茍文來(lái) 劉 芳

江蘇大學(xué)食品與生物工程學(xué)院

梯度稀釋補(bǔ)料酶膜耦合反應(yīng)制備牛奶蛋白ACE抑制肽的研究

茍文來(lái) 劉 芳

江蘇大學(xué)食品與生物工程學(xué)院

隨著現(xiàn)代人生活質(zhì)量的提升，不合理膳食導(dǎo)致國(guó)內(nèi)心血管疾病(尤其是高血壓)的發(fā)病率逐年升高。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)過(guò)多的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)易引起血壓升高[1]。在目前人們發(fā)現(xiàn)和分離出的ACE抑制肽活性物質(zhì)中，乳源ACE有著安全性高、無(wú)毒和無(wú)副作用等優(yōu)點(diǎn)，由此引發(fā)研究者們的關(guān)注[2-3]。該文結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)牛奶蛋白ACE 抑制肽的酶膜耦合技術(shù)制備工藝及其優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行簡(jiǎn)單綜述，并對(duì)其應(yīng)用前景進(jìn)行了展望。

ACE抑制肽；血壓調(diào)節(jié)；牛奶蛋白；酶膜耦合；制備工藝

目前研究所運(yùn)用的酶膜耦合技術(shù)制備多肽的過(guò)程主要是在不補(bǔ)料、等濃度補(bǔ)料或補(bǔ)水的情況下進(jìn)行，在一定程度上可以解決產(chǎn)物抑制效應(yīng)和產(chǎn)物過(guò)度降解等問(wèn)題，但是不能有效的提高生產(chǎn)效率和酶利用率，具有一定的局限性，對(duì)工業(yè)化生產(chǎn)的實(shí)際問(wèn)題解決還存在不足之處[4]。新型酶膜耦合技術(shù)的工藝模型的開(kāi)發(fā)可以為工業(yè)化生產(chǎn)帶來(lái)更多的經(jīng)濟(jì)效益。

1.酶膜耦合技術(shù)

1.1 酶膜耦合反應(yīng)器

隨著膜技術(shù)的快速發(fā)展，酶膜反應(yīng)器受到各國(guó)的廣泛關(guān)注。酶膜反應(yīng)器利用膜兩側(cè)壓力差將產(chǎn)物及時(shí)排出，與酶促反應(yīng)有機(jī)結(jié)合，是一種酶解反應(yīng)與產(chǎn)品分離、純化相結(jié)合的新型膜分離技術(shù)[5-6]。從上世紀(jì)五十年代開(kāi)始到現(xiàn)在，酶膜反應(yīng)器被廣泛地應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域，包括食品領(lǐng)域。酶膜反應(yīng)器的優(yōu)缺點(diǎn)兼并，其潛能還未完全開(kāi)發(fā)利用，有待進(jìn)一步的強(qiáng)化和發(fā)掘[7]。

1.2 酶膜耦合技術(shù)在國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展

近二十年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)酶膜耦合技術(shù)進(jìn)行了大量的研究，文獻(xiàn)報(bào)道也日益增多。國(guó)內(nèi)學(xué)者有的介紹了酶膜耦合反應(yīng)器的相關(guān)內(nèi)容，指出其在食品領(lǐng)域的應(yīng)用前景；有的證明了酶膜耦合技術(shù)可以消除產(chǎn)物抑制作用，避免產(chǎn)物過(guò)度酶解。國(guó)外學(xué)者有的利用酶膜反應(yīng)器連續(xù)水解大豆蛋白，制得小分子 ACE 抑制肽，并通過(guò)體外研究證明產(chǎn)品的穩(wěn)定性；有的用 35%的乳清蛋白和 10 kDa 的超濾膜進(jìn)行酶膜耦合試驗(yàn)，在最優(yōu)條件下該反應(yīng)可穩(wěn)定運(yùn)行 7 h。丁青芝、馬海樂(lè)等人研究了三種酶膜耦合模型制備活性多肽，即間歇式、連續(xù)補(bǔ)水和等濃度補(bǔ)料，結(jié)果表明三種反應(yīng)模型都能提高生產(chǎn)效率，其中等濃度補(bǔ)料模式可顯著提高酶利用率和蛋白轉(zhuǎn)化率[8]。

2.三種補(bǔ)料模式介紹

2.1 梯度稀釋補(bǔ)料酶膜耦合反應(yīng)試驗(yàn)

梯度稀釋補(bǔ)料酶膜耦合反應(yīng)，采取向反應(yīng)器中連續(xù)補(bǔ)加濃度由高到低呈梯度稀釋狀態(tài)的底物溶液的補(bǔ)料方式[9]。試驗(yàn)中要保證恒定在酶解反應(yīng)的最適溫度范圍之內(nèi)，并實(shí)現(xiàn)酶解反應(yīng)及產(chǎn)物分離，設(shè)置裝置使配料和補(bǔ)料自動(dòng)化。

2.2 等濃度補(bǔ)料酶膜耦合反應(yīng)試驗(yàn)

等濃度補(bǔ)料酶膜耦合反應(yīng)采用定值補(bǔ)料的方式進(jìn)行試驗(yàn)。補(bǔ)料時(shí)補(bǔ)加與原料濃度相同的溶液。補(bǔ)料時(shí)總流速為 14 mL/min，保證補(bǔ)料速度與出料速度相同，維持反應(yīng)液面高度恒定。

2.3 先補(bǔ)料后補(bǔ)水酶膜耦合反應(yīng)試驗(yàn)

先補(bǔ)料后補(bǔ)水酶膜耦合反應(yīng)采用定值補(bǔ)料的方式進(jìn)行試驗(yàn)，不同點(diǎn)在于酶膜耦合反應(yīng)時(shí)間 300 min 內(nèi)，前半段時(shí)間只啟動(dòng)兩泵之一向反應(yīng)器中連續(xù)補(bǔ)加相同濃度的原料，同時(shí)維持液面恒定；后半段時(shí)間只啟動(dòng)另一泵向反應(yīng)器中連續(xù)補(bǔ)加水，同樣維持液面恒定。

2.4 三種補(bǔ)料模式效果比較

三種補(bǔ)料模式酶膜耦合反應(yīng)的蛋白轉(zhuǎn)化率均隨時(shí)間變化而增加，其中梯度稀釋補(bǔ)料酶膜耦合反應(yīng)模式蛋白轉(zhuǎn)化率最高，其次是先補(bǔ)料后補(bǔ)水酶膜耦合反應(yīng)模式，而等濃度補(bǔ)料酶膜耦合反應(yīng)模式蛋白轉(zhuǎn)化率最低。而且梯度稀釋補(bǔ)料酶膜耦合反應(yīng)模式下的多肽得率最高。由此可見(jiàn)，梯度稀釋補(bǔ)料酶膜耦合反應(yīng)，既克服了等濃度補(bǔ)料反應(yīng)器內(nèi)濃度過(guò)高造成的物料浪費(fèi)和膜污染嚴(yán)重等問(wèn)題，又克服了先補(bǔ)料后補(bǔ)水生產(chǎn)的不穩(wěn)定性，極大地提高了酶解反應(yīng)效率，為活性多肽的工業(yè)化生產(chǎn)提供了一種更為高效的方法[10]。

3.前景展望

在對(duì)不補(bǔ)料酶膜耦合單因素試驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化時(shí)，以后可考慮在不同壓力條件下膜通量及蛋白轉(zhuǎn)化率隨時(shí)間的變化，達(dá)到進(jìn)一步優(yōu)化的目的；梯度稀釋補(bǔ)料酶膜耦合系統(tǒng)的相關(guān)參數(shù)可進(jìn)行優(yōu)化，如加酶量、循環(huán)泵轉(zhuǎn)速、反應(yīng)時(shí)間等因素以及考察其對(duì)酶解效率的影響，期望得到更為精確的技術(shù)參數(shù)。

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