劉 燕，周長(zhǎng)春，田 強(qiáng)，孫阿妮，豐義寬，李國(guó)慶

·臨床醫(yī)學(xué)·

結(jié)腸癌組織中p53凋亡刺激蛋白家族表達(dá)水平及其與臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性研究

劉 燕1，周長(zhǎng)春2，田 強(qiáng)1，孫阿妮3，豐義寬1，李國(guó)慶1

目的：探討結(jié)腸癌組織中p53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族表達(dá)水平及其與臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性。方法：選取結(jié)腸癌患者的結(jié)腸癌組織共50例，以及健康人的正常結(jié)腸組織共30例。分析ASPP家族與結(jié)腸癌的組織分化程度、浸潤(rùn)深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床特征的相關(guān)性。結(jié)果：結(jié)腸癌組織與正常結(jié)腸組織中ASPP1和ASPP2的陽(yáng)性表達(dá)率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而結(jié)腸癌組織中iASPP的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于正常結(jié)腸組織(P<0.05)；結(jié)腸癌組織中iASPP的陽(yáng)性表達(dá)率在腫瘤病理分級(jí)間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而ASPP1和ASPP2的陽(yáng)性表達(dá)在腫瘤病理分級(jí)間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05和P<0.01)；結(jié)腸癌組織中ASPP1與iASPP的陽(yáng)性表達(dá)在腫瘤浸潤(rùn)深度間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，ASPP2的陽(yáng)性表達(dá)在腫瘤浸潤(rùn)深度間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而結(jié)腸癌組織中ASPP1、ASPP2和iASPP的陽(yáng)性表達(dá)均在淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論：iASPP在結(jié)腸癌組織和正常組織的陽(yáng)性表達(dá)的差異，表明其有可能成為結(jié)腸疾病良、惡性的診斷及鑒別指標(biāo)之一；ASPP2的陽(yáng)性表達(dá)與結(jié)腸癌病理分期和分級(jí)有相關(guān)關(guān)系，表明其有可能成為結(jié)腸癌預(yù)后指標(biāo)之一。

結(jié)腸腫瘤；p53凋亡刺激蛋白；免疫組織化學(xué)；細(xì)胞凋亡

結(jié)腸癌是常見(jiàn)的胃腸道惡性腫瘤，由于近年來(lái)人們飲食和生活習(xí)慣等因素的影響，其發(fā)病率顯著提高，嚴(yán)重危害人們的健康[1]。結(jié)腸癌早期無(wú)明顯癥狀，患者常常在確診后就失去了根治的機(jī)會(huì)[2]。目前為止發(fā)現(xiàn)的與人類腫瘤相關(guān)性最高的基因是抑癌基因P53，對(duì)維持基因組穩(wěn)定具有關(guān)鍵性的作用。而在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，抑癌基因P53因子發(fā)揮著十分重要的作用，P53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulating protein of P53，ASPP)具有保守的C端序列，可通過(guò)Src同源結(jié)構(gòu)域3以及錨蛋白重復(fù)序列與P53產(chǎn)生相互影響。目前為止，ASPP基因家族中已發(fā)現(xiàn)ASPP1、ASPP2、iASPP三個(gè)成員，其中P53與ASPP1、ASPP2結(jié)合可激活并促進(jìn)其抑癌功能，而與iASPP則會(huì)對(duì)其抑癌功能起抑制作用。研究[3-4]表明，ASPP家族可作為腫瘤早期診斷和治療以及判斷預(yù)后研究的新方向，即通過(guò)促進(jìn)ASPP1和ASPP2的陽(yáng)性表達(dá)，抑制iASPP的陽(yáng)性表達(dá)從而促進(jìn)P53誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤的發(fā)展。但目前少見(jiàn)對(duì)ASPP家族與結(jié)腸癌的關(guān)系的相關(guān)報(bào)道。本研究探討結(jié)腸癌組織中ASPP家族表達(dá)水平及其與臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性?，F(xiàn)作報(bào)道。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2008年3月至2014年11月收治于濰坊市人民醫(yī)院的結(jié)腸癌患者的結(jié)腸癌組織標(biāo)本共50例，男32例，女18例；年齡37～76歲；按組織學(xué)等級(jí)分為高分化腺癌組12例，中分化腺癌組23例，低分化腺癌組分別15例；按TNM分期分為T(mén)1(浸潤(rùn)黏膜下層)組8例，T2(浸潤(rùn)固有肌層)組9例，T3(穿透肌層至漿膜下)組28例，T4(穿透漿膜層和侵及其他臟器)組5例；按有無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移分為有淋巴轉(zhuǎn)移組21例，無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移組29例。同時(shí)選取30例健康人的正常結(jié)腸組織標(biāo)本作為對(duì)照組。

1.2 免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)ASPP1、ASPP2和iASPP表達(dá) 將結(jié)腸癌患者和健康人正常結(jié)腸組織石蠟標(biāo)本按4 μm的厚度進(jìn)行連續(xù)切片，并分別進(jìn)行常規(guī)病理組織檢查(HE染色)和免疫組織化學(xué)染色(SP法)。以已知的陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，用PBS取代一抗作陰性對(duì)照。若腫瘤細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中見(jiàn)棕黃色顆粒則可判定為陽(yáng)性細(xì)胞，高倍鏡下取4個(gè)視野各計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，把染色結(jié)果按陽(yáng)性細(xì)胞百分比分為：-表示陽(yáng)性細(xì)胞<5%；+表示陽(yáng)性細(xì)胞5%～25%；2+表示陽(yáng)性細(xì)胞>25%～50%；3+表示陽(yáng)性細(xì)胞>50%；其中-和+為表達(dá)陰性，2+和3+為表達(dá)陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用χ2檢驗(yàn)和秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)腸癌組織和正常結(jié)腸組中ASPP1、ASPP2和iASPP的陽(yáng)性表達(dá)率比較 結(jié)腸癌組織中ASPP1和ASPP2的陽(yáng)性表達(dá)率與正常結(jié)腸組織差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而結(jié)腸癌組織中iASPP的陽(yáng)性表達(dá)率比正常結(jié)腸組織高(P<0.05)(見(jiàn)表1)。

表1 結(jié)腸癌組織和正常結(jié)腸組中ASPP1、ASPP2和iASPP的陽(yáng)性表達(dá)率比較[n；百分率(%)]

組織類型nASPP1ASPP2iASPP結(jié)腸癌組織5035(70.00)41(82.00)37(74.00)正常結(jié)腸組織3026(86.67)24(80.00)14(46.66)合計(jì)8061(76.25)65(81.25)51(63.75)χ2—2.0290.0496.062P—>0.05>0.05<0.05

2.2 不同病理分級(jí)結(jié)腸癌組織中ASPP1、ASPP2和iASPP陽(yáng)性表達(dá)率比較 高、中、低分化結(jié)腸癌組織中ASPP1的陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；高、中、低分化結(jié)腸癌組織中ASPP2的陽(yáng)性表達(dá)率差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；而高、中、低分化結(jié)腸癌組織中iASPP的陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)表2)。

表2 不同病理分級(jí)結(jié)腸癌組織中ASPP1、ASPP2和iASPP陽(yáng)性表達(dá)率比較[n；百分率(%)]

組織類型nASPP1ASPP2iASPP高分化128(66.67)12(100.00)7(58.33)中分化2320(86.96)21(91.30)19(82.61)低分化157(46.67)△8(53.33)△*11(73.33)合計(jì)5035(70.00)41(82.00)37(74.00)Hc—6.9612.092.37P—<0.05<0.01>0.05

兩兩比較秩和檢驗(yàn)：與高分化比較*P<0.05；與中分化比較△P<0.05

2.3 不同TNM分期結(jié)腸癌組織中ASPP1、ASPP2和iASPP的陽(yáng)性表達(dá)率比較 結(jié)腸癌組織中ASPP1和iASPP在T1、T2、T3、T4期的陽(yáng)性表達(dá)率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而ASPP2在T1、T2、T3、T4期的陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表3)。

表3 不同TNM分期結(jié)腸癌組織中ASPP1、ASPP2和iASPP的陽(yáng)性表達(dá)率比較[n；百分率(%)]

TNM分期nASPP1ASPP2iASPPT188(100.00)8(100.00)6(75.00)T296(66.67)8(88.89)5(55.56)T32819(67.86)23(82.14)21(75.00)T452(40.00)2(40.00)5(100.00)合計(jì)5035(70.00)41(82.00)37(74.00)Hc—5.577.863.30P—>0.05<0.05>0.05

2.4 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無(wú)轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌組織中ASPP1、ASPP2和iASPP陽(yáng)性表達(dá)率比較 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無(wú)轉(zhuǎn)移結(jié)結(jié)腸癌組織中ASPP1、ASPP2和iASPP的陽(yáng)性表達(dá)率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)表4)。

表4 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無(wú)轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌組織中ASPP1、ASPP2和iASPP陽(yáng)性表達(dá)率比較[n；百分率(%)]

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移nASPP1ASPP2iASPP有2115(71.43)18(85.71)18(85.71)無(wú)2920(68.97)23(79.31)19(65.71)合計(jì)5035(70.00)41(82.00)37(74.00)χ2—0.0350.042.58P—>0.05>0.05>0.05

3 討論

ASPP家族能通過(guò)與P53家族的結(jié)合從而控制細(xì)胞的凋亡，是ASPP家族最主要的功能。其中ASPP1和ASPP2可通過(guò)SH3以及錨蛋白重復(fù)序列與P53的DNA結(jié)合域結(jié)合產(chǎn)生相互影響，激活P53的促凋亡功能，并在特異性上使凋亡相關(guān)因素提前表達(dá)；iASPP通過(guò)與ASPP1、ASPP2的競(jìng)爭(zhēng)中與P53結(jié)合，從而抑制P53的促凋亡活性。

有研究[5]顯示，ASPP的表達(dá)失調(diào)明顯影響乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，且ASPP家族成員的表達(dá)在突變型和野生型P53的腫瘤細(xì)胞中均有發(fā)生，而ASPP1和ASPP2的表達(dá)一般下調(diào)，iASPP則相反。有關(guān)白血病的研究[6]顯示，ASPP1在白細(xì)胞中均呈低表達(dá)，而iASPP的表達(dá)則升高，提示ASPP家族各成員的不同表達(dá)是造血系統(tǒng)腫瘤發(fā)生過(guò)程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，ASPP有可能作為白血病診斷其中之一的分子標(biāo)志物。而iASPP在前列腺癌組織中的表達(dá)明顯比正常組織的高，抑制iASPP的表達(dá)后，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)得到有效抑制[7]。有研究[8]表明，幽門(mén)螺旋桿菌感染可能會(huì)由于ASPP2表達(dá)的下調(diào)和iASPP表達(dá)的上調(diào)從而誘發(fā)胃癌。ASPP家族各成員表達(dá)差異對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有重要影響，但其對(duì)結(jié)腸癌影響尚未得到足夠的關(guān)注和研究。因此，本研究采用免疫組織化學(xué)方法對(duì)ASPP家族各成員在結(jié)腸癌組織不同分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，分析二者的相關(guān)關(guān)系以及對(duì)結(jié)腸癌預(yù)后的影響，從而幫助闡明結(jié)腸癌的發(fā)病原理，并為臨床治療結(jié)腸癌提供理論依據(jù)。

本研究中，結(jié)腸癌組織中ASPP1、ASPP2的陽(yáng)性表達(dá)率(70.00%、82.00%)與正常結(jié)腸組織ASPP1、ASPP2的陽(yáng)性表達(dá)率(86.67%、80.00%)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而結(jié)腸癌組織中iASPP的陽(yáng)性表達(dá)率(74.00%)高于正常結(jié)腸組織(46.66%)(P<0.05)，提示iASPP的表達(dá)率的改變可影響結(jié)腸癌的發(fā)生，在腫瘤細(xì)胞的生成中起重要作用，iASPP表達(dá)升高改變P53與DNA的結(jié)合能力，從而抑制P53的促細(xì)胞凋亡功能。因此猜測(cè)iASPP可能會(huì)成為結(jié)腸疾病良、惡性的診斷和鑒別指標(biāo)之一。

本研究中，結(jié)腸癌組織中iASPP與腫瘤細(xì)胞分化程度和浸潤(rùn)深度均無(wú)明顯關(guān)系(P>0.05)，且ASPP家族3個(gè)成員的表達(dá)在淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但ASPP2的陽(yáng)性表達(dá)率在腫瘤細(xì)胞分化程度與浸潤(rùn)深度間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01和P<0.05)，提示ASPP2可能與結(jié)腸癌的惡性程度有緊密關(guān)系，因此ASPP2可能作為結(jié)腸癌預(yù)后指標(biāo)之一。

[1] 王賁士,喬錄新,石英,等.p53凋亡刺激蛋白2抑制奧沙利鉑誘導(dǎo)的結(jié)腸癌細(xì)胞自噬并促進(jìn)凋亡[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2015,31(7):898.

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(本文編輯 劉夢(mèng)楠)

The expression of ASPP family genes and its correlation with clinical pathological features in colon cancer tissue

LIU Yan1,ZHOU Chang-chun2,TIAN Qiang1,SUN A-ni3,FENG Yi-kuan1,LI Guo-qing1

(1.DepartmentofGastroenterology,3.OfficeofInfection,ThePeople′sHospitalofWeifang,WeifangShandong261000;2.DepartmentofInternalMedicine,TheWestBranchofWeifangTraditionalChineseMedicineHospital,WeifangShandong261000,China)

Objective:To explore the expression levels of apoptosis stimulating protein of P53(ASPP) family genes in colon cancer tissue,and its correlation with clinical pathological features.Methods:Fifty colon cancer tissue specimens and 30 normal colon tissue specimens were investigated.The correlations of the ASPP family with the differentiation,depth of invasion and lymph node metastasis of colon cancer were analyzed.Results:The differences of the expressions of ASPP1 and ASPP2 between the colon cancer and normal colon tissue were not statistically significant(P>0.05),and the positive expression rate of iASPP in colon cancer was significantly higher than that in normal colon tissue(P<0.05).The differences of the positive expression rate of iASPP in different tumor pathological grading was not statistically significant(P>0.05),and the differences of the positive expression rate of ASPP1 and ASPP2 in different tumor pathological grading were statistically significant(P<0.05 andP<0.01).The differences of the positive expression rates of ASPP1 and iASPP in different tumor invasion depth were not statistically significant(P>0.05),and the difference of the positive expression rate of ASPP2 in different tumor invasion depth was statistically significant(P<0.05).The differences of the positive expression rates of ASPP1,ASPP2and iASPP in different lymph node metastasis of tumor were not statistically significant(P>0.05).Conclusions:The positive expression of iASPP between colon cancer and normal tissue is different,which may become one index in the diagnosis and differential diagnosis of colon malignant and benign diseases.The positive expression of ASPP2 is correlated with the pathological stage and grade of colon cancer,which may be one prognostic indicator of colon cancer.

colonic neoplasms;apoptosis stimulating protein of p53;immunohistochemistry;apoptosis

2016-01-11

山東省濰坊市人民醫(yī)院1.消化內(nèi)科，3.感染辦公室，261000；2.山東省濰坊市中醫(yī)院西城分院 內(nèi)科，261000

劉 燕(1974-)，女，主治醫(yī)師.

1000-2200(2016)12-1594-03

R 735.35

A

10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.12.017