劉昆昂 張根偉 馬宏

食用菌菌種的提純復(fù)壯方法

劉昆昂 張根偉 馬宏

食用菌產(chǎn)業(yè)是非耕地、立體式、高效生態(tài)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)，因其栽培料主要是農(nóng)業(yè)副產(chǎn)品、農(nóng)業(yè)廢棄物和加工業(yè)下腳料，且用水少、不施肥、不用藥、不需陽(yáng)光，在河北省農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整過(guò)程中，顯示了“富營(yíng)養(yǎng)、節(jié)資源、高收益、保生態(tài)”的強(qiáng)大產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢(shì)，成為農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)提檔升級(jí)的重要領(lǐng)域。食用菌菌種作為發(fā)展食用菌的基礎(chǔ)生產(chǎn)資料，對(duì)食用菌生產(chǎn)起著關(guān)鍵性作用，直接影響產(chǎn)量和質(zhì)量。然而調(diào)查河北省內(nèi)多家食用菌生產(chǎn)廠家發(fā)現(xiàn)，由于長(zhǎng)期科研投入不足、管理不善，食用菌菌種在儲(chǔ)藏及傳代過(guò)程中普遍存在著生產(chǎn)性能變劣、種性衰退等現(xiàn)象。因此，食用菌菌種的提純復(fù)壯十分必要。

一、菌種退化及特點(diǎn)

菌種退化是指在傳代、保藏和長(zhǎng)期栽培過(guò)程中，由于環(huán)境轉(zhuǎn)變、轉(zhuǎn)管次數(shù)過(guò)多、菌種使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等因素，某些原來(lái)的優(yōu)良性狀可能會(huì)逐漸消失或變?nèi)?，造成可遺傳的變異，出現(xiàn)菌絲長(zhǎng)勢(shì)弱、抗性差、出菇遲、產(chǎn)量低、品質(zhì)低劣等現(xiàn)象。我們研究發(fā)現(xiàn)，退化的食用菌菌株存在以下幾個(gè)特點(diǎn)：

1、種性不純。同一試管不同部位的菌絲對(duì)峙培養(yǎng)，有拮抗帶；出菇不一致，畸形菇多；不同子實(shí)體組織分離的菌株對(duì)峙培養(yǎng)，有拮抗帶。

2、菌絲體病態(tài)。食用菌菌種為絲狀真菌，退化的菌株顯微鏡觀察可見(jiàn)細(xì)胞壁穿孔、不平整，鎖狀聯(lián)合少等現(xiàn)象。

3、活力低。菌株生長(zhǎng)慢，菌絲不粗壯，木質(zhì)素、纖維素等酶活性低。

二、菌種退化的原因

菌種退化的實(shí)質(zhì)是遺傳物質(zhì)發(fā)生了可遺傳的變異，是一個(gè)從量變到質(zhì)變的漸變過(guò)程，與其自身的遺傳特性和所處的環(huán)境密切相關(guān)。其原因一是遺傳變異。菌種種性較差或不穩(wěn)定，出現(xiàn)極性變化與單核化，改變了原有的遺傳特性；或在栽培過(guò)程中與其他品種雜交，發(fā)生基因重組，出現(xiàn)分離現(xiàn)象；二是環(huán)境因素。包括營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的種類(lèi)、含量和比例等營(yíng)養(yǎng)條件，溫度、濕度、空氣、光線、酸堿度等環(huán)境條件及機(jī)械創(chuàng)傷和病蟲(chóng)害等；三是自然退化。在菌種繼代培養(yǎng)時(shí)，由于長(zhǎng)期栽培和傳代次數(shù)太多，個(gè)體的菌齡越來(lái)越大，新陳代謝機(jī)能逐漸減弱，導(dǎo)致優(yōu)良性狀逐漸退化。

三、菌種的提純復(fù)壯

菌種退化分為可逆和不可逆兩種類(lèi)型，可逆的退化現(xiàn)象可通過(guò)提純復(fù)壯恢復(fù)其優(yōu)良特性。生產(chǎn)上常用的的菌種提純復(fù)壯方法有二，一是“斷橋法”。菌絲尖端分離提純復(fù)壯。其特點(diǎn)是僅可篩選出生長(zhǎng)速度快的菌株，而生長(zhǎng)速度快往往并非高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)食用菌菌株；二是原生質(zhì)體再生法?？僧a(chǎn)生大量原生質(zhì)體，需要對(duì)產(chǎn)生的大量原生質(zhì)體進(jìn)行分離、篩選和出菇驗(yàn)證，技術(shù)難度較大。

我所發(fā)明一種食用菌菌種簡(jiǎn)便、高效提純復(fù)壯及新品種選育的方法，其可在較短的時(shí)間內(nèi)提高退化菌株的生活力，提高食用菌產(chǎn)量和質(zhì)量。具體方法：

1、初步提純復(fù)壯。利用含有20ppm結(jié)晶紫的PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)退化的食用菌菌種，報(bào)紙包好，20—28℃培養(yǎng)，待菌絲生長(zhǎng)至培養(yǎng)皿邊緣，挑取菌落外緣尖端菌絲，接入食用菌試管種培養(yǎng)基中。

2、初步提純復(fù)壯的菌株篩選。通過(guò)菌落形態(tài)觀察、顯微鏡觀察，篩選顯微鏡觀察鎖狀聯(lián)合數(shù)量多、均勻、清晰，菌絲濃厚、粗壯、整齊的菌株進(jìn)行出菇試驗(yàn)。

3、出菇試驗(yàn)。將經(jīng)過(guò)篩選的初步提純復(fù)壯菌株在常規(guī)食用菌試管種培養(yǎng)基中活化，接入到食用菌常規(guī)栽培料中進(jìn)行出菇試驗(yàn)，考察出菇早晚、產(chǎn)量、菇形、菇質(zhì)等，產(chǎn)量、質(zhì)量、性狀符合生產(chǎn)要求的即為提純復(fù)壯的菌株。

相較常規(guī)食用菌新品種誘變、雜交選育6-8年的選育周期，該食用菌菌種的提純、復(fù)壯及新品種選育的方法是提高菌種質(zhì)量的簡(jiǎn)便、高效方法。

四、延緩菌種退化的措施

生產(chǎn)上，在菌種尚未退化之前，轉(zhuǎn)接儲(chǔ)藏和栽培中的一些措施可以延緩菌種退化，（1）菌種分離時(shí)，有計(jì)劃地交替使用無(wú)性繁殖和有性繁殖；（2）由于在轉(zhuǎn)管過(guò)程中受機(jī)械創(chuàng)傷等原因，會(huì)使菌種產(chǎn)生不利突變，因此，在生產(chǎn)中盡量控制母種轉(zhuǎn)管次數(shù)；（3）創(chuàng)造適宜的環(huán)境條件，保證菌種的正常生長(zhǎng)和繁殖，在栽培過(guò)程中，選擇優(yōu)良的個(gè)體及時(shí)進(jìn)行組織分離，盡可能保留原始種，并妥善保存和儲(chǔ)藏；（4）結(jié)合實(shí)際采用適宜的方法保藏菌種，盡量減少菌種保藏期間的衰退；（5）在菌種轉(zhuǎn)接保藏時(shí)，經(jīng)常改變一下培養(yǎng)基配方也可以防止菌種退化，配制營(yíng)養(yǎng)成分豐富的培養(yǎng)基，對(duì)因營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)不適而衰退的菌種有一定作用。

（作者單位：河北省科學(xué)院生物研究所）

河北省科技計(jì)劃項(xiàng)目（16227303D）；河北省科學(xué)院科技計(jì)劃項(xiàng)目(16301)。