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14-3-3tau（YWHAQ）基因啟動(dòng)子高度甲基化在子癇前期胎盤中的作用［英］/LiuH…//Placenta.-2014，35（12）.-981-988

背景與目的：子癇前期（preeclampsia，PE）在全球孕婦中的發(fā)生率為3%～5%，該病以孕20周后孕婦出現(xiàn)血壓和尿蛋白升高為主要特征，可導(dǎo)致母嬰不良結(jié)局。研究已證實(shí)14-3-3 tau（YWHAQ）基因敲除參與了PE的發(fā)生發(fā)展，而YWHAQ啟動(dòng)子可能對重度PE患者有不同程度的甲基化作用。研究還發(fā)現(xiàn)，YWHAQ可能對PE患者胎盤基因的表觀遺傳調(diào)控發(fā)揮重要作用。因此，探討YWHAQ甲基化（高或低）可成為識別PE相關(guān)新標(biāo)記物的一種有效途徑，更好地預(yù)測PE發(fā)生及了解其發(fā)病機(jī)制。目前已有學(xué)者對PE組織中YWHAQ序列進(jìn)行了研究，但沒有發(fā)現(xiàn)明顯的甲基化作用。研究目的是通過對PE患者中YWHAQ啟動(dòng)子區(qū)的甲基化水平和14-3-3 tau的表達(dá)情況，及其與TET（teneleven translocation）表達(dá)水平的關(guān)系進(jìn)行分析，探討其對PE發(fā)生發(fā)展的影響。

方法：選擇2012年12月—2013年7月于上海復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院就診的孕婦，其中重度PE患者21例（PE組），同期正常對照孕婦16例（對照組），均為單胎，曾有因PE、臀先露或前次剖宮產(chǎn)而行選擇性剖宮產(chǎn)史。研究對象均無心血管、腎臟或其他高血壓相關(guān)疾病，無吸煙或飲酒史，均簽署了知情同意書。研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。重度PE判斷標(biāo)準(zhǔn)參照2000年國家高血壓教育項(xiàng)目工作組制定標(biāo)準(zhǔn)（National High Blood Pressure Education Program Working Group，2000）。患者基因組DNA分析采用點(diǎn)印跡法（dot-blot assay）和免疫組織化學(xué)法。采用亞硫酸鹽測序、免疫組織化學(xué)法、蛋白質(zhì)印跡法和實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測胎盤YWHAQ甲基化、14-3-3 tau和TET表達(dá)情況。所有數(shù)據(jù)采用GraphPad Prism 5.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

結(jié)果：該研究結(jié)果顯示，PE組胎盤中14-3-3 tau mRNA及其蛋白表達(dá)水平低于對照組（P＜0.01）。PE組胎盤中YWHAQ啟動(dòng)子區(qū)總體甲基化水平高于對照組（P=0.009 5），其中PE組CpG2～4、CpG9、CpG17和CpG19甲基化水平均較對照組升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。PE組胎盤中5-羥甲基胞嘧啶（5-hmC）水平低于對照組（P＜0.001）；PE組胎盤中TET1～3mRNA表達(dá)水平均低于對照組（P＜0.05），其中TET1和TET3蛋白表達(dá)水平在PE組胎盤中表達(dá)較對照組明顯降低（P＜0.001），但TET2表達(dá)下調(diào)不明顯。PE胎盤中5 hmC表達(dá)水平降低與TET表達(dá)減少有關(guān)。5 hmC是在TET酶作用下由5-甲基胞嘧啶（5 mC）轉(zhuǎn)化而來，與對照組比較，PE組胎盤中5 mC表達(dá)水平上調(diào)，但5 hmC表達(dá)下調(diào)（P＜0.001）。免疫組化染色顯示，5 hmC、5 mC和TET1主要表達(dá)于胎盤細(xì)胞核中。

結(jié)論：孕婦胎盤表觀基因組的變化可能破壞胎盤正常功能，引起PE等妊娠期并發(fā)癥。目前胎盤表觀基因組領(lǐng)域的觀點(diǎn)認(rèn)為，孕前或孕期就出現(xiàn)了表觀遺傳調(diào)控的異常，從而導(dǎo)致PE發(fā)生率增加，但對于PE的具體機(jī)制尚不清楚。該研究認(rèn)為PE患者胎盤YWHAQ啟動(dòng)子高度甲基化，引起了14-3-3 tau mRNA及其蛋白表達(dá)水平下調(diào)，從而增強(qiáng)胎盤細(xì)胞的凋亡能力，導(dǎo)致胎盤細(xì)胞碎片進(jìn)入母體血液循環(huán)。因此作為滋養(yǎng)層細(xì)胞重要功能調(diào)節(jié)因子，YWHAQ啟動(dòng)子的甲基化修飾可能參與了PE的發(fā)病過程，但該研究樣本量較小，還有待于擴(kuò)大樣本量進(jìn)行研究。此外，DNA甲基化作用高低依賴于5 mC和5 hmC平衡。PE患者較正常者胎盤組織中5 mC表達(dá)上調(diào)，5 hmC、TET表達(dá)下調(diào)，其中TET1 和TET3表達(dá)明顯減少，提示了TET1和TET3可能在胎盤5 mC轉(zhuǎn)化為5 hmC中起著重要作用。今后還應(yīng)深入探討PE患者胎盤中TET表達(dá)變化的確切原因及其對表觀遺傳作用影響的機(jī)制，從而有助于利用表觀遺傳標(biāo)記物進(jìn)行靶向治療以降低PE發(fā)病率和死亡率。

（秦娟 摘 孫東建 校）

［本文編輯 秦娟］