王洪珍，陳小芳

(江蘇省鎮(zhèn)江市第四人民醫(yī)院生殖中心　212001)

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·臨床研究·

不同稀釋液對化學發(fā)光免疫法測定血清雌二醇濃度的影響*

王洪珍，陳小芳△

(江蘇省鎮(zhèn)江市第四人民醫(yī)院生殖中心212001)

摘要:目的探討不同稀釋液對化學發(fā)光免疫法測定血清高濃度雌二醇(E2)的影響，選擇適用稀釋液，減少檢驗成本支出。方法選取生殖中心20例高值E2(2 522～4 793 pg/mL)的患者血清，分別用E2專用稀釋液，自制低值混合血清及生理鹽水進行10倍稀釋，然后上DXI800化學發(fā)光分析儀檢測并計算結(jié)果，所得各稀釋組E2值與原始值作配對t檢驗并作相關性及線性回歸分析。結(jié)果各稀釋組E2值與原始值比較，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)，低值混合血清組E2值與原始值偏差最小，生理鹽水組偏差超出允許范圍；E2專用稀釋液組，低值混合血清組及生理鹽水組的E2值與原始值的相關系數(shù)分別為0.998、0.998和0.967，回歸分析常數(shù)項E2專用稀釋液組絕對值最小，生理鹽水組絕對值最大。結(jié)論除E2專用稀釋液外，低值混合血清可以用作DXI800化學發(fā)光分析儀測定高濃度E2的替代稀釋液，而生理鹽水不能用作稀釋測定高值E2。

關鍵詞:稀釋；化學發(fā)光免疫；雌二醇

婦產(chǎn)科內(nèi)分泌學的發(fā)展離不開生殖激素測定方法的不斷改進，生殖醫(yī)學的臨床工作要求激素測定結(jié)果準確、快速。其中血清雌二醇(E2)是促排卵方案的一項重要監(jiān)測指標，促排卵方案的應用，E2測量值常超出測定上限4 800 pg/mL。為利于生殖治療中方案的調(diào)整及防治卵巢過度刺激綜合征發(fā)生，臨床要求對超出線性范圍的高濃度E2進行稀釋定量測定，儀器專用E2稀釋液較貴且在保質(zhì)期內(nèi)使用，由于目前此類標本量不多，促使檢測成本較高，為減少檢驗成本支出選擇適用稀釋液，研究者用不同稀釋液對化學發(fā)光免疫法測定高濃度E2進行稀釋測定并對結(jié)果進行統(tǒng)計分析，現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

1.1標本來源收集2014年6～11月本院生殖中心順磁性顆?；瘜W發(fā)光免疫法測定E2結(jié)果為2 522～4 793 pg/mL的患者靜脈血清標本20例，置-30 ℃保存。

1.2儀器與試劑全自動化學發(fā)光儀DXI800和E2測定試劑盒均由美國貝克曼庫爾特公司提供，試劑批號均在有效期內(nèi)。

1.3方法

1.3.1自制低值混合血清的制備方法選擇本實驗室體檢健康男性血清，取體檢結(jié)果無異常，生化指標及血常規(guī)指標均無明顯異常的無溶血、無黃疸、無脂血的新鮮血清標本制成混合血清，再上機檢測混合血清的E2濃度，檢測結(jié)果為20～50 pg/mL時，可作為合格的自制E2標本稀釋液(本實驗的混合血清的E2濃度為35 pg/mL)，然后56 ℃水浴滅活10 h后再3 000 r/min離心10 min，小包裝分裝保存于-30 ℃冰箱，半年內(nèi)有效，使用前30 min置室溫融化，避免反復凍融。

1.3.2檢測方法將20例標本分別用E2專用稀釋液，自制低值混合血清，生理鹽水按1∶10稀釋(50 μL標本+450 μL稀釋液)混勻后上機檢測并計算結(jié)果。 血清E2原始值和不同稀釋方法計算值按原始值、E2專用稀釋液組、低值混合血清組和生理鹽水組分類統(tǒng)計。

1.4統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)分析采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件，對不同稀釋組E2值與原始值之間比較采用配對t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義，使用Pearson相關分析計算不同稀釋組與原始值的相關系數(shù)并擬合線性回歸方程。

2結(jié)果

E2專用稀釋液組中E2水平為(3 421.75±708.52)pg/mL與原始值(3 167.85±657.35)pg/mL比較，差異有統(tǒng)計學意義(t=-17.068,P=0.000)；自制低值混合血清組(3 008.85±642.17)與原始值比較,差異有統(tǒng)計學意義(t=15.582,P=0.000)；生理鹽水組(10 073.6±1 341.38)與原始值比較，差異均有統(tǒng)計學意義(t=-42.608,P=0.000)。E2專用稀釋液組、低值混合血清組和生理鹽水組的E2值與原始值之間的相對差值分別為-8.01%、5.10%和-222.10%；Pearson相關系數(shù)分別為0.998、0.998和0.967；線性回歸方程分別為Y=0.926X-0.639、Y=1.021X+94.63和Y=0.474X-1 607.89；回歸常數(shù)項顯著性分析，P分別為0.989、0.070和0.000；回歸系數(shù)顯著性分析，P均為0.000。

3討論

化學發(fā)光免疫法是目前測定激素類物質(zhì)的常用方法，隨著全自動分析儀的應用，測試簡便快速。但儀器都有一定的檢測范圍，盡管DXI800檢測E2的范圍達20～4 800 pg/mL，但隨著近年生殖醫(yī)學體外受精-胚胎移植臨床工作的開展，促排卵方案的應用，E2測量值常大于4 800 pg/mL，而E2結(jié)果對治療方案的調(diào)整和防治卵巢過度刺激綜合征發(fā)生至關重要，因此需要對超出線性范圍的高濃度E2進行稀釋定量測定。由于不同的稀釋介質(zhì)會對稀釋結(jié)果造成不同的偏差，甚至對臨床醫(yī)生產(chǎn)生誤導，引發(fā)醫(yī)患矛盾和醫(yī)療糾紛。為確保結(jié)果的準確性，應選擇適當?shù)南♂屢海箼z測結(jié)果偏差控制在可允許的范圍內(nèi)。專用E2稀釋液較貴，為減少檢驗成本支出選擇適用稀釋液，采用E2專用稀釋液，自制低值混合血清及生理鹽水對化學發(fā)光免疫法測定的高濃度E2進行稀釋測定并對結(jié)果進行統(tǒng)計分析。

本試驗選取生殖中心20例高值E2(2 522～4 793 pg/mL)的患者血清，分別用E2專用稀釋液，自制低值混合血清及生理鹽水進行10倍稀釋，然后上DXI800化學發(fā)光分析儀檢測并計算結(jié)果，所得各稀釋組E2值與原始值作配對t檢驗，差異均有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。各稀釋組E2值與原始值的相關性與線性回歸分析顯示，E2專用稀釋液組值、低值混合血清組值與原始值相關系數(shù)均為0.998,生理鹽水組值與原始值相關系數(shù)為0.967，三組都呈正相關；回歸系數(shù)顯著性分析P均為0.000，說明三組回歸分析模型整體差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；回歸常數(shù)項即回歸方程截距，E2專用稀釋液組最小，為-0.639，P=0.989表明對于不同濃度E2值，用E2專用稀釋液組值與原始值的回歸方程擬合出的結(jié)果最接近原始值，低值混合血清組，回歸常數(shù)項較大為94.633，但P=0.070,大于0.05，表示常數(shù)項比較差異無統(tǒng)計學意義，對于不同濃度E2值，其回歸方程擬合出的結(jié)果仍接近原始值，生理鹽水組回歸常數(shù)項為-1607.887，P=0.000，表示常數(shù)項差異有統(tǒng)計學意義，對于不同濃度E2值，其回歸方程擬合出的結(jié)果與原始值差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。對超出檢測線性范圍的高值標本作適當?shù)南♂寱r，稀釋液的酸堿度和電解質(zhì)會影響反應體系中pH值、離子強度，反應介質(zhì)的改變會直接影響反應的結(jié)果，另外稀釋液中的蛋白質(zhì)、脂類、糖類、特有離子等物質(zhì)也會間接的影響抗原抗體的結(jié)合[1]。低值混合血清的pH值、離子強度、蛋白質(zhì)、脂類、糖類等物質(zhì)與待測血清標本基本一致，所以其測定的不同濃度E2與原始值偏差最小，為5.10%，E2專用稀釋液基質(zhì)接近血清，其測定結(jié)果與原始值偏差較小，為-8.01%，兩者偏差在允許范圍內(nèi)，均可以作為高濃度血清E2的稀釋液使用；生理鹽水的pH值、離子強度與待測血清標本相似，但其不含蛋白質(zhì)、脂類、糖類等物質(zhì)，與待測血清標本有較大差異，所以其測定結(jié)果與原始值偏差最大，為-222.10%，超出可允許范圍，說明生理鹽水不可以用于高濃度血清E2的稀釋測定。

不同稀釋液對化學發(fā)光免疫法測定血清E2濃度影響的報道很少，本研究結(jié)果與包安裕等[2]研究結(jié)論有差異，后者各稀釋組與原始值差異進行配對t檢驗，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，生理鹽水稀釋標本得到的E2值與原始值比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)?？赡茉蛉缦拢?1)兩種實驗測量血清E2所用的儀器和試劑不同，測量范圍也不同；(2)兩種實驗研究的標本E2濃度不同，本研究標本E2濃度為2 522～4 793 pg/mL，后者研究標本的E2濃度未明確，但在線性范圍10～1 000 pg/mL。因此，不同儀器、不同試劑檢測E2高值標本稀釋液的選擇可能是不同的，但都需要進行臨床實驗驗證，以確保測定結(jié)果的準確可靠。

在化學發(fā)光免疫法人絨毛膜促腺性激素(HCG)稀釋測定研究中，曾慶洋等[3]認為健康男性混合血清是一種比較理想的稀釋液；也有研究者認為生理鹽水可以作為高值HCG稀釋之用[4-5]。實際工作中生理鹽水也常用于化學發(fā)光免疫法泌乳素、雌三醇等稀釋測定，因此設計方案時沒想到生理鹽水稀釋E2標本的結(jié)果與原始值差異會如此之大；相關性分析時，生理鹽水稀釋組結(jié)果與原始值如此強相關也出乎意料。查閱資料健康男性混合血清E2值可低于20 pg/mL[2]，實驗中對體檢健康男性混合血清進行E2檢測發(fā)現(xiàn)測定數(shù)值為35～65 pg/mL。因此，臨床實驗只有不斷驗證才能得到正確的結(jié)論。

生殖醫(yī)學的醫(yī)生要根據(jù)E2等激素監(jiān)測患者的用藥效果，以便調(diào)整治療措施，要求實驗室檢測結(jié)果快速準確，而E2等激素常隨個體月經(jīng)周期的變化而變化，E2等測定值本身對檢測結(jié)果準確性也有監(jiān)測的作用[6-8]。實際應用中，臨床醫(yī)生發(fā)現(xiàn)有時E2檢測結(jié)果與患者卵泡發(fā)育情況會有偏差，因此，為保證實驗結(jié)果的準確性，實驗室應重視標本分析前、分析中和分析后的質(zhì)量管理，每天做好室內(nèi)質(zhì)控，結(jié)果在控方可審發(fā)報告，定期參加室間質(zhì)控等質(zhì)量控制工作。

綜上所述，化學發(fā)光免疫法檢測E2高值超出線性范圍的標本，不建議使用生理鹽水稀釋標本，在沒有專用E2稀釋液的情況下，可以使用健康男性混合血清稀釋替代(計算結(jié)果需減去混合血清本身的E2濃度)，如果使用回歸方程算出標本E2值，結(jié)果可能更準確。

參考文獻

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*基金項目：江蘇省鎮(zhèn)江市重點研發(fā)計劃社會發(fā)展項目(SH2015073)。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.13.031

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)13-1827-02

(收稿日期：2016-02-05修回日期：2016-04-12)

△通訊作者，E-mail:chenxiaofang369@126.com。