鄒暢，梁灼健，林秀華，趙鑫，何慧燕，劉利平，戴勇

(深圳市人民醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究中心，廣東 深圳 518020)

外周血淋巴細(xì)胞染色體核型分析在男性染色體異常診斷中的作用

鄒暢，梁灼健，林秀華，趙鑫，何慧燕，劉利平，戴勇

(深圳市人民醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究中心，廣東 深圳 518020)

目的 探討外周血淋巴細(xì)胞染色體核型分析對(duì)診斷男性染色體異常的有效性和必要性。方法對(duì)2013年1月至2014年12月期間1 332例臨床有生育異常病史的男性，抽取外周靜脈血3 ml，分離淋巴細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，固定、制片、顯帶，分析染色體核型。結(jié)果在1 332例有生育異常病史的男性中，異常染色體315例，占受檢者的23.65%，包括常染色體異常233例，性染色體異常82例。其中常染色體數(shù)目異常58例，結(jié)構(gòu)異常76例，性染色體數(shù)目異常30例，結(jié)構(gòu)異常10例，染色體多態(tài)性改變141例，分別占異常核型18.41%、24.13%、9.52%、3.18%、44.76%。結(jié)論基于外周血淋巴細(xì)胞的染色體核型分析可及時(shí)發(fā)現(xiàn)生育期男性染色體異常，對(duì)于提升優(yōu)生優(yōu)育水平有非常重要的作用。

男性；外周血；淋巴細(xì)胞；染色體核型分析；診斷

染色體異常疾病無法治療，因此對(duì)出現(xiàn)異常染色體的胎兒及其父母進(jìn)行早期篩查對(duì)于優(yōu)生優(yōu)育具有非常重要的現(xiàn)實(shí)意義[1]。外周血淋巴細(xì)胞染色體核型分析在男性染色體異常疾病檢測(cè)中有無法替代的重要作用[2]。本研究對(duì)在我中心就診的1 332例有異常生育史的男性進(jìn)行了外周血淋巴細(xì)胞核型分析，統(tǒng)計(jì)染色體異常發(fā)生率，研究其在育齡男性染色體異常診斷中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2013年1月至2014年12月來我院遺傳咨詢門診進(jìn)行遺傳咨詢的1 332例男性患者病因包括異常生育史(包括習(xí)慣性流產(chǎn)、胚胎停止發(fā)育、畸形兒生育史)和男性生殖系統(tǒng)異常(原發(fā)不育、無精子癥)以及發(fā)育異常(智力低下及發(fā)育畸形)等。

1.2 外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng) 抽取患者外周靜脈血3 ml，肝素抗凝，以0.3 ml接種于RPMI1640培養(yǎng)基中，在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，收獲前3 h加入終濃度為0.2 mg/ml的秋水仙素，常規(guī)收獲細(xì)胞。

1.3 染色體標(biāo)本制備 標(biāo)本均按我室常規(guī)方法制片，G顯帶，必要時(shí)行C帶和高分辨顯帶，每例鏡下計(jì)數(shù)20個(gè)分裂相，分析4個(gè)分裂相，如有異常加倍分析。

2 結(jié) 果

2.1 1332例男性外周血染色體核型分析 共檢出異常染色體核型315例(23.65%)。其中常染色體異常233例，占異常核型的73.97%；常染色體數(shù)目異常58例，占異常核型的18.41%，常染色體結(jié)構(gòu)異常76例，占異常核型的24.13%。檢出異常性染色體82例，占異常核型的26.03%，其中性染色體數(shù)目異常30例，占異常核型的9.52%，結(jié)構(gòu)異常10例(包括性反轉(zhuǎn)3例)，占異常核型的3.17%，見表1。

2.2 多態(tài)性異常核型分布情況 共檢出染色體多態(tài)性改變141例，占異常核型總數(shù)的44.76%。其中常染色體多態(tài)性改變99例，占異常核型總數(shù)的31.4%，性染色體多態(tài)性改變42例，占異常核型總數(shù)的13.3%。核型分布情況如表2所示。

2.3 染色體結(jié)構(gòu)異常核型分布情況 共檢出染色體結(jié)構(gòu)異常86例，占異常核型總數(shù)的27.3%，其中常染色體結(jié)構(gòu)異常76例，占異常核型總數(shù)的24.13%，核型分布情況如表3所示。

表1 1 332例外周血染色體核型分析異常核型分布情況（例）

表2 染色體多態(tài)性改變核型分布

表3 常染色體結(jié)構(gòu)異常核型分布

3 討 論

本研究在有不良生育史及生理異常的1 332例男性中，檢測(cè)出外周血淋巴細(xì)胞染色體異常315例，檢出率為23.65%，其中包括染色體數(shù)目異常、平衡易位、倒位以及染色體多態(tài)性異常等核型。

染色體結(jié)構(gòu)異常包括易位、倒位、缺失等，其中平衡易位是最多見的染色體結(jié)構(gòu)異常，如不引起基因片段的變化，多數(shù)沒有明顯臨床癥狀[1]。但不平衡易位，由于DNA插入突變，有可能引起整條染色體失活。更有甚者，易位若造成染色體特殊片段的失活，就會(huì)導(dǎo)致流產(chǎn)、胎兒停止發(fā)育，甚至發(fā)育成為一個(gè)嚴(yán)重智力障礙伴先天性畸形的胎兒[1]。

傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為異染色質(zhì)與異常表型無相關(guān)性。近年的研究表明，異染色質(zhì)異常有可能影響減數(shù)分裂時(shí)染色體配對(duì)聯(lián)會(huì)，乃至配子形成，從而導(dǎo)致不孕不育[3-5]。本研究中檢出染色體多態(tài)性123例，其中性染色體多態(tài)性42例，這些就診者大都以生殖異常(流產(chǎn)、性發(fā)育異常)為主，有的還伴隨智力發(fā)育障礙等臨床癥狀，說明染色體多態(tài)性改變可能與生殖異常有相關(guān)性。更有意思的是，有研究表明，常染色體多態(tài)性可能導(dǎo)致異染色質(zhì)的斑點(diǎn)化，可能造成相關(guān)區(qū)域內(nèi)基因表達(dá)抑制，從而引起一系列的生殖異常[6-7]。本研究檢出常染色體多態(tài)性改變81例，其中近一半以上既往有異常生育史。這提示我們，在染色體核型分析檢測(cè)時(shí)特別是對(duì)有異常生育史的男性進(jìn)行核型分析時(shí)，如發(fā)現(xiàn)染色體多態(tài)性改變，應(yīng)該結(jié)合臨床進(jìn)行進(jìn)一步分析，以降低異常生育的發(fā)生，提高優(yōu)生優(yōu)育的水平。

9號(hào)染色體臂間倒位屬于染色體多態(tài)性改變還是結(jié)構(gòu)異常，不同的研究一直有不同的結(jié)論[8]。然而，近年來越來越多的研究報(bào)道，臂間倒位攜帶者伴有遺傳效應(yīng)[9-11]。本次研究我們共檢測(cè)出55例9號(hào)染色體臂間倒位，都是因?yàn)橛蟹磸?fù)流產(chǎn)或死胎等異常生育史來我中心就診，占此類患者的4.2%，明顯高于正常人群發(fā)生率1%[10]，這也提示9號(hào)染色體臂間倒位與臨床生育異常的相關(guān)性。基于本次研究的核型分析結(jié)果和臨床病史分析，我們將9號(hào)染色體臂間倒位歸入染色體結(jié)構(gòu)異常。然而，這種臂間倒位是否是這些異常生育史的直接原因，如果是的話能從多大程度上影響妊娠和生育，需要通過前瞻性的臨床試驗(yàn)研究做更為深入的探討。

胚胎染色體異常是反復(fù)自然流產(chǎn)(Recurrent spontaneous abortion，RSA)主要的發(fā)病原因之一[11]。本研究共從1 332例受檢者中檢出86例染色體結(jié)構(gòu)異常，其中有60例受檢者的配偶有反復(fù)流產(chǎn)生育史，檢出率高達(dá)4.5%，其中Y染色體結(jié)構(gòu)異常10例。這一結(jié)果提示，通過細(xì)胞遺傳學(xué)方法，對(duì)男方進(jìn)行外周血淋巴細(xì)胞染色體核型分析，對(duì)于尋找流產(chǎn)的病因及預(yù)防染色體病兒的出生具有非常重要的臨床意義。

綜上所述，利用細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)進(jìn)行外周血淋巴細(xì)胞染色體核型分析仍是檢測(cè)男性染色體異常的主要方法，對(duì)于智力低下、不良生育史、性發(fā)育異常等疾病的細(xì)胞遺傳診斷具有不可替代的臨床價(jià)值。結(jié)合目前發(fā)展迅猛的分子遺傳學(xué)技術(shù)，基于外周血淋巴細(xì)胞的染色體核型分析在遺傳疾病的早期篩查和優(yōu)生優(yōu)育方面將發(fā)揮越來越重要的作用。

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Roles of chromosomal karyotype analysis of peripheral blood lymphocytes in the diagnosis of male sex chromosome abnormalities.

ZOU Chang,LIANG Zhuo-jian,LIN Xiu-hua,ZHAO Xin,HE Hui-yan,LIU Li-ping,DAI Yong.Clinical Medical Research Centre,People's Hospital of Shenzhen City,Shenzhen 518020,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo explore the significance and necessity of chromosomal karyotype analysis of peripheral blood lymphocytes in the diagnosis of male sex chromosome abnormalities.MethodsA total of 1 332 male patients with a history of abnormal birth history between January 2013 and December 2014 were selected.Peripheral venous blood(3 ml)was extracted,and lymphocytes were isolated,cultured,fixed,and produced,banded for karyotype analysis.ResultsA total of 315 cases of abnormal karyotypes were found in the 1 332 samples,which accounted for 23.65%out of total subjects,including 233 cases of autosomal abnormalities,82 cases of sex chromosome abnormalities.Among autosomal abnormalities,there were 58 cases of chromosome number abnormality and 76 cases of structural abnormality,accounting for 18.41%,24.13%.Among the sex chromosome abnormalities,there were 30 cases of chromosome number abnormality,10 cases of structural abnormality,and 141 cases of chromosomal polymorphism change, which accounted for 9.52%,3.18%,44.76%,respectively.ConclusionKaryotype analysis of peripheral blood lymphocytes could timely detect male sex chromosome abnormality in child-bearing period,which has significant importance for improving the level of prepotency.

Male;Peripheral blood;Lymphocytes;Chromosome karyotype analysis;Diagnosis

R394.2

A

1003—6350（2016）07—1042—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.07.004

2015-11-24)

國家自然科學(xué)基金(編號(hào)：81402370)；廣東省自然科學(xué)基金(編號(hào)：2015A030313829)；深圳市科技創(chuàng)新項(xiàng)目(編號(hào)：JCYJ20150403101028198)

鄒暢。E-mail：alexzou2008@outlook.com