傅英昳

哈藥集團世一堂制藥廠 150000

宮血停顆粒質(zhì)量標準的探究

傅英昳

哈藥集團世一堂制藥廠 150000

目的：明確宮血停顆粒的質(zhì)量控制方法。方法：以TLC法對整機中的墨旱蓮和益母草進行鑒別，并以HPLC-ELSD法對制劑中的黃芪甲苷進行含量測定。結(jié)果：通過含量測定，黃芪甲苷在0.20-2.50μg之間保持良好的線性關(guān)系，宮血停顆粒中黃芪甲苷的平均回收率為101.0%，RSD值為1.7%。結(jié)論：此種鑒別方式在實際應用中能夠?qū)崿F(xiàn)準確高效分離，具有簡便性和有效性，在宮血停顆粒的質(zhì)量評價中具有良好的應用價值。

宮血停顆粒；薄層色譜法；HPLC-ELSD

宮血停顆粒是一種中藥復方制劑，主要由黃芪、升麻、黨參、益母草以及當歸等組成，在臨床上具有補益脾腎、活血化瘀的功效，在氣虛血瘀所導致的月經(jīng)過多以及崩漏等方面具有較好的臨床治療效果。為了對宮血停顆粒進行有效的質(zhì)量控制，本文就此展開實驗亞久，建立薄層色譜鑒別方法，并采用HPLC-ELSD法對黃芪甲苷進行含量測定，以明確宮血停顆粒的質(zhì)量控制方法，從而保證藥品質(zhì)量，提高臨床用藥安全性。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

本次實驗研究中，以HP1100高效液相色譜儀、蒸發(fā)光散射檢測器作為主要實驗儀器，并進行空氣泵、電子天平等配合開展實驗研究。

1.2 樣品

以選自哈藥集團世一堂制藥有限公司的宮血停顆粒作為實驗樣品，樣品共10個批次。

1.3 試劑與試藥

在本次實驗研究中，流動相試劑為色譜純，其余試劑與試藥均為分析純。旱蓮苷A對照品、（批號111886-201001）墨旱蓮對照藥材（批號958-200203）鹽酸水蘇堿對照品（批號110712—2000508）益母草對照藥材（批號120912-200306）黃芪甲苷對照品（批號0781—200311）來源：均購自中國藥品生物制品檢定所。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

為保證墨旱蓮鑒別準確性，在實際操作過程中取含量測定項下供試品溶液5批作為供試品溶液，將適量甲醇加入旱蓮苷A對照品中，制成標準含量的對照品溶液，其規(guī)格為每1ml含有0.5mg旱蓮苷。之后，取墨旱蓮對照材料2g，加入標準比例乙醇進行超聲處理，待45min后濾過，取續(xù)濾液作為對照藥材溶液。取含量按A對照品2.5mg以及宮血停顆粒2.5g，加以處理后制成加樣回收溶液。取墨旱蓮對照藥材2g制成供試品后，依照含量測定方法制成陽性供試品溶液。在此基礎(chǔ)上，依照處方量比例制成宮血停顆粒，其中不含墨旱蓮，依照供試品溶液制備方式制成陰性供試品溶液。

按照《中國藥典》2010年版中的薄層色譜發(fā)開展試驗，取所制備10種溶液各5μl，滴于同一硅膠G薄層板上，選用二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水作為展開劑，將溶液展開后取出晾干，并噴以標準比例的硫酸乙醇溶液，在105℃條件下加熱處理，5分鐘后取出，于日光下對其質(zhì)量進行檢查。通過觀察對比可知，供試品溶液、陽性供試品溶液、加樣回收溶液色譜中，其與墨旱蓮對照藥材、旱蓮苷A對照品色譜相應位置上所顯斑點顏色相同，陰性供試品溶液對墨旱蓮藥材的鑒別不存在干擾情況。

在益母草鑒別過程中，取本品2.5g（無糖型），加70%乙醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml使溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1～2，通過732鈉型陽離子交換樹脂柱（內(nèi)徑為2cm，柱高為15cm），用水洗脫至洗脫液無色，棄去洗脫液，再用氨溶液（2→13）250ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加70%乙醇5ml使溶解，作為供試品溶液。取鹽酸水蘇堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。取益母草對照藥材2g，按供試品處理方法，制成對照藥材溶液。同時，按處方量比例制成不含益母草的宮血停顆粒，然后按供試品溶液制備方法制成陰性供試品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以丙酮—無水乙醇—鹽酸（10：6：1）為展開劑，展開，取出，晾干，在105℃加熱15分鐘，放冷，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘干，噴以稀碘化鉍鉀試液-1%三氯化鐵乙醇溶液（10：1）混合溶液至斑點顯色清晰，晾干。供試品色譜中，在與益母草對照藥材，鹽酸水蘇堿對照品色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，處方中其他成分對益母草藥材的鑒別無干擾。

2.2 含量測定

在本次實驗研究中開展含量測定相關(guān)操作時，應當明確色譜條件，以十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑，選用乙腈-水（32:68）作為流動相，以蒸發(fā)光散射器作為主要檢測器進行檢測。依照實驗標準以黃芪甲苷對照品作為主要材料，加入適量甲醇后制備出標準含量的對照品溶液。在此基礎(chǔ)上，取宮血停顆粒5g，加入甲醇溶液，并進行回流、放冷、濾過等凡是進行處理，將濾液蒸干殘渣加水溶解，飽和后進行振搖提取，合并正丁醇液，以氨試液洗滌后，將正丁醇液蒸干，加甲醇加入殘渣內(nèi)進行溶液轉(zhuǎn)移，再加甲醇進行搖勻、濾過，取出濾液，即可得到供試品溶液。密吸取對照品溶液 2μl，5μl，供試品溶液 10μl，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法對數(shù)方程計算。

按處方量比例制成不含黃芪的宮血停顆粒，然后按照供試品溶液制備方法制成陰性供試品溶液，按上述色譜法測定，結(jié)果表明宮血停顆粒中其他成分對黃芪甲苷的測定無干擾。精密量取對照品溶液5μl，重復進樣5次測定峰面積，RSD值為1.1%（n=5）。在穩(wěn)定性試驗方面，取供試品溶液，隔2h進樣1次，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，計算含量，RSD值為 1.3%，顯示黃芪甲苷在至少14h內(nèi)穩(wěn)定。

之后開展重復性試驗，取同一批號樣品（1107507）6份，分別按樣品含量測定法測定峰面積，計算含量，結(jié)果RSD值為2.4%（n=6）。在回收率試驗過程中，精密稱定已知含量樣品的宮血停顆粒6份（批號1107507），精密加入黃芪甲苷對照品溶液1.00ml，按含量測定法測定得峰面積，并計算含量，平均回收率為101.0%，RSD值為1.7%。

通過線性分析可知，黃芪甲苷在 0.20～2.50μg之間，其對數(shù)值與峰面積的對數(shù)值呈良好的線性關(guān)系。就其范圍來看，取宮血停顆粒9份，取樣量分別為含量限度計算樣品取樣量的0.5、1、1.5倍（批號1107507），按含量測定法對9份樣品分別進行含量測定，測定結(jié)果的RSD值為1.8%。在此基礎(chǔ)上開展樣品含量測定，按含量測定法對10批樣品分別進行黃芪甲苷含量測定，測定結(jié)果為每袋1.73～2.24mg之間。

3 討論

3.1 流動相的選擇

通過實驗研究可知，在C18柱色譜條件下，溶劑系統(tǒng)所使用乙腈-水（36：65）作為流動相，并未獲得理想的分離效果，而采用乙腈-水（32:68）黃芪甲苷與并存雜質(zhì)的分離效果明顯，對實驗研究的進一步開展具有重要意義。

3.2 耐用性

在本次實驗研究中，通過對三種型號不同的色譜柱進行對比分析，可知三種色譜柱的分離效果較好，三種色譜柱型號分別如下：Waters Symmetry C18 5μm4.6*250mm；DikmaC18 5μ m4.6*250mm；AgilentExtendC18 5μm4.6*150mm。

3.3 供試品處理方法的研究

在本次實驗研究中，取相同批次宮血停顆粒作為對象，依照含量測定標準對處理方法和時間進行調(diào)整，依據(jù)測定結(jié)果進行觀察和分析可知，在標準的供試品處理方法下，能夠獲得較好的回流超聲效果，并且在不同的回流時間下，實際超聲效果存在的差異較小，因此在宮血停顆粒質(zhì)量控制過程中，在供試品的處理上，可以以1小時為最佳回流時間。

[1]王憲平，張勝波，筆雪艷，張清波 宮血停顆粒質(zhì)量標準的研究[J].《黑龍江醫(yī)藥》,2013, 26(3):382-385

[2]謝守蘭，李煒，馮敏，王海亮 HPLC-ELSD法測定宮血停顆粒中黃芪甲苷的含量[J].《西北藥學雜志》, 2008, 23(3): 148-149

R286

A

1672-5018（2016）09-313-01