張祖勇

(貴州省興義市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州 興義 562400)

常見動(dòng)物病原學(xué)檢測(cè)樣品活體采集技術(shù)

張祖勇

(貴州省興義市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州 興義 562400)

在動(dòng)物防疫工作中，會(huì)經(jīng)常開展動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)、診斷工作，而病原學(xué)樣品的采集是進(jìn)行動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)、診斷的重要環(huán)節(jié)之一。筆者通過(guò)工作實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，將幾種常見動(dòng)物病原學(xué)樣品活體采樣技術(shù)介紹如下，供參考。

1 豬扁桃體采集

豬扁桃體是一個(gè)極其重要的免疫器官，具有抗細(xì)菌、抗病毒的防御功能，也是多種病原微生物侵襲、定居和復(fù)制的重要場(chǎng)所，采集豬扁桃體樣品，用于監(jiān)測(cè)、診斷常見疫病，具有很強(qiáng)的代表性。

1.1 物品器械 鼻捻子、開口器、采樣槍、無(wú)菌離心管、磷酸鹽緩沖液、無(wú)菌牙簽、2%氫氧化鈉液、清潔水桶、防護(hù)用品。

1.2 采樣前準(zhǔn)備 采樣和保定人員穿戴好防護(hù)用品，加磷酸鹽緩沖液2～3 mL至5 mL無(wú)菌離心管，將采樣槍安裝調(diào)試好，放入2%氫氧化鈉液浸泡消毒5分鐘。

1.3 保定 由2位保定人員取站立保定。一位保定人員用鼻捻子套住豬上頜前1/3部位，可根據(jù)采樣者要求向上提住鼻捻子，使豬頭部上仰30～45°，另一位保定人員跨騎于豬身上方，兩手抓住豬兩耳，用兩腿內(nèi)側(cè)或膝部夾住豬前肢肩胛部，以減少豬活動(dòng)范圍。

1.4 采樣 將消毒的采樣槍用無(wú)菌清水清洗，打開手電筒，左(右)手持開口器(型號(hào)視豬大小而定)，站在豬頭部右(左)側(cè)前方，用開口器平伸進(jìn)豬口腔下壓手柄，使開口器轉(zhuǎn)為豎立，開口器下欄壓住豬舌頭保持不動(dòng)，右(左)手持采樣槍，沿開口器上欄送入豬的咽部，到達(dá)扁桃體位置，使采樣針抵實(shí)扁桃體，迅速扣動(dòng)扳機(jī)進(jìn)行采樣，采樣槍退出口腔，可緩慢釋放扳機(jī)檢查是否已采集到所需樣品(扁桃體為淡粉紅色或肌肉色)，將采集到的樣品放入離心管，蓋緊瓶蓋搖勻。

2 牛、羊O－P液(食道、咽分泌物)采集

2.1 物品器械 開口器、采樣探杯、無(wú)菌離心管、磷酸鹽緩沖液、無(wú)菌棉簽、2%氫氧化鈉液、清潔水桶、防護(hù)用品。

2.2 采樣前準(zhǔn)備 采樣和保定人員穿戴好防護(hù)用品，加磷酸鹽緩沖液2～3 mL至10 mL無(wú)菌離心管，將采樣探杯放入2%氫氧化鈉液浸泡消毒5分鐘。

2.3 保定

2.3.1 牛的保定:柱欄內(nèi)保定或徒手保定。徒手保定(多用于比較溫順的牛)方法:保定者一手抓住牛的一角，另一手拉住牛鼻繩、鼻環(huán)，或用拇指與食指和中指捏住牛的鼻中隔加以固定，并配合采樣者，提高牛的頭部。

2.3.2 羊的保定:由一位保定人員取站立保定。保定人員跨騎于羊身上方，兩手抓住兩角或兩耳，使其頭部上仰貼于保定者腹部后，再用其中1只手托住羊下頜，可用拇指壓迫嘴角，協(xié)助打開口腔，調(diào)整頭部仰角，使口、咽、食道幾乎成直線，保定者兩腿內(nèi)側(cè)或膝部夾住羊前肢肩胛部，以減少羊活動(dòng)范圍。

2.4 采樣 將消毒的采樣探杯用無(wú)菌清水清洗，并倒盡探杯中清水，一手持開口器(型號(hào)視被采樣動(dòng)物大小而定)，站在牛、羊頭部正前方或稍偏向保定者對(duì)側(cè)，用開口器平伸進(jìn)口腔，下壓手柄轉(zhuǎn)為豎立保持不動(dòng)，另一手持采樣探杯，沿開口器上欄伸進(jìn)牛、羊口腔，達(dá)到咽部時(shí)輕輕抽送幾下刺激牛、羊吞咽，順勢(shì)下送探杯進(jìn)入食道上部(牛10～15 cm、羊5～10 cm)，上下抽提3～5次，刺激咽部產(chǎn)生分泌物，取出探杯，將采集的O－P液2～5 mL倒入離心管，蓋緊瓶蓋搖勻。

3 家禽喉拭子和泄殖腔拭子采集

3.1 物品器械 無(wú)菌棉簽、含抗生素的PBS保存液、2 mL離心管、普通剪刀。

3.2 采樣前準(zhǔn)備 采樣和保定人員穿戴好防護(hù)用品，加PBS保存液1～2 mL于無(wú)菌離心管。

3.3 保定 保定人員一手抓住家禽兩翅，一手抓住家禽兩腿，將頭部或泄殖腔朝向采樣者。

3.4 采樣 一手握住家禽頭部，拇指和食指輕捏于對(duì)側(cè)上下喙交界處，打開口腔，一手取無(wú)菌棉簽，插入家禽喉頭轉(zhuǎn)到2～3圈，采集喉拭子;或一手扒開泄殖腔周圍羽毛，一手取無(wú)菌棉簽，插入泄殖腔0.5～1.0 cm轉(zhuǎn)動(dòng)2～3圈，采集泄殖腔拭子，將拭子放入裝有保存液的離心管，剪去露出部分，蓋緊瓶蓋搖勻。

4 注意事項(xiàng)

4.1 采集多頭動(dòng)物樣品時(shí)，采樣槍和探杯必須要重復(fù)消毒清洗。

4.2 用于采樣的采樣槍或采樣探杯最好用與被采樣動(dòng)物體溫接近的溫水清洗，以減少機(jī)體應(yīng)激。

4.3 牛羊O－P液采集前禁食12小時(shí)(可少量飲水)，以避免反芻草料污染樣品。

4.4 采集的扁桃體如果與采樣槍刀槽粘連，可用無(wú)菌牙簽挑至離心管，O－P液如果粘稠無(wú)法倒出，可用無(wú)菌棉簽刮擦，將棉簽剪斷一同放入離心管。

4.5 病原學(xué)樣品24小時(shí)能及時(shí)檢測(cè)的可冷藏保存，不能及時(shí)檢測(cè)的樣品應(yīng)－20℃以下保存。

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