陳海英 趙 蕾

（1.贛州市公安局司法鑒定中心，江西贛州341000; 2.公安部物證鑒定中心，北京100038）

三聯(lián)體親子鑒定案件突變分析

陳海英1趙 蕾2

（1.贛州市公安局司法鑒定中心，江西贛州341000; 2.公安部物證鑒定中心，北京100038）

對(duì)12例不符合遺傳規(guī)律的三聯(lián)體親子鑒定案例進(jìn)行檢驗(yàn)，分析其對(duì)親子鑒定案件結(jié)果的影響及解決方法。收集678例親子鑒定中12例均只存在一個(gè)STR基因座突變的案件血液樣本，采用三種不同的擴(kuò)增試劑檢測(cè)，分析突變來(lái)源并計(jì)算其父權(quán)指數(shù)。11例均為一步突變，第12例則在D 21S11基因座疑父與子代存在三步突變，經(jīng)過增加體系，其共有7個(gè)STR基因座與子代不符合遺傳關(guān)系。對(duì)于親子鑒定中出現(xiàn)少數(shù)基因座不符合遺傳規(guī)律時(shí)，需要綜合分析，必要時(shí)應(yīng)增加檢測(cè)基因座的數(shù)量，避免親子關(guān)系的誤判。

STR突變親子鑒定

短串聯(lián)重復(fù)序列（short tandem repeat, STR）是目前使用最廣泛的遺傳標(biāo)記，因其多態(tài)性豐富，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度短，廣泛地應(yīng)用于法醫(yī)物證鑒定中[1]。STR多態(tài)性片段長(zhǎng)度<400bp，易于擴(kuò)增。但STR位于人類基因組高變區(qū)，突變率較高，在親子鑒定中不容忽視。本文采用IdentifilerTMPlus試劑盒（美國(guó)ABI公司）檢驗(yàn)的678例三聯(lián)體親子鑒定中的12例均只存在一個(gè)STR基因座突變的案件中的基因突變進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1 材料和方法

1.1 樣本和DNA提取

678例三聯(lián)體親子鑒定案例樣本，取自贛州司法鑒定中心和贛州市公安局日常檢驗(yàn)和檢案中的樣本。均采用Chelex-100法提取模板DNA，4℃保存。

1.2 DNA擴(kuò)增與檢測(cè)

采用IdentifilerTMPlus試劑盒（美國(guó)ABI公司）、MicroreaderTM21 ID System和MicroreaderTM23sp ID System擴(kuò)增試劑對(duì)樣本進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物在3130XL型遺傳分析儀（美國(guó)ABI公司）上進(jìn)行毛細(xì)管電泳分型。

1.3 TR基因座突變來(lái)源分析

按照文獻(xiàn)［2］的方法判斷突變來(lái)源。在父親或母親的等位基因中，根據(jù)這兩個(gè)等位基因與新等位基因的差異來(lái)確定，差異小的定為新等位基因的來(lái)源，若差異相同，則無(wú)法確定來(lái)源，因此可將突變類型分為“來(lái)自父親”、“來(lái)自母親”和“無(wú)法確定”3類。

2 結(jié)果

2.1 IdentifilerTMPlus試劑盒檢測(cè)

在678例三聯(lián)體親子鑒定中，僅通過Identi?filerTMPlus試劑盒檢測(cè)后存在一個(gè)STR基因座不符合遺傳規(guī)律的共12例。

2.2 突變來(lái)源和突變步數(shù)分析

分析上述12例親子鑒定中發(fā)生突變的STR分型數(shù)據(jù)，前11例均為一步突變，其中9例突變來(lái)自父親，2例突變?yōu)闊o(wú)法確定突變來(lái)源。第12例則在D21S11基因座上生母分型確定的前提下，子代在疑父分型中無(wú)法找到來(lái)源。

2.3 MicroreaderTM試劑盒檢測(cè)

采用蘇州閱微基因技術(shù)有限公司生產(chǎn)的Mi?croreaderTM21 ID System和MicroreaderTM23sp ID System擴(kuò)增試劑對(duì)12例親子鑒定樣本進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)，檢測(cè)基因座達(dá)到39個(gè)STR基因座，前11例案件樣本經(jīng)過檢驗(yàn)其增加的STR基因基因座均符合遺傳關(guān)系，第12例案件樣本經(jīng)過檢驗(yàn)，其中疑父在D21S11、PentaE、D10S1435、D17S1290、D3S3045、D15S659、D7S3048等7個(gè)STR基因座與子代不符合遺傳關(guān)系。

3 討論

DNA分子結(jié)構(gòu)為雙螺旋結(jié)構(gòu)。在DNA復(fù)制的過程中，其新生鏈和模板鏈分離時(shí)，在STR基因座的重復(fù)區(qū)域發(fā)生堿基錯(cuò)配形成一個(gè)或數(shù)個(gè)重復(fù)區(qū)域的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，繼而出現(xiàn)新生鏈比模板鏈延長(zhǎng)或縮短，表現(xiàn)為增加或減少1個(gè)（或數(shù)個(gè)）重復(fù)單位。復(fù)制滑鏈錯(cuò)配通常發(fā)生在重復(fù)次數(shù)較多、串聯(lián)排列的正向重復(fù)序列中[3]，故其突變率較大。

在日常檢案中，對(duì)于STR基因座突變這一現(xiàn)象，不應(yīng)套用定性思維，認(rèn)為突變基因座數(shù)量少于3個(gè)則按照突變考慮而給出不排除親子關(guān)系結(jié)論。如筆者在近幾年采用IdentifilerTMPlus試劑盒檢驗(yàn)的678例三聯(lián)體親子鑒定中統(tǒng)計(jì)出的12例只存在一個(gè)STR基因座突變的案件，依據(jù)GA/T965-2011《法庭科學(xué)DNA親子鑒定規(guī)范》計(jì)算其累計(jì)父權(quán)概率，其中11例案件的父權(quán)概率大于0.9990，并且在增加系統(tǒng)檢驗(yàn)后其增加的STR基因基因座均符合遺傳關(guān)系，故給出肯定結(jié)論；而另1例案件，增加系統(tǒng)檢驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)共有7個(gè)STR基因座疑父與子代不符合遺傳關(guān)系，因此可以排除D21S11為突變所致。

STR基因座等位基因突變普遍存在，為避免錯(cuò)誤的排除親權(quán)關(guān)系。在日常檢案的親子關(guān)系判定中，必需考慮所有符合遺傳關(guān)系和不符合遺傳關(guān)系的基因座分型，計(jì)算其父權(quán)概率，看是否能達(dá)到“支持”或“排除”的結(jié)果。在給出肯定結(jié)論時(shí)，父權(quán)概率要達(dá)到或大于0.9990；在給出否定結(jié)論時(shí)，必須有3個(gè)以上或更多的基因座違反孟德爾遺傳規(guī)律[4]。必要時(shí)應(yīng)增加STR基因座或結(jié)合其他遺傳標(biāo)志進(jìn)一步確認(rèn)，從而保證檢驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性和正確性。

［1］鄧志輝，吳國(guó)光，程良紅，等.13個(gè)STR基因座在親子鑒定案例中的基因突變觀察［J］.中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志，2003，18（3）：150-153.

［2］趙珍敏，柳燕，林源.IdentifilerTM系統(tǒng)在親子鑒定中的突變觀察和分析［J］.法醫(yī)學(xué)雜志，2007，23（4）：290-293.

［3］李茜，程良紅，魏天莉，等.親子鑒定中STR基因座的基因突變分析［J］.中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志，2008，23（6）：394-396.

［4］伍新堯，李建金，伍祥林，等.單親案的親權(quán)概率的計(jì)算及認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)［J］.中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志，2000，S1(1).