任彥微，宋其生，陳宇飛

（大連市結(jié)核病醫(yī)院，大連 116033）

T-SPOT.TB在肺外結(jié)核診斷應(yīng)用價(jià)值

任彥微，宋其生，陳宇飛

（大連市結(jié)核病醫(yī)院，大連 116033）

目的：探討T-SPOT.TB（結(jié)核感染T細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)）在肺外結(jié)核診斷應(yīng)用價(jià)值。方法：收集在我院就診肺外結(jié)核患者84例作為研究對象，同時(shí)選取非結(jié)核病患者20例作為對照，比較不同患者中T-SPOT. TB檢測陽性率和ESAT-6和CFP-10的SCF數(shù)量的差異；比較T-SPOT.TB、TB-Ab和ESR檢查診斷肺外結(jié)核的效能比較。結(jié)果：肺外結(jié)核T-SPOT.TB檢測陽性率（85.71%）明顯高于非結(jié)核疾病組（10.0%），且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肺外結(jié)核組ESAT-6和CFP-10的SCF數(shù)量分別為39（0-180）和27（0-125）顯著高于非結(jié)核疾病組的SCF數(shù)量為6（0-35）和5（0-27），且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。T-SPOT.TB診斷肺外結(jié)核的靈敏度85.71%、特異度90.0%、準(zhǔn)確率86.54%；TB-Ab診斷肺外結(jié)核的靈敏度67.86%、特異度70.0%、準(zhǔn)確率68.27%；ESR診斷肺外結(jié)核的靈敏度54.76%、特異度60.0%、準(zhǔn)確率55.77%；T-SPOT.TB診斷肺外結(jié)核的診斷效能優(yōu)于TB-Ab和ESR。結(jié)論：T-SPOT. TB在肺外結(jié)核中的陽性率高于非結(jié)核患者，T-SPOT.TB診斷肺外結(jié)核有較好的靈敏度和特異度。

結(jié)核感染T細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)；肺外結(jié)核；診斷價(jià)值

肺外結(jié)核是指發(fā)生在肺部以外器官的結(jié)核病，多繼發(fā)于肺內(nèi)初次感染肺結(jié)核后經(jīng)淋巴及血型途徑至肺外臟器或其他部位［1］。由于肺外結(jié)核病的發(fā)病部位不同，其臨床表現(xiàn)多不典型，且由于人類免疫缺陷病毒（HIV）感染的流行，肺外結(jié)核以及其他播散性結(jié)核病患者的發(fā)病率明顯增多［2］。由于結(jié)核分枝桿菌的檢出率較低，且診斷較為困難，因此肺外結(jié)合的誤診、漏診率較高［3］。結(jié)核感染T細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)（T-cell SPOT test technology，T-SPOT.TB）作為近年來興起的細(xì)胞免疫功能檢測技術(shù)，具有靈敏度高、特異性好的優(yōu)點(diǎn)，逐漸成為結(jié)核病診斷及研究的熱點(diǎn)［4］。為此，本研究針對（結(jié)核感染T細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)）在肺外結(jié)核診斷應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行探討。現(xiàn)將研究結(jié)果總結(jié)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料收集在我院就診肺外結(jié)核患者84例作為研究對象，年齡在19～78歲；平均年齡（47.64± 15.42）歲，男性51例，女性33例；病例入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）根據(jù)患者的臨床表現(xiàn)，細(xì)菌學(xué)，影像學(xué)和組織病理學(xué)確診為肺外結(jié)核；（2）所有患者均接受了T-SPOT.TB、TBAb和ESR檢查，結(jié)果保存完整；（3）本研究符和醫(yī)學(xué)倫理，與所有患者簽訂了知情同意書。病例排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）HIV檢測陽性的患者；（2）合并有腫瘤、矽肺等疾病的患者；（3）妊娠期婦女與于排除。同時(shí)選取無結(jié)核病史、臨床和影像學(xué)檢查無陳舊性結(jié)核疾灶的非結(jié)核病患者20例作為對照，年齡在16～73歲；平均年齡（45.85 ±12.17）歲，男性51例，女性33例；兩組患者的一般資料無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

1.2 臨床資料84例肺外結(jié)核患者中結(jié)核性胸膜炎30例，結(jié)核性腦膜炎18例，結(jié)核性淋巴結(jié)炎24例，結(jié)核性腹膜炎4例，骨關(guān)節(jié)結(jié)核3例，泌尿生殖系統(tǒng)結(jié)核3例，腸道結(jié)核2例。20例非結(jié)核病患者中，惡性胸腔積液7例，病毒性腦炎4例，支氣管擴(kuò)張6例，肺部慢性炎癥3例。

1.3 樣本采集方法抽取實(shí)驗(yàn)組和對照組患者的空腹肘靜脈血8ml，加入含枸櫞酸鈉的CPT管內(nèi)置于3000r/ min的離心機(jī)中離心28min，并將單個(gè)細(xì)胞層從CPT管中轉(zhuǎn)移到無菌尖底離心管中。加入10mLAIM-V的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)后進(jìn)行離心，去上清液，加入1mlAIM-V 后使細(xì)胞沉淀，取培養(yǎng)液10mL，置于離心機(jī)中離心7分鐘，去上清。加入0.7mL AIM-V培養(yǎng)液重旋細(xì)胞，稀釋后進(jìn)行計(jì)數(shù)，并調(diào)整細(xì)胞懸液的濃度至2.5×106/ml。

1.4 T-SPOT.TB、TB-Ab和ESR檢測方法將肝素鈉抗凝血進(jìn)行密度梯度離心，并將外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）進(jìn)行洗滌。將洗滌的PBMCs與結(jié)核特異性抗原一同加入至預(yù)包被抗r-干擾素抗體培養(yǎng)孔中，并于37℃的二氧化碳中孵育16～20小時(shí)。洗滌后加入標(biāo)記二抗后孵育1小時(shí)，洗滌后加入顯色液，加入蒸餾水終止反應(yīng)。顯色后1個(gè)斑點(diǎn)相當(dāng)于1個(gè)效應(yīng)T細(xì)胞?？乖瑼或抗原B檢測孔的斑點(diǎn)數(shù)-陰性孔斑點(diǎn)數(shù)≥6為陰性。TB-Ab的檢測膠體金法，其操作嚴(yán)格按照TBAb試劑盒（江蘇晶美生物科技有限公司生產(chǎn)）。ESR的檢測采用魏氏法，并使用血沉儀進(jìn)行檢測。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析數(shù)據(jù)用SPSS16.0軟件進(jìn)行，檢測陽性率、診斷效能指標(biāo)用百分率（%）表示，組間比較用卡方檢驗(yàn)；ESAT-6和CFP-10的SCF數(shù)量用中位數(shù)和四分位間距表示，組間比較用秩和檢驗(yàn)；P＜0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 肺外結(jié)核病與非結(jié)核病T-SPOT.TB檢測結(jié)果比較 肺外結(jié)核T-SPOT.TB檢測總的陽性率為85.71%，其中結(jié)核性胸膜炎90.0%，結(jié)核性腦膜炎77.78%，結(jié)核性淋巴結(jié)炎87.50%，其它肺外結(jié)核83.33%；非結(jié)核疾病組T-SPOT.TB檢測陽性率為10.0%；肺外結(jié)核T-SPOT.TB檢測陽性率明顯高于非結(jié)核疾病組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。見表1。

表1 肺外結(jié)核病與非結(jié)核病T-SPOT.TB檢測結(jié)果比較

2.2 肺外結(jié)核病與非結(jié)核病ESAT-6和CFP-10的SCF數(shù)量比較肺外結(jié)核組ESAT-6和CFP-10的SCF數(shù)量分別為39（0-180）和27（0-125）顯著高于非結(jié)核疾病組的SCF數(shù)量為6（0-35）和5（0-27），且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 肺外結(jié)核病與非結(jié)核病ESAT-6和CFP-10的SCF數(shù)量比較

2.3 T-SPOT.TB、TB-Ab和ESR三種檢測方法的診斷效能比較T-SPOT.TB診斷肺外結(jié)核的靈敏度85.71%、特異度90.0%、陽性預(yù)測值97.30%，陰性預(yù)測值60.0%，準(zhǔn)確率86.54%；TB-Ab診斷肺外結(jié)核的靈敏度67.86%、特異度70.0%、陽性預(yù)測值90.48%，陰性預(yù)測值34.15%，準(zhǔn)確率68.27%；ESR診斷肺外結(jié)核的靈敏度54.76%、特異度60.0%、陽性預(yù)測值85.19%，陰性預(yù)測值24.0%，準(zhǔn)確率55.77%；三種檢測方法的靈敏度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、準(zhǔn)確率的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 T-SPOT.TB、TB-Ab和ESR三種檢測方法的診斷效能比較（%）

3 討論

肺外結(jié)核是一種多系統(tǒng)、多種類、多部位的結(jié)核性，本研究收治的84例肺外結(jié)核病例主要存在于結(jié)核性胸膜炎，結(jié)核性腦膜炎，結(jié)核性淋巴結(jié)炎，結(jié)核性腹膜炎，骨關(guān)節(jié)結(jié)核，泌尿生殖系統(tǒng)結(jié)核及腸道結(jié)核為主。由于人類免疫缺陷病毒（HIV）感染的流行，肺外結(jié)核以及其他播散性結(jié)核病患者的發(fā)病率明顯增多。由于肺外結(jié)核所在的位置不同，其臨床表現(xiàn)存在差異及復(fù)雜性，其診斷需要根據(jù)醫(yī)者的臨床經(jīng)驗(yàn)、輔助檢查以及治療效果進(jìn)行綜合分析，因此肺外結(jié)合的診斷具有一定困難［5］。目前應(yīng)用于肺外結(jié)核的診斷主要依賴于病理組織學(xué)及影像學(xué)等手段，螺旋CT及磁共振技術(shù)雖然在骨關(guān)節(jié)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)等肺外結(jié)核的診斷中應(yīng)用較為廣泛，但費(fèi)用較高，增加了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［6-7］。病理活檢以及外科手段是確診結(jié)核的重要方式，但創(chuàng)傷較大，因此在適應(yīng)癥及操作技術(shù)上有較高的要求［8］。

結(jié)核感染T細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)（T-cell SPOT test technology，T-SPOT.TB）作為近年來興起的細(xì)胞免疫功能檢測技術(shù)，根據(jù)感染結(jié)核分枝桿菌的機(jī)體內(nèi)存在結(jié)核特異性極易T淋巴細(xì)胞，當(dāng)再次遇到結(jié)核特異性抗原刺激時(shí)，可轉(zhuǎn)化為效應(yīng)T細(xì)胞，進(jìn)而釋放干擾素-γ，ESAT-6以及CEP-10［9-10］。ESAT-6及CEP-10是結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群基因RD1區(qū)域編碼的結(jié)核特異性蛋白抗原，可使MTB感染的T細(xì)胞誘導(dǎo)出較強(qiáng)的干擾素-γ［11］。T-SPOT.TB即是根據(jù)上述原理設(shè)計(jì)出的具有靈敏度高、特異性好的檢測結(jié)核抗原特異性T淋巴細(xì)胞技術(shù)，是目前TIGRA診斷結(jié)核感染的主要方式［12］。Vanessa［13］等研究顯示，T-SPOT.TB在免疫力低下患者中具有較高的診斷效能，且在肺外結(jié)核的診斷中具有較高的敏感性。本研究結(jié)果顯示，肺外結(jié)核T-SPOT.TB檢測陽性率明顯高于非結(jié)核疾病組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述研究結(jié)果顯示，感染結(jié)核患者體內(nèi)的結(jié)核感染效應(yīng)T細(xì)胞明顯高于非結(jié)核感染患者，因此，T-SPOT.TB在診斷是否有結(jié)核分枝桿菌的診斷中具有較強(qiáng)的特異性［14］。另外，肺外結(jié)核組ESAT-6和CFP-10的SCF數(shù)量顯著高于非結(jié)核疾病組的SCF數(shù)量，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分析其原因，與ESAT-6及CEP-10作為結(jié)核特異性蛋白抗原，可使MTB感染的T細(xì)胞誘導(dǎo)出較強(qiáng)的干擾素-γ有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，T-SPOT.TB診斷肺外結(jié)核的靈敏度85.71%、特異度90.0%、準(zhǔn)確率86.54%；與國內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道基本一致［15］。另外，T-SPOT.TB的檢查結(jié)果與患者是否排菌、排菌量的多少以及排菌的類型無關(guān)，因此減少了結(jié)核的漏診率，因此可作為結(jié)核病早期診斷的有效輔助方法。TB-Ab診斷肺外結(jié)核的靈敏度67.86%、特異度70.0%、準(zhǔn)確率68.27%；ESR診斷肺外結(jié)核的靈敏度54.76%、特異度60.0%、準(zhǔn)確率55.77%；T-SPOT.TB診斷肺外結(jié)核的診斷效能優(yōu)于TB-Ab和ESR。上述研究結(jié)果顯示，TB-Ab以及ESR的檢測的檢測對于結(jié)核并的診斷敏感性及特異性雖然較低，但在今后的臨床工作中可將三者結(jié)合，進(jìn)而為結(jié)核病的診斷提供重要的支持。

綜上所述，T-SPOT.TB在肺外結(jié)核中的陽性率高于非結(jié)核患者，T-SPOT.TB診斷肺外結(jié)核有較好的靈敏度和特異度，在肺外結(jié)核的診斷及鑒別診斷中具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值，可為臨床醫(yī)生節(jié)省診斷時(shí)間及一些不必要的檢查項(xiàng)目，進(jìn)而更加合理的運(yùn)用醫(yī)療資源，減少患者的負(fù)擔(dān)，以更好的防治結(jié)核病。

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Application value of T-SPOT. TB in extrapulmonary tuberculosis diagnosis

Ren Yan-wei, Song Qi-sheng, Chen Yu-fei

(Dalian Tuberculosis Hospital, Dalian 116000, China)

ObjectiveTo evaluate the application value of T-SPOT. TB in extrapulmonary tuberculosis diagnosis.Methods84 cases of extrapulmonary tuberculosis patients was collected in our hospital as the research object, 20 cases of the nontuberculosis patients was selected as control at the same time, To compare the differences among patients with the positive detection rate of T-SPOT. TB and the number of ESAT-6 and CFP-10；ResultsExtrapulmonary tuberculosis of T-SPOT. TB positive detection rate (85.71%) was significantly higher than that in the non-tuberculosis disease group (10.0%), and the difference is statistically significant. The number of SCF in ESAT-6 and CFP-10 of extrapulmonary tuberculosis group [39 (0-180) and 27(0-125)] was significantly higher than the non-tuberculous disease group [6(0-35) and 5 (0-27)], and the difference is statistically significant. The sensitivity of T-SPOT. TB diagnostic extrapulmonary tuberculosis was 85.71%, the specificity was 90%, the accuracy was 86.54%； The sensitivity of TB-Ab diagnostic extrapulmonary tuberculosis was 67.86%, the specificity was 70%, the accuracy was 68.27%； The sensitivity of ESR diagnostic extrapulmonary tuberculosis was 54.76%, the specificity was 60%, the accuracy was 55.77%； The diagnostic efficacy of T-SPOT. TB for extrapulmonary tuberculosis was better than that of TB-Ab and ESR.ConclusionThe positive rate of T-SPOT. TB in extrapulmonary tuberculosis is higher than that of non-tuberculosis patients, T-SPOT. TB diagnosis of pulmonary tuberculosis has good sensitivity and specificity.

T-SPOT. TB； Extrapulmonary tuberculosis； Diagnosis value

R52

A

1673-016X（2016）06-0114-04

2016-07-05

任彥微，E-mail：1139771895@qq.com