劉 瓊，劉 蜜

（1.湖南師范大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南省人民醫(yī)院，長沙 410006；2.湖南省交通醫(yī)院，長沙 410000）

血清學(xué)診斷ABO新生兒溶血病的實(shí)驗(yàn)研究

劉 瓊1，劉 蜜2

（1.湖南師范大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南省人民醫(yī)院，長沙 410006；2.湖南省交通醫(yī)院，長沙 410000）

目的：了解長沙地區(qū)ABO血型新生兒溶血病（HDN）的發(fā)病情況，探討血清學(xué)三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)在診斷新生兒溶血病中的臨床價(jià)值，為該病的早期預(yù)防、早期診斷和臨床治療提供依據(jù)。方法：收集中南大學(xué)湘雅醫(yī)院2016年1月～7月產(chǎn)科和新生兒科疑似母嬰ABO血型不合的新生兒血液標(biāo)本，對其進(jìn)行ABO血型檢測及新生兒溶血病血清學(xué)三項(xiàng)試驗(yàn)（直接抗人球蛋白試驗(yàn)、游離抗體試驗(yàn)和紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)）。結(jié)果：在583例檢測結(jié)果中，確診為新生兒溶血病的有145例，發(fā)病率為24.87%。其中男性患兒80例，發(fā)病率為25.64%，女性患兒65例，發(fā)病率為23.98%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；A型血患兒90例，O-A型母嬰血型模式的發(fā)病率為54.88%，B型血患兒55例，O-B型母嬰模式的發(fā)病率為41.35%，差異顯著。145例HDN中直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性38例，陽性率26.21%，游離抗體試驗(yàn)陽性76例，占52.41%，紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)陽性144例，陽性率為99.31%，三者比較存在著顯著的差異性。結(jié)論：長沙地區(qū)ABO新生兒溶血病發(fā)病率為24.87%，男性新生兒和女性新生兒的發(fā)病率無差異性，O-A母嬰血型發(fā)病率高于O-B母嬰血型。血清學(xué)三項(xiàng)試驗(yàn)是臨床最常用的診斷新生兒溶血病的方法，其中紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)敏感度最高，游離抗體試驗(yàn)次之，直接抗人球蛋白試驗(yàn)敏感度最低。血清學(xué)診斷為ABO新生兒溶血病的早期預(yù)防、早期診斷和臨床治療提供依據(jù)。

新生兒溶血??；ABO；紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)；直接抗人球蛋白試驗(yàn)；游離抗體試驗(yàn)

ABO血型新生兒溶血?。╤emolytic disease of the new-born，HDN）指的是母嬰ABO血型不合時(shí)母親體內(nèi)產(chǎn)生與胎兒或新生兒血型抗原不相容的IgG抗A抗體或IgG抗B抗體，并通過胎盤屏障到達(dá)胎兒血液循環(huán)引起胎兒或新生兒發(fā)生溶血的同族免疫性疾病。到目前為止，已發(fā)現(xiàn)的多種血型系統(tǒng)均能引起新生兒溶血病的發(fā)生，其中以ABO血型系統(tǒng)的新生兒溶血病發(fā)病最為常見。據(jù)統(tǒng)計(jì)在所有新生兒溶血病中，ABO型HDN約占85%［1］。ABO-HDN多發(fā)于O型血產(chǎn)婦，主要表現(xiàn)為新生兒黃疸、肝脾腫大和不同程度的貧血等，血清膽紅素在短時(shí)間內(nèi)迅速上升。嚴(yán)重者有嗜睡、厭食等癥狀，甚至發(fā)生膽紅素腦病或死亡［2］。因此，ABO型新生兒溶血病的產(chǎn)前檢查和出生后新生兒血清學(xué)檢測對于該病的預(yù)防和早期診斷尤其重要。血清學(xué)檢測是指新生兒溶血病的血清學(xué)三項(xiàng)檢測，包括直抗（直接抗人球蛋白）試驗(yàn)、游離（血清游離抗體檢測）試驗(yàn)、放散（紅細(xì)胞釋放抗體檢測）試驗(yàn)，是診斷新生兒溶血病最常見的試驗(yàn)方法［3］。本文收集了中南大學(xué)湘雅醫(yī)院2016年1月～7月疑似母嬰ABO血型不合的583例新生兒的血清學(xué)檢測結(jié)果，對其進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象中南大學(xué)湘雅醫(yī)院2016年1月～7月疑似母嬰ABO血型不合的583例新生兒血液標(biāo)本。

1.2 主要試劑及儀器低離子抗人球微柱凝膠檢測卡，標(biāo)準(zhǔn)ABO紅細(xì)胞，低離子介質(zhì)，上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供的抗A、抗B血型定型試劑，金壇市國旺實(shí)驗(yàn)儀器廠提供的420數(shù)顯三用恒溫水箱。孵育箱（Incubator 37 SⅠ）和離心機(jī)（Centrifuge 12 SⅡ）。

1.3 方法

1.3.1 新生兒ABO血型鑒定新生兒由于體內(nèi)抗A抗B抗體沒有產(chǎn)生，ABO血型鑒定采用試管法只檢測正定型，不做反定型。取潔凈小試管2支，分別標(biāo)明抗A和抗B，加抗A和抗B分型血清各1滴于細(xì)胞底部，再分別加受檢者3 ～5%紅細(xì)胞懸液1滴混勻，1000r/min離心1 min觀察有無凝集。如肉眼不見凝集，將反應(yīng)物倒置在玻片上，在顯微鏡下觀察，判斷血型并記錄。

1.3.2 血清學(xué)三項(xiàng)檢測實(shí)驗(yàn)新生兒溶血病的血清學(xué)三項(xiàng)檢測參照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》［4］進(jìn)行，三項(xiàng)試驗(yàn)包括直接抗人球蛋白試驗(yàn)（DAT）、血清游離抗體試驗(yàn)、紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)（采用熱放散法）。

1.3.3 HDN診斷標(biāo)準(zhǔn)［9］當(dāng)血清學(xué)三項(xiàng)試驗(yàn)中任意兩項(xiàng)或三項(xiàng)結(jié)果均為陽性時(shí)診斷為HDN陽性，若只有一項(xiàng)結(jié)果為陽性則只能取放散試驗(yàn)陽性結(jié)果時(shí)診斷為HDN陽性。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法數(shù)據(jù)分析采用SPSS17.0軟件進(jìn)行處理，采用χ2檢驗(yàn)對結(jié)果進(jìn)行比較分析，當(dāng)P＜0.05時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

583例疑似母嬰ABO血型不合的新生兒血液標(biāo)本中，確診為新生兒溶血病的有145例，發(fā)病率為24.87%。其中男性患兒80例，發(fā)病率為25.64%，女性患兒65例，發(fā)病率為23.98%，兩者經(jīng)卡方檢驗(yàn)P值大于0.05（χ2=0.21，P=0.645），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見表1。

表1 HDN陽性結(jié)果在不同性別新生兒中的發(fā)病率

在145例確診為ABO型新生兒溶血病的患兒中，A型血患兒90例，O-A型母嬰血型模式發(fā)病率為54.88%，B型血患兒55例，O-B型母嬰血型模式發(fā)病率為41.35%。O-A和O-B兩種母嬰血型模式發(fā)病率經(jīng)χ2檢驗(yàn)后得到的P值小于0.05（χ2=5.376，P=0.020），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明在ABO型新生兒溶血病中，O-A母嬰血型較O-B母嬰血型模式的HDN發(fā)病率高。詳見表2。

表2 O-A和O-B母嬰血型HDN陽性結(jié)果分布

血清學(xué)三項(xiàng)試驗(yàn)均為陽性者34例，占23.45%；游離和放散實(shí)驗(yàn)均為陽性的71例，占48.97%；直抗和放散實(shí)驗(yàn)均為陽性的3例，占2.07%；單獨(dú)放散試驗(yàn)陽性的病例數(shù)是36，占24.83%；直抗和游離實(shí)驗(yàn)均為陽性的1例，占0.69%。游離和放散實(shí)驗(yàn)陽性、三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)均陽性和單獨(dú)放散實(shí)驗(yàn)陽性是最主要的檢出模式，占97.25%。145例HDN中直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性38例，陽性率26.21%，游離抗體試驗(yàn)陽性76例，陽性率52.41%，紅細(xì)胞釋放抗體試驗(yàn)陽性144例，陽性率為99.31%。三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中以紅細(xì)胞抗體放散實(shí)驗(yàn)診斷新生兒溶血病的靈敏度最高，游離抗體實(shí)驗(yàn)次之，直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)靈敏度最低，三者經(jīng)卡方檢驗(yàn)后，P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表3。

表3 145例HDN陽性患兒的血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

3 討論

本實(shí)驗(yàn)以ABO新生兒溶血病為研究對象，是因?yàn)锳BO型母體妊娠時(shí)新生兒溶血病的發(fā)病率最高，適合小范圍的結(jié)果統(tǒng)計(jì)。結(jié)果表明，ABO新生兒溶血病的發(fā)病率為24.87%。新生兒溶血病發(fā)病率在男性新生兒和女性新生兒中沒有差別，與多數(shù)研究的結(jié)果一致。HDN在O-A型母嬰血型模式中發(fā)病率為54.88%，O-B型母嬰血型模式的發(fā)病率為41.35%，兩種母嬰血型模式發(fā)病率經(jīng)卡方檢驗(yàn)后得到的P值小于0.05，說明O-A母嬰血型較O-B母嬰血型的HDN發(fā)病率更高。有研究［10，11］報(bào)道，由于胎兒紅細(xì)胞上的A型抗原決定簇比B型抗原決定簇的數(shù)量更多，并且A型抗原比B型抗原的免疫原性更強(qiáng)，更易誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)道。因此在ABO-HDN中，O-A母嬰血型模式更容易發(fā)生新生兒溶血病，與本研究的結(jié)論一致。但也有文獻(xiàn)報(bào)道［12］，O-A模式與O-B模式這兩者之間并無顯著差異。分析可能原因一是研究的不是大樣本數(shù)據(jù)，存在局限，樣本不具有代表性。二是不同地區(qū)人群中ABO血型分布比例存在著差異性。紅細(xì)胞上抗原與血清中抗體的結(jié)合是可逆的，如果改變某些物理?xiàng)l件，如加熱等抗體又可以從結(jié)合的紅細(xì)胞上放散下來，再以相應(yīng)的紅細(xì)胞鑒定放散液內(nèi)抗體的種類并測定其強(qiáng)度，用以判定原來紅細(xì)胞上抗原的型別，這就是抗體放散實(shí)驗(yàn)。常用于ABO亞型的鑒定、類B血型的鑒定和新生兒溶血病的診斷。血清學(xué)三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果顯示，在確診的新生兒溶血病例中，直抗試驗(yàn)，游離試驗(yàn)和放散試驗(yàn)的陽性率分別是26.21%，52.41%和99.31%，抗體放散試驗(yàn)診斷新生兒溶血病的靈敏度大于游離試驗(yàn)和直抗試驗(yàn)。放散試驗(yàn)是血清學(xué)三項(xiàng)試驗(yàn)中診斷新生兒溶血敏感度最高的指標(biāo)。

有文獻(xiàn)報(bào)道僅根據(jù)新生兒紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(yàn)（DAT）確診新生兒溶血病，但目前普遍認(rèn)為此項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果靈敏度低，一般不能憑借單項(xiàng)DAT試驗(yàn)陽性即做出新生兒溶血病的診斷結(jié)果。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果看出，145例確診的新生兒溶血病直抗陽性的僅僅只有38例，另外107例確診病例直抗實(shí)驗(yàn)均為陰性。如果僅根據(jù)直抗實(shí)驗(yàn)陽性來診斷新生兒溶血病，會遺漏很多的病例。

新生兒溶血病是臨床上造成新生兒死亡的一個(gè)重要因素，其發(fā)病機(jī)制為母嬰血型不合，孕母體內(nèi)IgG類血型抗體通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，胎兒紅細(xì)胞被母親的同種抗體所包被，造成胎兒發(fā)生以溶血為主要損害的一種被動免疫性疾病［16-18］。臨床表現(xiàn)為黃疸、肝脾腫大和不同程度的貧血，血清膽紅素在短時(shí)間內(nèi)迅速上升，嚴(yán)重者發(fā)生膽紅素腦病甚至死亡。新生兒溶血病主要見于ABO型母嬰血型不合，ABO-HDN往往只有出現(xiàn)黃疸、核黃疸、溶血性貧血等典型臨床表現(xiàn)時(shí)才得到臨床確診，但此時(shí)的病情已經(jīng)開始惡化，嚴(yán)重影響治療效果，給我國新生兒健康造成巨大威脅。因此，對妊娠期婦女進(jìn)行相關(guān)產(chǎn)前診斷以及產(chǎn)后新生兒的血清學(xué)三項(xiàng)檢查是非常必要的，有助于新生兒溶血病的早期預(yù)防、早期診斷和早期治療。對于我國優(yōu)生優(yōu)育，提高人口素質(zhì)非常必要。新生兒出生后及時(shí)監(jiān)測膽紅素及血清學(xué)三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)診斷為新生兒溶血病，24～48小時(shí)內(nèi)膽紅素水平持續(xù)性升高，并伴有明顯黃疸癥狀，應(yīng)立即予以積極治療。血清學(xué)三項(xiàng)試驗(yàn)的結(jié)果應(yīng)與臨床相結(jié)合，做到及早診斷，及時(shí)評估，選擇最佳治療方案使患者病情得到及時(shí)控制，降低危險(xiǎn)性［19-22］。光療法是降低膽紅素最簡單有效的方法，發(fā)現(xiàn)膽紅素水平達(dá)到光療標(biāo)準(zhǔn)時(shí)及時(shí)進(jìn)行光療。也有研究者認(rèn)為靜脈注射丙種免疫球蛋白可作為治療新生兒溶血病的常規(guī)方法，但目前尚未得到臨床認(rèn)［17，23］。糾正貧血和平衡電解質(zhì)紊亂也是治療HDN的有效措施，只有個(gè)別嚴(yán)重者需進(jìn)行換血治療。

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The study of ABO Hemolytic Disease of the Newborn in serological diagnosis testABSTRACT

Liu Qiong1, Liu Mi2

(1. The First Affiliated Hospital of Hunan Normal University, Hunan Provicial People's Hospital, Changsha 410006, China;
2. Traffic Hospital of Hunan Province, Changsha 410000, China)

ObejectiveTo understand the morbidity of ABO hemolytic disease of the newborn in Changsha, discuss the clinical significance of three serologic tests to diagnose the ABO hemolytic disease of the newborn and provide evidences for the early prevention, early diagnosis and clinical treatment of the disease.MethodsCollecting the total of 583 cases of maternofetal ABO incompatibility from January 2016 to July in Xiangya Hospital of Central South University. The ABO blood group and serologic tests were determined.ResultsThere are 145 cases of HDN in the total of 583 blood samples with the incidence 24.87%. The number of male children was 80 (25.64%) and female children was 65(23.98%). There was no significance difference in their incidences. In 145 cses of ABO-HDN with positive result in 90 cases with O-A incompatible pregnancies (54.88%), 55 cases with O-B incompatible pregnancies (41.35%), as a result, there were differences between these two blood group and the incidence of type A was higher than type B. In 145 cases of ABO-HDN, the direct antiglobulin test (DAT) with positive result was 38(26.21%), free antibody test was 76 (52.41%) and the RBC antibody release test was 144(99.31%). There were differences among the three serological tests.ConclusionThe morbidity of ABO-HDN in changsha is about 24.87%. No difference was found between the male children and female children. The three serological hemolytic tests are the most important methods for diagnosis of ABO-HDN, in which the most sensitive is RBC antibody release test, followed by free antibody test and DAT. The three serologic tests are helpful in the early prevention, early diagnosis and clinical treatment of the disease.

hemolytic disease of newborn； ABO； RBC antibody release test； DAT； free antibody test

R722.1

A

1673-016X（2016）06-0017-04

2016-08-10

劉瓊，E-mail：396788418@qq.com