胞的比較(n=10±s)

表3 大蒜油對小鼠巨噬細胞吞噬雞紅細胞的比較(n=10±s)

組別 大蒜油劑量/(mg/kg)吞噬率/P%吞噬率平方根反正弦轉(zhuǎn)換值/XP 1號籠0 15±8 0.39±0.18 2號籠 2.0 26±7 0.47±0.14 ＜0.05 3號籠 4.0 30±5 0.53±0.11 ＜0.05 4號籠8.0 37±8 0.66±0.09 ＜0.01

2.4 大蒜油對小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力的影響 食用大蒜油小鼠光密度差值均高于對照1籠小鼠(P＜0.05)?見表4?

表4 大蒜油對小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力的比較(n=10,±s)

表4 大蒜油對小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力的比較(n=10,±s)

組別 大蒜油劑量/(mg/kg) 光密度差值P 1號籠0.11±0.03 2號籠 2.0 0.13±0.03 ＜0.05 3號籠 4.0 0.16±0.02 ＜0.05 4號籠0 8.0 0.17±0.04 ＜0.05

3 討論

大蒜為百合科蔥屬植物蒜的鱗莖,自古大蒜就為醫(yī)食同源,一方面能夠促進消化?增強食欲?分解動物性蛋白質(zhì)利于人體吸收;另一方面,其被譽為“天然廣譜抗生素",具有抗菌?抗病毒?抗原蟲?抗炎等作用?近年來研究顯示,大蒜越來越多的藥效如預(yù)防動脈硬化?降血脂?抗癌等被人們認識?接受,大蒜主要化學(xué)成分有揮發(fā)油?氨基酸?硫胺等,揮發(fā)油中大蒜辣素為主要有效成分[5]?

本研究結(jié)果顯示,2?3?4號籠小鼠臟器/體質(zhì)量比值與1號籠比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);高劑量大蒜油組小鼠的吞噬指數(shù)明顯高于其他兩組,碳廓清能力提高(P＜0.05);食用大蒜油小鼠吞噬率均高于未食用的1號籠(P＜0.05),并且隨著食用劑量的增加,吞噬率也成正比增高;食用大蒜油小鼠光密度差值均高于1號籠小鼠(P＜0.05)?由此說明,大蒜油對小鼠臟器?體質(zhì)量無明顯影響,可提高小鼠的碳廓清能力?巨噬細胞的吞噬能力,增加淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力,增強小鼠免疫功能?

參考文獻

[1] 郭濤,儲曉琴,顏鳴,等.大蒜油亞微乳的安全性及體外抗真菌作用[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2005,22(6):458-462.

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[5] 張靜,孔德.大蒜油活性成分?制劑制備和配伍應(yīng)用[J].世界臨床藥物,2010,1(10):611-615.

A study of the effects of garlic oil on the immune function ofm ice

Zheng Yu1,Zheng Jianfang2
(1.People's Hospital of Henan Province,Zhengzhou 450003,China;2.Xinxiang Changle Pharmaceutical Co.,Ltd,Xinxiang 453613,China)

【Abstract】Objective To study the efects of diferent doses of garlic oil on the immune function ofmice.Methods 160 healthy femalemice were random ly divided into 4 groups,each group was divided into 4 cages respectively,no.1～4,10 per cage.No.1 cage in each group was selected as ck,2,3,4 cageswere fed with 2.0 mg/kg,4.0 mg/kg,8.0mg/kg(low,me-dium and high)three doses of garlic oil respectively for 31 d.The viscera/weight ratio was determined in the first4 cages;car-bon clearance testwas carried out in the second batch;the experiments thatmacrophages in abdominal cavity ofmice swalowed up chicken red blood cels was carried out in the third batch;the lymphocyte transformation test was carried out in the fouth batch.Resu lts There was no significant diference in viscera/weight ratio between no.1 cage and no.2～4 cages(P>0.05).The phagocytic index in high-dose garlic oil group was significantly higher than the other two groups(P＜0.05),and the car-bon clearance ability was improved.The phagocytic ratio ofmice eating garlic oilwas higher than that in no.1 cage(P＜0.05),and with the increase of consumption of dosage,the phagocytic ratio was increased.Optical density diference ofmice eating gar-lic oilwas higher than that in no.1 cage(P＜0.05).Conclusion Garlic oil could improve the immune function ofmice.

【Key words】garlic oil;carbon clearance ability;macrophages;lymphocyte transformation test

(收稿日期:2015-09-20)

【中圖分類號】R 285

doi:10.3969/j.issn.1004-437X.2016.01.003