呂 浩 黃 宣 張智熊 高紅梅

（云南省紅河州第一人民醫(yī)院 云南 紅河 661100）

流式細(xì)胞術(shù)是臨床上對(duì)AL患者進(jìn)行免疫分型的重要手段。傳統(tǒng)的FSC/SSC 設(shè)門法無(wú)法準(zhǔn)確地分辨出原始細(xì)胞與正常的成熟細(xì)胞。近年來(lái)，臨床上通常使用CD45/SSC 設(shè)門法對(duì)急性白血病患者進(jìn)行免疫分型。該方法是利用造血細(xì)胞CD45的表達(dá)量與細(xì)胞分化程度之間的關(guān)系來(lái)分辨原始細(xì)胞與正常的成熟細(xì)胞。為了提高對(duì)AL患者進(jìn)行免疫分型的準(zhǔn)確性，我院將該技術(shù)應(yīng)用在AL患者的免疫分型中，取得了較理想的效果。現(xiàn)報(bào)告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究的對(duì)象是2014年3月～2015年 4月期間筆者在長(zhǎng)沙某醫(yī)院進(jìn)修時(shí)收集的初診及從外院送檢的76例AL患者。在這76例患者中,有男性患者40例，女性患者36例。他們的年齡在4～82歲之間，平均年齡為（53.2±6.7）歲。使用FAB分型標(biāo)準(zhǔn)對(duì)這些AL患者進(jìn)行分型，其中，有19例M0/M1患者，有17例 M2患者，有11例M3患者，有4例 M4患者, 有9例M5患者，有8例M6患者，不明確具體分型的患者有8例。

1.2 試劑與儀器

本次研究使用的抗體為Beckman Coulter公司生產(chǎn)的CD45-PC5、MPO-F ITC/cCD79a-PE/cCD3-ECD、IgG1-FITC/IgG1-PE/CD45-PC5、CD3-FITC/CD19-PE/CD45-PC5三色熒光抗體。本次研究使用的溶血?jiǎng)┖推颇┚?gòu)于CALTAG公司。本次研究使用的檢測(cè)儀器為Beckman Coulter EPICSXL 型流式細(xì)胞儀。

1.3 檢測(cè)方法

采集這76例患者的血液標(biāo)本，將其放在EDTA抗凝管中。在100微升的血液樣本中加入20微升的單克隆抗體，將其置于室溫的環(huán)境中孵育，避免陽(yáng)光對(duì)其進(jìn)行直射，孵育的時(shí)間為15分鐘。然后，在血液樣品中添加溶血?jiǎng)瑢?duì)其中的紅細(xì)胞進(jìn)行溶解，并將血液樣本放到離心機(jī)中進(jìn)行離心處理，去掉血清，加入PBS液，對(duì)血液樣品進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的染色處理。使用流式細(xì)胞儀對(duì)這些患者的血液樣本進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)檢測(cè)樣本進(jìn)行光路和流路的校正，將變異系數(shù)控制在2%以下。然后，對(duì)檢驗(yàn)樣本進(jìn)行三色熒光標(biāo)記同型陰性對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管中收集8000個(gè)細(xì)胞，將細(xì)胞分為粒細(xì)胞群、單核細(xì)胞群、淋巴細(xì)胞群、不成熟淋巴細(xì)胞群、不成熟髓細(xì)胞群、紅細(xì)胞群及碎片細(xì)胞群。使用抗原CD34、CD79a、MPO對(duì)這些細(xì)胞群進(jìn)行破膜處理，然后對(duì)其進(jìn)行標(biāo)記。使用CD45/SSC設(shè)門法對(duì)這8000個(gè)細(xì)胞進(jìn)行免疫分型。在進(jìn)行免疫分型的過(guò)程中，如幼稚細(xì)胞群中抗原的表達(dá)細(xì)胞＞20%，則為陽(yáng)性[1]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

我們采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包對(duì)本研究中的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計(jì)量資料用均數(shù)（±s）表示，計(jì)數(shù)資料采用X2檢驗(yàn)。P＜0.01，表示兩組的差異具有顯著性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)本組患者白血病免疫學(xué)表型分布情況的分析

在這76例患者中,有21例ALL患者（占27.6%），有55例AML患者（占72.4%）。

2.2 對(duì)本組中AML、ALL患者CD抗原表達(dá)情況的分析

在本組的55例AML患者中，有28例患者(占50.9%)的免疫學(xué)表型為L(zhǎng)y+AML，有22例患者(占40.0%)的免疫學(xué)表型為淋系抗原CD7，有3例患者(占5.5%)的免疫學(xué)表型為CD8，有1例患者(占1.8%)的免疫學(xué)表型為CD19，有1例患者(占1.8%)的免疫學(xué)表型為CD10。在本組的21例ALL患者中，有6例患者(占28.6%)的免疫學(xué)表型為L(zhǎng)y+AML，有7例患者(占33.3%)的免疫學(xué)表型為My+ALL，有6例患者（占28.6%）的免疫學(xué)表型為髓系抗原CD13，有1例患者（占4.8%）的免疫學(xué)表型為CD33，有1例患者（占4.8%）的免疫學(xué)表型為CD14。在本組的55例AML患者中，與其他免疫學(xué)表型的患者所占的比例相比，免疫學(xué)表型為L(zhǎng)y+AML的患者所占的比例較高，差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。在本組的21例ALL患者中，與其他免疫學(xué)表型的患者所占的比例相比，免疫學(xué)表型為My+ALL的患者所占的比例較高，差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01)。

2.3 對(duì)本組中ALL患者B細(xì)胞系、T細(xì)胞系CD抗原表達(dá)情況的分析

在本組的21例ALL患者中，有17例患者（占81.0%）B細(xì)胞系CD抗原的表達(dá)呈陽(yáng)性（其中cCD79a的表達(dá)最高，其次為CD10、CD20），有4例患者（占19.0%）T細(xì)胞系CD抗原的表達(dá)呈陽(yáng)性（均為cCD3、CD7）。

3 討論

近年來(lái)，臨床上通常使用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)急性白血病患者進(jìn)行免疫分型，這對(duì)確保此病患者的臨床診治及預(yù)后具有重要意義[2]。有研究發(fā)現(xiàn)，該技術(shù)能準(zhǔn)確、直觀地量化白血病患者細(xì)胞表面抗原的表達(dá)情況，具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)[3]。

總之，用多色流式細(xì)胞術(shù)對(duì)AL患者進(jìn)行免疫學(xué)表型分析的效果顯著。此檢測(cè)方法值得在臨床上推廣應(yīng)用。

[1] 沈紅強(qiáng), 湯永民, 楊世隆,等. 多色流式細(xì)胞術(shù)在 222例兒童急性.白血病免疫分型中的應(yīng)用[J] . 中華兒科雜志, 2003,41(5) : 334- 337.

[2] 林茂芳, 楊惠英, 少華, 等. 雜合性急性白血病( 附 13例報(bào)告 )[J] . 實(shí)用腫瘤雜志, 1995, 10(3) : 148.

[3] 劉艷榮, 付家瑜, 常艷, 等. C D 117在白血病免疫分型中的意義[J] . 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2000, 23(4) : 211-213.