郭芳 王升 張琰 陳院朝

(河南省安陽地區(qū)醫(yī)院 血液科 河南 濮陽 455000)

流式細(xì)胞術(shù)在急性白血病微量殘留測定中的應(yīng)用分析

郭芳 王升 張琰 陳院朝

(河南省安陽地區(qū)醫(yī)院 血液科 河南 濮陽 455000)

目的 流分析式細(xì)胞術(shù)在急性白血病微量殘留(MRD)檢測中的應(yīng)用價(jià)值。方法 選取2012年1月至2014年7月河南省安陽地區(qū)醫(yī)院收治的86例急性白血病患者，其中急性髓細(xì)胞白血病54例、急性淋巴細(xì)胞白血病32例，自誘導(dǎo)緩解后每次化療前行骨髓穿刺檢查，標(biāo)本經(jīng)流式細(xì)胞儀分析，根據(jù)初次免疫分型結(jié)果行MRD測定，MRD≥0.1%為MRD陽性標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果 MRD陽性患者復(fù)發(fā)率高于MRD陰性者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。自發(fā)現(xiàn)急性白血病MRD陽性至疾病復(fù)發(fā)的時間為1～12個月，多數(shù)病例在發(fā)現(xiàn)急性白血病MRD陽性4個月左右出現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)學(xué)復(fù)發(fā)。結(jié)論 流式細(xì)胞術(shù)測定MRD能夠預(yù)測疾病預(yù)后。

急性白血病；微量殘留；流式細(xì)胞術(shù)

急性白血病是一類造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病，在治療過程中容易復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)后無論選擇化療還是骨髓移植的治愈率均明顯下降，因此需要一些檢測手段來預(yù)測疾病的預(yù)后，指導(dǎo)治療方案的選擇，提高治愈率[1]。白血病微量殘留(minimal residual disease，MRD)檢測是通過各種方法檢測體內(nèi)剩余白血病細(xì)胞數(shù)量。目前MRD檢測主要有兩種方法，一種是白血病基因檢測，另一種是流式細(xì)胞術(shù)檢測。白血病基因檢測是檢測引起白血病的特殊基因從而了解白血病細(xì)胞數(shù)量多少。目前因已知引起白血病的基因較少，這種檢測手段受到限制。流式細(xì)胞術(shù)檢測是通過檢測細(xì)胞表面分子識別白血病細(xì)胞，從而了解體內(nèi)白血病細(xì)胞數(shù)量多少的一種方法，這種方法幾乎適合90%以上的白血病患者。本文就流式細(xì)胞術(shù)在急性白血病MRD檢測中的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行分析，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月至2014年7月河南省安陽地區(qū)醫(yī)院收治的86例急性白血病患者(排除失訪者及多次誘導(dǎo)化療不緩解者)，其中急性髓細(xì)胞白血病54例，包括FAB分型的M0～M6各型，急性淋巴細(xì)胞白血病32例，包括T和B淋巴細(xì)胞白血病。患者年齡為3～73歲，中位年齡46歲。所有病例均符合FAB和WHO關(guān)于急性白血病的診斷和分類標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 檢測方法 所有患者在急性白血病診斷時均已行白血病免疫分型檢查。自誘導(dǎo)緩解治療1個療程開始，每次化療前于髂后上棘行骨髓穿刺，骨髓液經(jīng)EDTA或肝素抗凝，溶血素溶解紅細(xì)胞后在顯微鏡下計(jì)數(shù)有核細(xì)胞數(shù)。加入熒光素標(biāo)記的抗體，充分混勻后室溫避光孵育30 min，洗滌后應(yīng)用五色流式細(xì)胞儀(Beckman公司)行白血病MRD檢測，MRD≥0.1%為陽性，<0.1%為陰性。所有患者均觀察至2016年7月或患者疾病細(xì)胞形態(tài)學(xué)復(fù)發(fā)(原幼細(xì)胞>5%)為止。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析及處理，定性資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

誘導(dǎo)緩解治療達(dá)到完全緩解后，流式細(xì)胞術(shù)監(jiān)測到MRD陽性病例共21例，其中11例白血病復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為52.38%；MRD陰性病例共59例，其中復(fù)發(fā)10例，復(fù)發(fā)率為16.95%。MRD陽性患者復(fù)發(fā)率高于MRD陰性者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。自發(fā)現(xiàn)急性白血病MRD陽性至疾病復(fù)發(fā)的時間為1～12個月，多數(shù)病例在發(fā)現(xiàn)急性白血病MRD陽性4個月左右出現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)學(xué)復(fù)發(fā)。

3 討論

在急性白血病的治療過程中迫切需要發(fā)現(xiàn)一種或幾種能有效預(yù)測白血病轉(zhuǎn)歸的方法，指導(dǎo)臨床治療方法的選擇。流式細(xì)胞術(shù)檢測MRD病灶是上世紀(jì)90年代前后發(fā)展起來的，最初用于體外實(shí)驗(yàn)和動物實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹饕獮榱私馑幬锏雀鞣N治療方法的效果及疾病本身的性質(zhì)[1-3]，隨著實(shí)驗(yàn)的成功，逐漸應(yīng)用于人類，用途也有所改變，開始應(yīng)用其測量白血病微量殘留病灶。

本文就流式細(xì)胞儀在急性白血病MRD檢測中的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行研究。從研究對象上來說，本研究具有普遍性，主要表現(xiàn)在研究對象年齡分布從3歲至73歲，按照FAB分類有急性髓細(xì)胞白血病(M0～M6型)、急性淋巴細(xì)胞白血病T細(xì)胞系及B細(xì)胞系，實(shí)驗(yàn)結(jié)論基本適用于各類人群。既往關(guān)于流式細(xì)胞術(shù)測定MRD預(yù)測患者疾病轉(zhuǎn)歸的研究中往往選擇幾個測量點(diǎn)，如白血病完全緩解后、化療第8、15、33天等時間點(diǎn)進(jìn)行MRD測定[2]。本文是對患者進(jìn)行全程MRD監(jiān)測，可以看到，誘導(dǎo)緩解治療達(dá)到完全緩解后，無論何時出現(xiàn)MRD陽性，均有可能出現(xiàn)疾病復(fù)發(fā)，而不僅限于選取的測量點(diǎn)，從研究數(shù)據(jù)上看，很多病例MRD值逐漸上升，如果能早期發(fā)現(xiàn)MRD值陽性，通過改變治療方法可能避免疾病復(fù)發(fā)，而選點(diǎn)測量法可能漏掉最佳測量點(diǎn)。曾有文獻(xiàn)報(bào)道誘導(dǎo)緩解治療1個療程后MRD即轉(zhuǎn)為陰性的患者預(yù)后明顯好于MRD陽性患者[3]。本研究經(jīng)誘導(dǎo)緩解治療1個療程后，疾病的轉(zhuǎn)歸與MRD陰性與否無關(guān)，分析原因可能因本文病例數(shù)偏少所致，也可能誘導(dǎo)緩解治療緩解深度確實(shí)與疾病最終轉(zhuǎn)歸無關(guān)，這仍需要進(jìn)一步研究證實(shí)。本研究還觀測到MRD陽性至白血病細(xì)胞形態(tài)學(xué)復(fù)發(fā)(原幼細(xì)胞數(shù)大于5%)間隔時間為1～12個月，多數(shù)復(fù)發(fā)在MRD陽性4個月左右，與既往報(bào)道的觀測結(jié)果[4]基本一致，這個時間差就給一部分患者通過檢測MRD值及時改變治療策略爭取了機(jī)會。

雖然流式細(xì)胞術(shù)在檢測急性白血病微量殘留，判斷疾病預(yù)后中有一定作用，但是研究過程中我們也發(fā)現(xiàn)一些問題。理論上，流式細(xì)胞術(shù)檢測MRD精確度可以達(dá)到0.01%，但各個實(shí)驗(yàn)室實(shí)際精確度卻有所不同[5]，還需要統(tǒng)一的實(shí)驗(yàn)室規(guī)范，以利于交流及更好地進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，MRD陽性與白血病復(fù)發(fā)有相關(guān)性，理論上能夠預(yù)測疾病的轉(zhuǎn)歸，研究中發(fā)現(xiàn)部分患者M(jìn)RD陽性至觀察終點(diǎn)，疾病仍處于細(xì)胞形態(tài)學(xué)完全緩解中，而另有一少部分患者M(jìn)RD陰性疾病復(fù)發(fā)，這就可能出現(xiàn)一部分患者過度治療而另一部分患者因未能及時調(diào)整治療方案而影響治療效果。研究表明MRD陽性至疾病復(fù)發(fā)多數(shù)在4～5個月，但間隔時間為1～23個月不等，少數(shù)患者即使頻繁監(jiān)測MRD持續(xù)陰性，但仍存在疾病突然復(fù)發(fā)等一系列問題，這些都需要進(jìn)一步研究，使流式細(xì)胞術(shù)測定急性白血病MRD預(yù)測疾病轉(zhuǎn)歸更具有實(shí)用性。

[1] 吳韶清,廖燦,謝閨娥,等.多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)在兒童急性B淋巴細(xì)胞白血病微量殘留病檢測中的應(yīng)用[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2012,28(7):1184-1186.

[2] 陳軍浩.流式細(xì)胞術(shù)在臨床及科研中的應(yīng)用[J].臨床檢驗(yàn)雜志,2012,30(10):861-864.

[3] 王亞哲,劉艷榮,主鴻鵠,等.多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測急性髓系白血病微量殘留病的預(yù)后意義[J].中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志,2009,17(3):551-556.

[4] 陳樹輝,黎紹仕.流式細(xì)胞術(shù)在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用進(jìn)展[J].中國實(shí)用醫(yī)藥,2008,3(24):187-189.

[5] 劉鑫,龐鐵光.流式細(xì)胞術(shù)在白血病和淋巴瘤診斷中的應(yīng)用[J].內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2010,25(3):347-350.

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10.3969/j.issn.1004-437X.2016.12.113

2016-03-26)